NY∕T 3081-2017 番茄抗番茄黄化曲叶病毒鉴定技术规程(农业).pdf
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1、ICS 65.020 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3081-2017 番茄抗番茄黄化曲叶病毒鉴定技术规程Rule for evaluation of tomato resistance to tomato yellolV leaf curl virus 2017 -06-12发布2017 -10-01实施气;、中华人民共和国农业部发布前本标准按照G!T1. 1二2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业笆理司提出。本标准由全国蔬菜标准化技术委员会CSAC/TC467)归口。本标准起草单位。中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本标准主要起草人。谢丙炎、冯兰香、杨字红、茹振)1 1
2、、陈国华、凌挝、杨翠荣。NY! T 3081-2017 l NY/ T 3081-2017 番茄抗番茄黄化曲叶病毒鉴定技术规程范围本标/11规定了番茄抗番茄1ft化rll111-病毒(/OI1/0!OyelLow leaf curL viru . .;)的鉴定方法和评价方法。本标叫i适用于所有番茄(SoLal/l川Ly户U川cumL)品种及材料抗番77i1黄化1111叶病毒的室内鉴定及抗性评价。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件.其最新版本(包括所有的修改-y1)适用于本文件。G/ T 6682 分析
3、实验室用水规格5fn试验方法3 术语和定义NY/ T 1858.7界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 番茄黄化曲叶病毒IOmaW yellow leal cllrl lirllS, TYLCV 属 于双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花il-r病毒1m.(BegoJllvirus)病苟-粒体为双联体结构,向两个不完整的二十面体组成,无包膜。是一种通过炯粉虱和l嫁接传播,可严重危害多种双子il十植物的童安病毒。3.2 番茄黄化曲叶病(oma(o yellow leaf ClIrI disease, TYLCD 111番茄i黄化II11叶病毒引起的番茄i病毒病害。病在i金I
4、fJr参见附录/,注1束?可窑的主要症状是病时明血变小、皱销.Ilit问变筑、111缘鲜政.111片卷1111呈杯状或f,l状,m株严巫矮化顶部形似菜花状。4 试if1J与材料除|非另有说明,本方法所用试开IJ均为分析纯,水为GB/T6682中规定的三级7J(,4.1 MS培养基4. 1. 1 MS液体培养基称取MS干粉u飞1519)4.13g泊湖!f30g,1J11水定容至1000mL.搅拌均匀并济化后.调节pl-I:如5. 8! 于121(高压灭茵30min,4(下似有一备j抖。4. 1. 2 MS固体培养基称且MS干粉(M519)4.43 g、煎:jj!f30 g、JJ.脂粉9g.1m水
5、定容至1000mL,搅拌均匀fj游化后,调节pJ-l为5.8,干121(高压灭菌30min,4(下保存备用。4.2 YEP培养基4.2. 1 YEP 液体培养基称且1民蛋白j陈10g、酵母提取物lOg、1化1115 g. 1111水950mL,)刊5moll L氢氧化例熔l调节pH为7.0定容至1000mL,于121(高JT.灭j!f30 min,4C下保存备J+J。4.2.2 YEP固体培养基NY /1 3081-2017 称取)J9蛋白)陈10g、酵l过提取物10g、氯化创5g、脂粉9g,!m水950mL,用5mol/ L氢氧化制济液调节pH为7.0定容至100001L.于121C高压灭菌
6、30min . 4 C下保存备用。4. 3 抗生素母液4. 3. 1 卡那霉素母液(50mg/mL) 称取250mg卡那篇素.溶人5O1L 7)(中后,在超净台内注入501L的一次性注射然中,经硝酸纤纬索)J草(于L径。.2201)过Jf灭菌.JJ得50mg/01L卡那每京:每液。分装到5个灭菌的2mL冷冻管里,每笆101L,直2C8C冰箱中保存,可使用1个月;或20C长期保存。4.3.2 利福平母液(50mg/mL) 称收250mg利很平于EP但净台内注入501L的一桶平l寻液。分装到514.3.3 Zl!i先丁香丽母事-F取98.1 O1g j台内注入501L乙5 5. 1高灭菌凰加热器。
