DB61∕T 412-2007 食品中甘油的测定—酶法(陕西省).pdf
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1、DB61 陕两省地万标:住DB们IT412-2007 食品中甘油的测定酶法200709-03发布200709但实施陕西省质量技术监督局发布IJ 本标准中的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国陕西出入境检验栓度局提出并归口。本标准起直在单位:中华人民共和国陕西出入境检验检疫局。本辑推起草人t欧阳宏、蒋宏伟、陈茂盛、张春山。本标准系首次发布。DB61rr 4122007 DB61rr 412-2007 食品中甘油的测定一一酶法范自本标准现定了剧酶法测定食品中甘泊的含最。本际准适用于食品中甘榻的W定。摆范性亏i用文件.Fflj文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引周文件
2、,其随后所有的结改单不包括勘误的内容浅修订版均不远!书于本际准,然雨,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使周这些文件的最新版本e凡是不注曰期的引用文件,其最新摄本边用于本标准。IFU 77 (2001)一一一葡萄什中甘捕的测定EBC 9.33一一啤酒中甘油的黯定(酶法2 术语和忘义3. 1 本栋准中JifT指食品包括:萄酒、穰萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒等3.2 捋号与缩略i吾GK 甘油激隅ATP 二磷毗甘酸鼠ADP 散背二锅酸PK 丙翻酸激酶PEP 磷最烯醇式丙翻酸PEP-CHA 磷最烯醇式因醋酸单环乙饺盐L-LDH L乳酸酶脱氢酶NADH -烟碱咖踉喋岭核昔酸氨NAD 盘!碱黠I嚷岭二核
3、苛酸U 自每活度国陈单位,在25C的标准条件卜每minlU的酶活动量转化成11lmol 的物展。吸光度值物质的浓度A C 3 原理甘袖在甘?由激酶的催化卜可敲Ap磷酸、化为3-磷酸甘油脂,ATP转化为ADP:4 .号34.iijel岖VM事ht量41孟薄F-毫也3咽,.、高溢,13siza-155海ili-f!11反应式J.l:GK GlyceroL + ATP 叫一一一.L-glycerol-3-phosphat+ADP 上式中形成的ADp:在闪酣酸激胞的催化卡.可LjPEP作Hn:生成Ap及丙翻酸醋:反问式为:DB611T 412-2007 PK ADP令PEP一一一一份AP + Pyru
4、vate 丙翻酸睦在L-乳酸摇脱氧酶的作用下可被NADH还原为L乳酸甜,NADH被氧化为NAD;反应式为:L-LDH Pyruvate + NADH + H 一一-L翩lactate+ NAD 被氧化的NADH的摄取决于甘浊的主敌,NADH的暖光度值可在340nm下翻量。5试剂5. 1 苦氨酷甘莞酸5.2 NADH、ATP、5.3 MgS047日O25.4 丙酣酷爱;致酶5.5 L-乳酸酶院登在西每5.6 甘i串激酶景:孚物5. 7日Cl5.8 NaOH 5.9 KOH PEP-CHA 5. 10 亚性盖住御Fe(CN) 63日105. 11 疏酸特ZnS047日205.12 重蒸水5.13
5、也可使用商品试齐IJ盒6 设备6. 1 移液检(5mL、1mL、50唰200L、10-50L)6. 2 比色到1:先径l.Ocm6.3 紫外分光光度计,可变波长,在340nm;贯IJ;i:E6.4 折叠蜡纸,孔径10m6.5 蔑心机6. 6 离心智、烧杯、移液检配套j摇头、破瑭梅等7 检预IJ步骤7. 1 试赛IJD制7. 1. 1 甘鲸酸甘藏酸缓冲液:称0.66g甘氢歌甘氨最济丁90乱*中,J斗jNaOHi建;jipIH直至7.4,定学手至lOOmL7. 1. 2 辅黯及提;中渣的j昆和物:骂立11mLi宁主主酣,j:j氨般缓泞液,容解NADH扮7mg;ATP约22mg:PEP-c队的11m
6、g;加入lmol儿的班gSO, 7日O4mL 2 DB61fT 412-2007 7.1.3 离醋慧、激辑、L裴攘攘段蘸捣盛j孚嗨t它主m时,lmL重蒸本溶解600U自黯般激梅子崭及550U L一乳酸撞段氢酷。7.1.4 苦?由激辈革悬浮费:肩1mL重蒸Jj(洛辑部口的甘浩激酶。HCl: 2 mollL 7.1.5 NaOH: 2mo万L7.1.6 Carrez澄清液Carrez溶液85mmo盯LCarrez-1榕液:称取3.60gK4Fe (CN) 6.3日20,加入100mL蒸馆水溶解。Carrez-II 容液250mmo1!L Carrez-II榕液t称取7.20gZNS04 7H20
7、,加入100mL燕惯71:1二.固体样品,J持50mL最;二基本稀释济醉,主11入10mLCarrez壤洁攘,充分海匀,部后过法,可段去其中的提浊辑或色素,取法接培子拉溅。7.2.3.2 除弃样品中蛋白震m Carrez试剂可段去样品中的蛋白皮,25mL经过过滤的样品洛液,如入10mLCarrez 3000r/min离心10min,取法接南下检嚣。7.2.3.3 舔弃样品中器肪HJ热/主拉提25g样品中的脂肪(拮提温度需在插曲的洛解J!l之上),冷却眉可分离出脂蹄,将余物旋转移至容量瓶中并加水歪50mL;J.洛15min雨后过滤,热水抽提启用10mLCarrez溶液晴、清、过滤,取津、液用于捡
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