DB35∕T 2024-2021 鳗鲡疱疹病毒感染诊断技术规范(福建省).pdf
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1、 ICS 11.220 CCS B 41 35 福建省地方标准 DB35/T 20242021 鳗鲡疱疹病毒感染诊断技术规范 Protocol of diagnosis technology for Herpesvirus anguillae infection 2021 - 11 - 23 发布 2022 - 02 - 23 实施福建省市场监督管理局 发 布DB35/T 20242021 I 目次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 缩略语 . 1 5 主要试剂和材料 . 1 6 主要仪器和设备 . 2 7 临床诊断 . 2 8 实验室分
2、子诊断 . 2 9 综合判定 . 3 附录 A(资料性) 试剂配制 . 4 附录 B(资料性) 鳗鲡疱疹病毒阳性参考序列 . 6 DB35/T 20242021 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由福建省农业科学院提出。 本文件由福建省海洋与渔业局归口。 本文件起草单位: 福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、 福建省农业科学院生物技术研究所、福州海关技术中心、清流县畜牧兽医水产中心。 本文件主要起草人:饶秋华、葛均青、张志灯、
3、罗土炎、黄文华、杨金先、刘洋、何肖云、陈强、宋铁英、罗钦、黄薇。DB35/T 20242021 1 鳗鲡疱疹病毒感染诊断技术规范 1 范围 本文件规定了日本鳗鲡 (Anguilla japonica) 、 欧洲鳗鲡 (A. anguilla) 、 美洲鳗鲡 (A. rostrata) 、花鳗鲡(A. marmorata)及太平洋双色鳗鲡(A. bicolor pacifica)的鳗鲡疱疹病毒感染诊断技术。 本文件适用于鳗鲡疱疹病毒感染的诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中, 注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期
4、的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrithylammonium bromide) dATP:脱氧腺苷三磷酸(Deoxyadenosine triphosphate) dCTP:脱氧胞苷三磷酸(Deoxycytidine triphosphate) dGTP:脱氧鸟苷三磷酸(Deoxyguanosine triphosphate) DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic aci
5、d) dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxy-ribonucleoside triphosphate) dTTP:脱氧胸苷三磷酸(Deoxythymidine triphosphate) EB:溴化乙啶(Ethidium bromide) EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylene diaminetetraacetic acid) HVA:鳗鲡疱疹病毒(Herpesvirus anguillae) PCR:聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction) Taq 酶:DNA 聚合酶(Thermus Aquaticus DNA Polymerase) TBE:三羟甲基氨基甲烷
6、-硼酸-乙二胺四乙酸(Tris-borate-EDTA) Tris:三羟甲基氨基甲烷(Tris hydroxymethyl aminomethane) 5 主要试剂和材料 5.1 水:应符合 GB/T 6682 中一级水的规定。 5.2 Taq 酶:2 U/L,20 保存。 DB35/T 20242021 2 5.3 dNTP:dCTP、dGTP、dATP、dTTP,浓度为 2.5 mmol/L。 5.4 引 物 : 上 游 引 物HVA-F : 5-GTGTCGGGCCTTTGTGGTGA-3 , 下 游 引 物HVA-R :5-CATGCCGGGAGTCTTTTTGAT-3,引物浓度为 1
7、0 mol/L。 5.5 琼脂糖:电泳级。 6 主要仪器和设备 6.1 恒温培养箱:温度误差2 。 6.2 高速离心机:12 000 g 以上。 6.3 PCR 仪。 6.4 水平电泳仪。 6.5 凝胶成像仪。 6.6 匀浆器。 7 临床诊断 7.1 体表检查 观察鱼体是否出现下列症状: 体表出现黏液脱落, 鳃盖、 颌部、 胸鳍和腹鳍等部位出现瘀血和出血,尤其头部鳃盖和颌部出血、淤血明显,体表或形成明显脱黏斑。 7.2 解剖检查 解剖病鱼,观察是否出现下列症状:鳃红肿出血;肝脏肿大,有出血点和灰白色的坏死病灶;脾脏和肾脏肿大、出血;肠粘膜水肿、充血、发炎。 7.3 临床判定 体表检查和解剖检查
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