DB13∕T 2892-2018 禽白色念珠菌病综合诊断技术规程(河北省).pdf
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1、ICS 11.220 B 43 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 28922018 禽白色念珠菌病综合诊断技术规程 2018 - 12 - 13 发布 2018 - 12 - 31 实施 河北省市场监督管理局 发 布 DB13/T 28922018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由河北工程大学提出。 本标准起草单位:河北工程大学。 本标准主要起草人:刘建钗、柳焕章、赵振宇、刘娜、张鹤平、姬国强、李聚芹、乔铁库、刘彦威、刘艳莉、张良、董改琳、薛素琴、孙冰玉。DB13/T 28922018 1 禽白色念珠菌病综合诊断技术规程 1 范围 本标准规定了禽
2、白色念珠菌病综合诊断技术的临床诊断、实验室诊断和综合判定。 本标准适用于鸡、鸭、鹅、鸽子、鹌鹑等禽类白色念珠菌病的诊断及其白色念珠菌病原的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 GMA-Grocott:六胺银染色 PCR:聚合酶链式反应 PDA:马铃薯葡萄糖琼脂培养基 PAS:过碘酸雪夫氏染色 SYBR Green:DNA荧光染料 TTC:红四氮唑显色培养基 T
3、SA:胰蛋白胨大豆琼脂培养基 YEPD:酵母浸出粉胨葡萄糖培养基 4 临床诊断 当禽出现以下部分或全部情形时,可作为初步诊断的依据。 4.1 临床症状 各日龄禽均可感染,雏禽易感。病禽嗉囊肿胀,触感松软,内容物或口水气味酸臭;在喙、口腔、舌有溃疡灶或伪膜;粪便常伴有未充分消化的饲料;个别病禽有皮肤结痂或脱毛、眼部感染等症状。 4.2 剖检病变 在口腔、咽喉、食道、嗦囊和腺胃等消化道黏膜上有乳白色斑片、溃疡或鳞屑状病变;严重者嗉囊阻塞充血、腺胃壁增厚、肌胃内膜糜烂,肝脏淤血或有出血斑、坏死灶,脾、肾肿大明显,表面白色坏死灶。 5 实验室诊断 包括常规检测和定量PCR检测技术。参照GB 19489
4、-2008的相关条款。 DB13/T 28922018 2 5.1 常规检测 5.1.1 样品的采集 取病禽嗉囊、肝脏、肾等病料,放入无菌的平皿中,剪开嗉囊,用拭子擦拭嗉囊内表面,放入1.5 mL灭菌EP管中备用; 其他器官用无菌剪刀各取小块组织两份, 用灭菌水充分冲洗后, 一份接种于YEPD 平板上(1 % 酵母膏,2 % 蛋白胨,2 %葡萄糖,2 %琼脂粉 ),一份放入40 g/L甲醛固定液中待用。 5.1.2 病原菌的分离纯化与形态观察 将接种病料的平板放入培养箱,28恒温培养,每天观察菌落生长情况;3 d后用接种环挑取平板上的疑似菌落, 划线接种于YEPD平板培养基继续分离培养, 3
5、d后将疑似单菌落进行涂片、 染色和镜检,取酵母状细胞的对应菌落菌体进一步接种于PDA试管斜面,28 培养3 d后保存备用。 对照白色念珠菌典型菌落形态和菌体形态特征进行初步鉴别,参见附录A,。 5.1.3 显色培养鉴别 用接种环挑取疑似菌株的菌体, 分别划线接种或稀释后涂布于TTC 和CHROMagar Candida显色培养基平板的划定区域,如两者均呈现白色念珠菌特征性色泽即可初步诊断为阳性,参见附录A。 5.1.4 组织切片检查 将40 g/L甲醛固定液中样本固定24 h后取出,经修块、脱水、透明、浸蜡包埋、切片、HE染色、PAS和GMA染色,显微镜观察组织病理和病原生长情况,参见附录A。
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