DB34∕T 2999-2017 动物尿液中FB 1 的测定—柱前衍生高效液相 色谱法(安徽省).pdf
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1、ICS 67.040 X 00 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 29992017 动物尿液中FB1的测定柱前衍生高效液相色谱法 Determination of FB1 in animal urineHigh performance liquid chromatographic method with pre-column derivatization 文稿版次选择 2017 - 12 - 30 发布 2018 - 01 - 30 实施安徽省质量技术监督局发 布 DB34/T 29992017 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽农业大学
2、提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:安徽农业大学、安徽省农业科学院、阜阳市动物卫生监督所、安徽浩翔农牧有限公司。 本标准起草人:王希春、吴金节、汤继顺、谢玉洁、高亚飞、冯士彬、李玉、李锦春、李郁、孙裴。 DB34/T 29992017 1 动物尿液中 FB1的测定-柱前衍生高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了动物尿液中 FB1 柱前衍生高效液相色谱法测定的原理、试剂和设备、分析步骤、分析结果的表述、重复性、检出限与定量限、回收率。 本标准适用于动物尿液中 FB1 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注
3、日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品经过离心处理,取上清液过免疫亲和柱净化,去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质。净化液中的 FB1 经过邻苯二甲醛衍生后进高效液相色谱柱分离,荧光检测,外标法定量。 4 试剂和设备 4.1 试剂 4.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 4.1.2 乙酸(CH3COOH)。 4.1.3 氢氧化钾(KOH)。 4.1.4 氯化钠(NaCl)。 4.1.5 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 4.1.6 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 4.1
4、.7 硼酸(H3BO3)。 4.1.8 2-巯基乙醇(C2H6OS)。 4.1.9 邻苯二甲醛(OPA,C8H6O2)。 4.1.10 磷酸二氢钠(NaH2PO4)。 4.2 设备 4.2.1 高效液相色谱仪,带荧光检测器。 4.2.2 振荡器。 4.2.3 微量进样器。 4.2.4 天平:感量 0.0001 g。 4.2.5 pH 计。 DB34/T 29992017 2 4.2.6 氮吹仪。 4.2.7 超低温冰箱。 4.2.8 离心机:转速 4000 r/min。 4.2.9 免疫亲和柱(柱容量 5000 ng,FB1柱回收率 80)。 4.2.10 微孔滤膜:0.22 m,有机型。 5
5、 分析步骤 5.1 样品制备 取新鲜的或完全溶解的冻存尿液 510 mL,在 4000 r/m 离心 5 min,上清液转移至另一离心管中。 5.2 试样净化 先用 10 mL PBS 缓冲液淋洗免疫亲和柱,自然流出,加入 5 mL 尿液上清液,再用 10 mL PBS 缓冲液淋洗免疫亲和柱,然后用 1 mL 甲醇-乙酸溶液(附录A.1.4)洗脱免疫亲和柱三次,收集洗脱液,55下氮吹至干,加入 500 L 甲醇-水溶液(附录A.1.2)溶解残渣。涡旋 30 s,过 0.22 m 微孔滤膜后,收集于进样瓶中,待测。 注:由于不同厂商提供的免疫亲和柱操作程序可能不同,实际操作时,请参照厂商提供的操
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