NY∕T 2294.1-2012 细菌微生物农药 蜡质芽孢杆菌 第1部分:蜡质芽孢杆菌母药(农业).pdf
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1、ICS 65.020.01 B 15 中华人民共和国农业行业标准NY/ T 2294.1一2012细菌微生物农药蜡质芽抱杆菌第1部分:蜡质芽抱杆菌母药Bacterial pesticides-Bacillus cere刷一Part 1: Bacillus cereus technical concentrates (TK ) 2012-12-24发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 2294.1-2012 前言NY/ T 2294细菌微生物农药蜡质芽抱杆菌为系列标准,分为两部分:一第1部分蜡质芽抱杆菌母药s第2部分蜡质芽抱杆菌可湿性粉剂.本部分为NY/T2294的第l部
2、分.本部分按照GB/T1. 1给出的规则起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位:农业部农药检定所、中国农业大学.本标准主要起草人z袁善奎、姜辉、J西莉、崔晓岚、黄中乔、林荣华、瞿唯钢、王一信、张宏军、王以燕。i NY/T 2294.1-2012 1 范围细菌微生物农药蜡质芽抱杆菌第1部分:蜡质芽抱杆菌母药本部分规定了细菌微生物农药蜡质芽抱杆菌母药的要求、试验方法、检验与验收以及标志、标签、包装、贮运.本部分适用于以芽抱为主要活性成分的粉状蜡质芽抱杆菌母药。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用
3、是必不可少的凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/ T 191 包装储运图示标志GB/ T 1601 农药pH值的测定方法GB/ T 1604 商品农药验收规则GB/ T 1605 商品农药采样方法GB 3796农药包装通则GB/ T 8170- 2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/ T 16150一1995农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件.3. 1 蜡质芽抱杆菌母药Bacillus cereus techni曲Iconcentrates(TK) 白蜡质芽
4、抱杆菌纯菌种经发酵而获得的高含量芽抱菌粉,通常情况下还会包含伴随发酵过程的少量生物组分利化学杂质。3. 2 菌落形成单位lony formi吨units(CFU)是将蜡质芽抱杆菌母药用水稀释后得到的菌液通过涂布的方法,让其单个芽抱分散在琼脂平板上,待培养后每活芽抱形成一个菌落,即一个菌落形成单位(CFU),通过肉眼观察菌落的数量来推算单位微生物农药样品中的活芽抱含量。3.3 杂菌鼓nwnber of microbiaJ con阳ninati拥蜡质芽抱杆菌母药样品检测中,除蜻质芽抱杆商菌落以外的其他微生物菌落数之和。3. 4 杂菌率fr明uencyof microbiaJ contarninat
5、ion 蜡质芽于包杆菌母药样品中除枯草芽抱杆菌外,其他菌(真菌和细菌等)量占总商量的百分率.3.5 贮存稳定性storage stability 1 NY!T 2294. 1-2012 蜡质芽抱杆菌母药在室温和(或低于室温下贮存一定时间后,产品的活菌数占其标明值的相对百分率.4 要求4. 1 外观通常为浅灰色或浅棕色粉状物,由于发酵基质的不同颜色偶有差异,但必需为均匀疏松的粉末,不可有团块。4.2 指标蜡质芽抱杆菌母药质量控制项目指标应符合表1的要求.表1蜡质芽抱杆菌母药质量控制项目指标项目指标吉泡盘.CFU/g1. OXI010 杂菌率.%3 pH 5.0- 8.0 细度(通过4 5m筛).
6、% 二主90干燥减盘.%运6贮存稳定性.%主主80为定期检验项目,3个月检测一次.5 试验方法除另有说明,本方法所用试剂均为化学纯及以上,所述溶液均为水溶液。5. 1 抽样按照GB/T1605规定进行样品的采袋,用随机数表法确定抽样的包装件,最终抽样量不少于100 g.采样时必须特别注意样品的代表性和避免污染,采样容器和采样工具必须经过消毒灭菌,样品采集后应立即进行检验,若不能立即检验,可贮存在4C冰箱中.5. 2 菌种鉴别根据代表菌株的形态学和生理生化特征进行菌种鉴别,并可辅助脂肪酸分析、Biolo日、16SrRNA基因序列分析等手段。当对鉴*1结果有争议或需要进行法律仲裁检验时,应到具有菌
7、种鉴定资质的单位,将待检菌株与模式商种进行比对,出具菌种鉴定报告,作为仲裁依据。有效成分的特征参见附录A。鉴别方法见附录B。5. 3 含范量测定5. 3. 1 方法提要采用平板菌落讨数法,即将母药润湿、稀释后,均匀涂布在培养基平板上,待各芽抱商体形成菌落后,统计菌荡总数,以单位样品(g)中的菌落形成单位数(CFU)表示活芽于包含量(CFU/g). 5. 3. 2 试剂和溶液5. 3. 2 1 试剂Tween-20或TritonX -100; 5. 3. 2. 2溶液,0.05%Tween -20或0.05%Triton X - 100. 5. 3. 3 仪器、设备5. 3. 3. 1 天平:精
8、度为0.01g。5. 3. 3. 2 移液器,20L200L.200Ll000 11. 5. 3. 3. 3 高压蒸汽灭菌糕。5. 3. 3. 4 超净工作台。NY/T 2294. 1-2012 5.3. 3. 5 恒温振荡器。5. 3. 3. 6 恒温培养箱。5.3.4 实验步骤5. 3. 4. 1 样晶的准备在无商操作条件下,将样品搅拌均匀,准确称取3.0g样品,溶入27.0mL的含0.05%Tween -20 或0.05% Triton X -100的无菌水中浸泡30min后,振荡30min,得到稀释10倍的样品溶液,标记为0号.然后参照表2(以稀释8次为例)进行梯度稀释.褒2梯度稀释示
9、例编号o I 2 3 4 5 6 7 8 灭菌水体积.mL27.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 加入上一稀释浓度溶液的体积.mL1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 累计稀释倍数10-1 10-1 10-3 10-4 10.; 10 10-7 10-8 10-9 5. 3. 4. 2 涂板计敛将上述各梯度稀释液分别吸取100L于NA平板上,并用曲玻棒均匀涂布在整个平板表面,每一稀释度做3次重复,然后置于30C下培养24h-48 h后,选择适宜的稀释度,取菌落数在30个-300个之间的平板进行计数。53. 5 菌落总戴的计算方法5.
