DB37∕T 3787-2019 水质 粪大肠菌群测定 光度法(山东省).pdf
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1、ICS 13.060 Z 16 DB37 山东省地方标准 DB37/T 37872019 水质 粪大肠菌群测定 光度法 Water qualitydetermination of fecal coliformsphotometric method 2019 - 12 - 24 发布 2020 - 01 - 24 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 37872019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 分光光度法 . 1 5 荧光法 . 4 DB37/T 37872019 II 前 言 本标准按照GB/T 1.120
2、09给出的规则起草。 本标准由山东省生态环境厅提出并组织实施。 本标准由山东省环保标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:山东省生态环境监测中心、青岛佳明测控科技股份有限公司、北京华夏科创仪器 股份有限公司。 本标准主要起草人:李恒庆、由希华、宗雪梅、王婷、王聪、郑琳琳、邹康、潘光、周成、张芳、张爱芳。 DB37/T 37872019 1 水质 粪大肠菌群测定 光度法 1 范围 本标准规定了测定水中粪大肠菌群的分光光度法和荧光法。 本标准适用于地表水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的应急现场快速测定。 本方法的检出限为30 MPN/L,检测范围:30109 MPN/L,检测周期不大于18 h。
3、 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ 494 水质 采样技术指导 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 粪大肠菌群 fecal coliforms 44.5 培养能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。 3.2 最大可能数 most probable number,MPN 最大可能数(most probable num
4、ber,缩写为MPN),又称稀释培养计数,是一种基于泊松分布的间接计数法。利用统计学原理,根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数,查表估算一定体积样品中目标微生物存在的数量(单位体积存在目标微生物的最大可能数)。 4 分光光度法 4.1 方法原理 一定量的水样与选择性培养基混合均匀放置于44.5 环境下, 粪大肠菌群产生-半乳糖苷酶 (-D-galactosidase) , 并分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化, 通过连续分光光度 (波长:300 nm600 nm)测定,依据待测水样色度变化与水中粪大肠菌群数成一定关系的原理,得出粪大肠菌群浓度。 4.2 干扰和消除
5、 DB37/T 37872019 2 4.2.1 活性氯具有氧化性,能破坏微生物细胞内的酶活性,导致细胞死亡,可在样品采集(4.5.1)时加入硫代硫酸钠溶液(4.3.4)消除干扰。 4.2.2 重金属离子具有细胞毒性, 能破坏微生物细胞内的酶活性, 导致细胞死亡, 可在样品采集 (4.5.1)时加入乙二胺四乙酸二钠溶液(4.3.5)消除干扰。 4.3 试剂和材料 除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂。 4.3.1 粪大肠菌群检测试剂主要成分: 蛋白胨:5 g; 硫酸锰:0.005 g; 硫酸镁:0.001 g; 硫酸锌:0.001 g; 磷酸盐:1.78 g; 两性霉素 B:0.
6、60 g; 蒸馏水 1 000 mL。 制法:上述试剂溶于蒸馏水中,充分混匀,调整pH值为7.27.4,68.95 kPa(115 ),高压灭菌20 min,分装贮存于4 避光备用。 注:也可采用市售商品化培养基制品。 4.3.2 硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O)。 4.3.3 乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2O8Na22H2O)。 4.3.4 硫代硫酸钠溶液:(Na2S2O3)=0.10 g/mL,称取 15.7 g 硫代硫酸钠(4.3.2),溶于适量水中,定容至 100 mL,临用现配。 4.3.5 乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液:(C10H14N2O8Na22H2O)=0
7、.15 g/mL,称取 15 g 乙二胺四乙酸二钠(4.3.3),溶于适量水中,定容至 100 mL,此溶液保质期为 30 d。 4.3.6 无菌水:取适量纯水,经 121 高压蒸汽灭菌 20 min,备用。 4.4 仪器和设备 4.4.1 采样瓶:具螺旋帽或磨口塞的 100 mL、250 mL、500 mL 广口玻璃瓶。 注:在采集不存在或不考虑余氧、金属离子干扰的样品时,可采用市售无菌采样瓶或无菌采样袋。 4.4.2 微生物快速检测仪: 恒温培养单元:不少于 2 个温控系统,温度控制精度 1 ,可自动调节待检测样本培养温度(44.5 1 ); 检测单元:不少于 4 个独立的检测系统,可实现
8、多个样本的同时监测; 数据显示、处理单元:自动输出检测结果,可查询和显示历史数据。 4.4.3 高压蒸汽灭菌器:121 可调、101.3 kpa。 4.4.4 量筒:50 mL、100 mL。 4.4.5 移液管:1 mL、10 mL。 4.4.6 天平:感量 0.01 g。 注:移液管、采样瓶等玻璃器皿及采样器具试验前应按无菌操作要求包扎,121 高压蒸汽灭菌20 min,烘干,备用。 4.5 样品 4.5.1 样品采集 DB37/T 37872019 3 点位布设及采样频次按照GB/T 14581、HJ 494和HJ/T 91的相关规定执行。 与其它项目一同采样时,先单独采集微生物样品,采
9、样瓶(4.4.1)不得用水样洗涤,采集水样于灭菌的采样瓶中。 采集河流、 湖库等地表水样时, 可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中, 约距水面10 cm15 cm处,瓶口朝水流方向, 拔玻璃塞, 使水样灌入瓶内然后盖上瓶塞,将采样瓶从水中取出。 如果没有水流,可握住瓶子水平往前推。采样量一般为采样瓶容量的80%左右。采好水样后,迅速扎上无菌包装纸。 采集地表水、废水样品及一定深度的水样时,可使用灭菌过后专用采样装置采样。 在同一采样点进行分层采样时,应自上而下进行,避免不同层次的搅扰。 如果采集的是含有活性氯的样品时,需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液(4.3.4),以除去活性氯对细菌的抑制
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