31婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定.pdf
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1、 中中华华人人民民共共和和国国国国家家标标准准GB 5413.142010中中 华华 人人 民民 共共 和和 国国 卫卫 生生 部部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 B12的测定 National food safety standard Determination of vitamin B12 in foods for infants and young children,milk and milk products GB 5413.142010 I 前 言 本标准代?GB/T 5413.14-1997?婴幼儿食品和乳粉
2、 维生素B12的?定?本标准?GB/T 5413.14-1997相比,?要变化如?标准?改?婴幼儿食品和乳品中维生素B12的?定?本标准附录A?规?性附录?本标准所代?标准的历次版本发布情况?GB 5413-1985?GB/T 5413.14-1997?GB 5413.142010 1 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 B12的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素 B12的?定方法?本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素 B12的?定?2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必?可少的?凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本标准?凡是?注日期的引
3、用文件,?新版本?包括所?的修改单?适用于本标准?3 原理 利用莱士曼氏乳酸杆菌?Lactobacillus leichmannii?对维生素 B12的特?性和灵敏性,定量?定出试?中维生素 B12的含量?在?定用?养?中供?除维生素 B12以外的所?营养成分,这?微生物生长产生的透?率就会?标准曲线工作液及未知?溶液中维生素 B12的含量相对应?以?浓度标准溶液的透?率相对于各浓度水?标准物质的浓度?制标准曲线,?据标准曲线?可计算出试?中维生素 B12的含量?4 试剂和材料 除非另?规定,本方法所用试剂均?分析纯,水?GB/T 6682 规定的二?水?4.1 菌株?莱士曼氏乳酸杆菌?Lac
4、tobacillus leichmannii?ATCC 7830?4.2 维生素 B12?Vitamin B12或 Cyanocobalamin?标准品?分子式 C63H88CoN14O14P,纯度?99%?4.3?养?4.3.1 乳酸杆菌琼脂?养?见附录 A?4.3.2 乳酸杆菌肉汤?养?见附录 A?4.3.3 维生素 B12?定用?养?见附录 A?注:一?商品化合成?养?效果良好,商品化合成?养?按标签说明进行配制?4.4 9 g/L 氯化?溶液?生理盐水?取 9.0 g 氯化?溶解于 1000 mL 水中,分装于?塞试管,每管 10 mL?121 灭菌 15 min?4.5 乙醇溶液?体
5、?分数?25%?4.6 无水磷酸氢二?Na2HPO4?4.7 无水偏重?酸?Na2S2O5?4.8 柠檬酸?含一个结晶水?C6H8O7H2O?4.9 标准溶液的制备 4.9.1 维生素 B12贮备液?10 g/mL?精确?取维生素 B12标准品?4.2?,用乙醇溶液?4.5?定容至维生素 B12浓度?10 g/mL?GB 5413.142010 2 4.9.2 维生素 B12中间液?100 ng/mL?用乙醇溶液?4.5?将 5.0 mL 维生素 B12贮备液?4.9.1?定容至 500 mL?4.9.3 维生素 B12工作液?1 ng/mL?用乙醇溶液?4.5?将 5.0 mL 维生素 B1
6、2中间液?4.9.2?定容至 500 mL?4.9.4 标准曲线工作液?分别吸取两个 5 mL 维生素 B12工作液?4.9.3?于 250mL 和 500mL 容量瓶中,用水定容至刻度?高浓度溶液的浓度?0.02 ng/mL?浓度溶液的浓度?0.01 ng/mL?注?所?标准溶液要储?于冰箱内?4.9.1?4.9.2 和 4.9.3 保?期?个?,4.9.4 临用前配制?5 仪器和设备 除微生物实验室常规灭菌及?养设备外,?他设备和材料如?5.1 天?感量?0.1 mg?5.2 pH 计?精度?0.01?5.3 分?度计?5.4 涡旋混合器?5.5 离心机?转速?2000 转/分?5.6 恒
7、温?养箱?36 1?5.7 冰箱?2 5?5.8 无菌吸管?10 mL?0.1 mL 刻度?或微量移液器和吸头?5.9 瓶口分液器?0 mL10 mL?5.10 锥形瓶?200 mL?5.11 容量瓶?A 类?100 mL,250 mL,500 mL?5.12 单刻度移液管?A 类?容量 5 mL?5.13 漏斗?直?90 mm?5.14 定量滤纸?直?90 mm?5.15 试管?18 mm 180 mm?注:准备玻璃仪器时,使用活性剂对?玻璃?定管及?他必要的玻璃器皿进行清洗,清洗之?要?在 200?热 2 h?6 分析步骤 6.1 测试菌液的制备 6.1.1 将莱士曼氏乳酸杆菌?ATCC
8、7830?的冻?菌株?4.1?活化?,接种到乳酸杆菌琼脂?养?4.3.1?,36 1?养 24 h?再转种 2 代3 代来增强活力?置 2 5 冰箱保?备用?每 15 d 转种一次?6.1.2 将活化?的菌株接种到乳酸杆菌肉汤?养?4.3.2?中,36 1?养 18 h24 h,以 2000 转/分?离心 2 min3 min,?去?清液,加入 10 mL 生理盐水?4.4?,混匀,再离心 2 min3 min,?去?清液,再加入 10 mL 生理盐水?4.4?,混匀?如前离心操作,?去?清液?再加 10 mL 生理盐水?4.4?,混匀?吸适量该菌悬液于 10 mL 生理盐水?4.4?中,混匀
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