10、3. 5. 1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,则计算该稀释度3个重复平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应的稀释倍数,作为每E母药中的菌落数.如第7号稀释度3个平板的商落数(CFU)分别为100、99、101.则该母药的含抱量为:N=(lOO+99十101)/3J X 10 X10=. OX 10CFU/ g 5 3. 5. 2如有两个连续稀释度的平板菌落数均在适宜计数范围之内,则按式(1)计算.N = C/ Cl X n, + O. 1 X n,) X O. 1 X dJ. . . . . . . . .(1) 和之数落、U菌W板FM? rww盯数数落落菌菌的围中范U宜以适
11、za含样(位板单平HC 亦NZn, 一一第l个适宜稀释度的调查平板数;一-第2个适宜稀释度的调查平板数3一一第1稀释度的稀释因子。n, d 示例:如果第l稀释度00-勺的菌落数(CFU)为220、215、210.第2稀释度(10-9)的菌落数(CFU)为30、32、34.则根据式(1)计算zN = (220+215+210十30+32+34)/0X 3 + 0.1 X 3) X O.1 X lO-llJ = 2.24 X 10CFU/ g 5. 4 杂菌率测定按5.3方法进行测定,选择NA培养基检测样品中的细菌杂菌;选择PDA培养基检测样品中的真菌杂菌.然后统计总的可见杂茵茵落数量,杂菌率按式
12、(2)计算。X 一旦L土旦,=100. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (幻N, + N,十N,式中zX一一杂菌率,单位为百分率C%);3 NY!T 2294. 1-2012 N1一一细菌杂茵茵落数的总和,单位为CFU,N, 真菌杂茵茵落数的总和,单位为CFLJ,问一一有效成分枯草芽抱杆菌菌落数总利,单位为CFU.5.5 pH的测定按GB(T1601的规定进行测定.5. 6 细度的测定按GB(T16150一1995中2.2的规定进行测定。5. 7 干燥减量5. 7. 1 仪器、设备5.
13、7.1.1 扁形称盘瓶直径40mmj5.7. 1.2 电热干燥箱:控温范围(50C-200C),误差士2C, 5. 7. 1. 3 干燥器。5.7.2 试验步禀称取试样10g(精确至1mg),置于预先恒童的称盘瓶中,将此瓶放入105C士2C的电热恒温干燥箱内干燥,1h后取出,在干燥器中冷却至室温,称章。5.7.3 测定结果干燥诚量按式(3)计算。式中w=旦二坐上X100. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (3) m W一一干燥减茧,单位为百分率(%), m一一试样的质量,单位为克(g), ml一一干燥后试样的质量,单位为克(g) 5.
14、8 贮存稳定性5. 8. 1 方法提要将试样密闭放置于5C贮存24个月或20C-25C贮存12个月后,对含抱量迸行测定,计算其占标明值的百分率,要求不低于80%。5.8.2 仪器、设备5.8.2. 1 冰箱。5.8.2.2 恒温箱z控温范围(0C-50C),控温误差士2C。5. 8. 2. 3 玻璃瓶带有密封盖或瓶寨,能充分保证其密封性.5.8.3 试验步骤将20g试样放人玻璃瓶中,使其铺成平滑均匀层,密封后置于5C冰箱中放置24个月或20C-25C恒温箱中放置12个月后按5.3方法测定样品中的含抱茧,并计算其占标明值的百分率.6 产品枪验与验收应符合GB(T1604规定。极限值的处理应按GB
15、(T8170-2008中4.3.3的要求进行.7 标志、标签、包装、贮运7. 1 标志、标签产品的标志、标签应符合GB3796的规定,同时注明贮运条件。4 NY/ T 2294. 1-2012 7.2 包装包装应符合GB3796和GB/Tl91的规定.7.3 贮运贮运时严防日晒及35C以上高温,置于阴凉干燥处。运输时,注意轻放,防止破损不得与有毒有害物质混装、混运。7.4 安全在使用说明书或包装标签上应注明毒性、防护措施等.7.5 保质期在正常贮运条件下,质量保证期从生产日期算起,一年内产品含抱量不低于标明值的80%.5 NY/ T 2294. 1-2012 附录A(资料性附录)有效成分描述A
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