GB 4789.40-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验.pdf
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1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B4 7 8 9 .4 02 0 1 6食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属( 阪崎肠杆菌) 检验2 0 1 6 - 1 2 - 2 3发布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局发 布G B4 7 8 9.4 02 0 1 6 前 言 本标准代替G B4 7 8 9.4 02 0 1 0 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验 、S N/T1 6 3 2.12 0 1 3 出口奶粉中阪崎肠杆菌( 克罗诺杆菌属) 检验方法 第1部分: 分离与计
2、数 。本标准与G B4 7 8 9.4 02 0 1 0相比, 主要变化如下: 标准名称 修改为 “ 食 品安全国 家标准 食品微生物 学检验 克罗诺杆菌 属 ( 阪崎 肠杆菌) 检验” ; 修改了可疑菌落的挑取数量。G B4 7 8 9.4 02 0 1 61 食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属( 阪崎肠杆菌) 检验1 范围本标准规定了食品中克罗诺杆菌属(C r o n o b a c t e r) 的检验方法。本标准适用于婴幼儿配方食品、 乳和乳制品及其原料中克罗诺杆菌属的检验。2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外, 其他设备和材料如下:2.1 恒温培养箱:2 51,
3、3 61,4 40.5。2.2 冰箱:25。2.3 恒温水浴箱:4 40.5。2.4 天平: 感量0.1g。2.5 均质器。2.6 振荡器。2.7 无菌吸管:1m L( 具0.0 1m L刻度) 、1 0m L( 具0.1m L刻度) 或微量移液器及吸头。2.8 无菌锥形瓶: 容量1 0 0m L、2 0 0m L、20 0 0m L。2.9 无菌培养皿: 直径9 0mm。2.1 0 p H计或p H比色管或精密p H试纸。2.1 1 全自动微生物生化鉴定系统。3 培养基和试剂3.1 缓冲蛋白胨水(b u f f e rp e p t o n ew a t e r,B PW) : 见A.1。3
4、.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(m o d i f i e dl a u r y ls u l f a t et r y p t o s eb r o t h - v a n c o m y c i nm e d i u m,m L S T - Vm) : 见A.2。3.3 阪崎肠杆菌显色培养基。3.4 胰蛋白胨大豆琼脂(t r y p t i c a s es o ya g a r,T S A) : 见A.3。3.5 生化鉴定试剂盒。3.6 氧化酶试剂: 见A.4。3.7 L -赖氨酸脱羧酶培养基: 见A.5。3.8 L -鸟氨酸脱羧酶培养基: 见A.6。3.9 L -精氨酸双
5、水解酶培养基: 见A.7。3.1 0 糖类发酵培养基: 见A.8。3.1 1 西蒙氏柠檬酸盐培养基: 见A.9。G B4 7 8 9.4 02 0 1 62 第一法 克罗诺杆菌属定性检验4 检验程序克罗诺杆菌属检验程序见图1。图1 克罗诺杆菌属检验程序5 操作步骤5.1 前增菌和增菌取检样1 0 0g(m L) 置灭菌锥形瓶中, 加入9 0 0m L已预热至4 4的缓冲蛋白胨水, 用手缓缓地摇动至充分溶解,3 61培养1 8h2h。移取1m L转种于1 0m Lm L S T - Vm肉汤,4 40.5培养2 4h2h。5.2 分离5.2.1 轻轻混匀m L S T - Vm肉汤培养物, 各取
6、增菌培养物1环, 分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板, 显色培养基须符合G B4 7 8 9.2 8的要求,3 61培养2 4h2h, 或按培养基要求条件G B4 7 8 9.4 02 0 1 63 培养。5.2.2 挑取至少5个可疑菌落, 不足5个时挑取全部可疑菌落, 划线接种于T S A平板。2 51培养4 8h4h。5.3 鉴定自T S A平板上直接挑取黄色可疑菌落, 进行生化鉴定。克罗诺杆菌属的主要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。表1 克罗诺杆菌属的主要生化特征生化试验特 征黄色素产生+氧化酶-L -赖氨酸脱羧酶-L -鸟氨酸脱羧酶(+)L -精
7、氨酸双水解酶+柠檬酸水解(+)发酵D -山梨醇L -鼠李糖D -蔗糖D -蜜二糖苦杏仁甙(-)+ 注:+9 9%阳性;-9 9%阴性; (+)9 0%9 9%阳性; (-)9 0%9 9%阴性。6 结果与报告综合菌落形态和生化特征, 报告每1 0 0g(m L) 样品中检出或未检出克罗诺杆菌属。第二法 克罗诺杆菌属的计数7 操作步骤7.1 样品的稀释7.1.1 固体和半固体样品: 无菌称取样品1 0 0g、1 0g、1g各三份, 分别加入9 0 0m L、9 0m L、9m L已预热至4 4的B PW, 轻轻振摇使充分溶解, 制成11 0样品匀液, 置3 61培养1 8h2h。分别移取1m L
8、转种于1 0m Lm L S T - Vm肉汤,4 40.5培养2 4h2h。7.1.2 液体样品: 以无菌吸管分别取样品1 0 0m L、1 0m L、1m L各三份, 分别加入9 0 0m L、9 0m L、9m L已预热至4 4的B PW, 轻轻振摇使充分混匀, 制成11 0样品匀液, 置3 61培养1 8h2h。分别移取1m L转种于1 0m Lm L S T - Vm肉汤,4 40.5培养2 4h2h。G B4 7 8 9.4 02 0 1 64 7.2 分离、 鉴定同5.2和5.3。8 结果与报告综合菌落形态、 生化特征, 根据证实为克罗诺杆菌属的阳性管数, 查MP N检索表, 报
9、告每1 0 0g(m L) 样品中克罗诺杆菌属的MP N值( 见表B.1) 。G B4 7 8 9.4 02 0 1 65 附 录 A培养基和试剂A.1 缓冲蛋白胨水(B PW)A.1.1 成分蛋白胨1 0.0g氯化钠5.0g磷酸氢二钠(N a2H P O41 2 H2O)9.0g磷酸二氢钾1.5g蒸馏水10 0 0m LA.1.2 制法加热搅拌至溶解, 调节p H至7.20.2,1 2 1高压灭菌1 5m i n。A.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(M o d i f i e d l a u r y l s u l f a t e t r y p t o s e b r o t
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