7、5.2 超净工洁净等级0.25 m/ sO 5. 3 恒温培养箱括:泪范围,5C5. 4 植物生长箱温度范围,OC50C170卢刚/(m.s)两阳光!R;5. 5 超低温冰箱7昆控范围-60C一105C ,功率1200W,除声63d, 5. 6 恒温摇床,再加水定容至5mL,然后在超口除菌,即配成5001g/01L和l个月。501L,然后在MJZ 100 010101/ L l:Ff.fl 1个月。法电) ,平均风速.。mol/(m2.s)时控制或连续运行。回旋频率?I应用30r/ min600 r/ O1in,回旋频率精度:I:lr/min;摇板摆振幅度26mm;且控范围,5C60C,温度均
8、匀皮:1:0.5C;环境混度要求,5C30C。5. 7 冷冻台式离心机最大容ii):,6mLX85 mL,最高转速30000r/ min,最低转速100r/01in,且皮范围20C40C。5. 8 可见分光光度计l!d王范围200nm 1 000 nm, i1!i:主精度:1:1.0 III币。2 NY/ T 3081-2017 6 对照晶种与种子消毒6. 1 对照品种以Money-maker或中蔬6号等易感病的番五ii品种,作为感病对J!H品种。6. 2 种子消毒所有番茄品种和材料的种子经灭茵水浸泡12 h后,再依次经70%乙醉表面消毒30s、20%次氯酸纳浴液(含0.1%1吐温-20)浸泡
9、15min.最后用灭菌水冲击:5次6次,1111芽播种。7 烟粉虱接种鉴定7.1 适用范围烟粉虱接种鉴定比注本方法较易受到判为抗病。72 人工病固建在防由加1毒烟和虱带毒烟粉虱株幼苗。定期间不得施用7.5 病情调查7. 5. 2 病情级别划分接种植株的病情级别内。育到感病数值后.p 表1番茄抗番茄黄化幽叶病毒烟粉虱接种鉴定的病情级别划分病如!级别症状描述O 无可见症状顶端叶片的边缘轻蚀黄化或卷Ilh2 少数叶片的边缘或1Ii问轻度黄化、部分病叶轻做卷1111,顶端叶片变小3 多数叶片的边缘或脉间重度放化、叶缘上翘病叫卷1111、顶端叶片显若变小,植株轻!主矮化4 ?在株叶片严京变小、1JJ.化
10、、上翘、卷1111节问捕短,植株蓝度矮化,甚至停止生长7. 5. 3 调查方法3 NY/T 3081-2017 根据接种植株的病情级别及其相对应的症状tlW述,调查所有接种植株的发病情况d己载每lfl株的病ItI级)11.;)1一计算每份鉴定材料的病i附指数(01), 3次重复病情指数的平均值。病情指数(o)按式(1)计算.式中。0/ 病情指数,各病情级别的代表数值,了(sX 11) 0/=土兰一一一 X100 ,. (l) NXS 11 各病情级别的植株数,单位为株,N 调查总植株数,单位为株;5 最高病Iei级别的代表数值。7. 6 抗病性评价7.6. 1 评价标;佳依据待鉴定番茄3次重复
11、的病情指数平均值确定其抗性水平礼1I:51-标准I;表2。表2番茄对番茄黄化曲叶病毒抗性的评价标准病占指数(o/)抗病怕评价。;0/15t1f( Highly rcsistant( I-IR) 15() 1 30 打UI市Re:o;i!wnt(R)30/)155 中抗Moderatelyresisli1nt(MR) 550177 E虫病Sm;ciptiblc(S)77:三011001 !:吕J-lighlysusc巳pribleCI-IS) 7. 6. 2 鉴定有效性判别当!惑病对!哥材料达到其中J!I感病程度(0/二三55),该批次鉴定视为有效。7. 6. 3 鉴定材料处理鉴定完毕后,1自f
12、Yj杀灭室内烟粉虱,并将人工病刷1所有的番mtil株及残体进行无害化处理。7.6.4 鉴定记载表格番茄l抗番茄黄化rll1叶病毒鉴定结果记载表格参见表C.LB iE室僵染性克隆农杆菌接种鉴定8.1 适用范围本方法无街饲养烟粉虱,其操作简便、快速、1ft确,适用于具有番茄i黄化rth叶病毒呈染性克隆农杆茵茵株的单位大规棋鉴定o8. 2 接种毒源接种毒源为番茄黄化IIIWI病蒜侵染性克|坠农杆茵茵株,可参J!lB. 2的方法自行制备,也可从相关单位引进。8. 3 制备农杆菌接种体将冻存的番茄1黄化1111nl病毒侵染性克陈农杆茵茵株按中l至含卡刀jC再素100mg/ L和l利福平50 mg/ LJ
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