DB32∕T 3925-2020 白斑综合征病 (WSSV)环介导等温扩增(LAMP)检测技术规范(江苏省).pdf
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1、 i ICS 65.150 B 52 DB32 江苏省地方标准 DB32/T 39252020 白斑综合征病毒(WSSV)环介导等温扩增(LAMP)检测技术规范 T Technical specification of dechnical specification of detecting etecting w whitehite- -spot spot s syndrome yndrome v virus irus ( (WSSV)WSSV) by by l loopoop- -mediated mediated i isothermal sothermal a amplification
2、mplification (LAMP)(LAMP) 2020 -12- 15 发布 2021 -01- 15 实施 江苏省市场监督管理局 发 布 DB32/T 39252020 I 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作到则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件的附录A、B为资料性附录。 本文件由苏州大学提出并归口。 本文件起草单位:苏州大学、江苏省水生动物疫病预防控制中心 本文件主要起草人:薛仁宇、贡成良、陈辉、曹广力、魏育红、方苹、胡小龙、朱敏、刘波。 DB32/T 39252020 1 白斑综合征病毒(WSSV)环介导等温扩增(LAMP)检测技术规范 1
3、 范围 本文件规定了用LAMP技术检测白斑综合征病毒的方法。 本文件适用于环介导等温扩增(LAMP)对虾、蟹白斑综合征病毒的鉴定及其检疫。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中, 注日期的引用文件,仅改日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SC/T 71032008 水生动物产地检疫采样技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 环介导等温扩增 Loop-mediated isothermal amplificati
4、on (LAMP) 一种新的等温核酸扩增方法, 其特点是针对靶基因的 6 个区域设计 4 种特异性引物, 利用一种链置换 DNA 聚合酶在等温条件下保温 30 min-60min,所完成的核酸扩增反应。 4 试剂和材料 4.1 水 应符合 GB/T 6682 中一级水的要求。 4.2 模板制备缓冲液 缓冲液中含 20 mM Tris-HCl, 10 mM KCl, 体积百分数 0.1% Triton X-100, 10 mM (NH4)2SO4, 2 mM MgSO4,-20保存。 4.3 Bst DNA 聚合酶 8U/L,-20 保存,不能在反复冻融或经历温度剧烈变化情况后使用。 4.4 d
5、NTPs 混合物 含 dATP、dTTP、dCTP、dGTP 各 2.5 mol/L 的混合物,-20保存,不宜在反复冻融或温度剧烈 DB32/T 39252020 2 变化后使用。 4.5 染色剂 10000 SYBR Green I,-20避光保存。 4.6 引物 检测所用 4 条引物,其序列如下: F3:5-GGT AAA GGA ACG TTT TGT TG-3 B3:5-GCA ATG GGA ATG ATA ACT CTT-3 FIP:5-CGC ATA TTT CCC TCT ATC GCT ATT ATT TTT TAG CAC AGA TTT TTT GAT-3 BIP:5-
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