NY∕T 551-2017 鸡产蛋下降综合征诊断技术(农业).pdf
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1、ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/ T 551一2017代替NY/T551-2002 鸡产蛋下降综合征诊断技术Diagnostic techniques for egg drop syndrome 2017 -06-12发布2017 -10 -01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 551-2017 目U昌本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准代替NY/T551- 2002 (产蛋下降综合征诊断技术。与NY/T551-2002相比,除编辑性修改外,主要技术变化如下:一一范围部分增述了产蛋下降综合征病毒PCR检测方法的适用性;一一对血凝和
2、血凝抑制试验进行了修改;一一删除了原标准中血清学诊断内容;一一增加产蛋下降综合征病毒PCR检测方法。本标准由农业部兽医局提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会CSAC/TC181)归口。本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标准主要起草人:刘胜旺、李慧昕、韩宗笠、王娟、邵垦吴。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一一-NY/T551-2002。I NY/T 551一2017鸡产蛋下降综合征诊断技术1 范围本标准规定了产蛋下降综合征的临床诊断和实验室诊断(病毒分离、血凝和血凝抑制试验及PCR检测方法)的技术方法和实验程序。本标准适用于鸡产蛋下降综合征的诊断、监测和检疫。2 规范
3、性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/ T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/ T 16550 新城疫诊断技术NY/ T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 产蛋下降综合征唔g由opsyndrome, EDS 又名减蛋综合征,是由产蛋下降综合征病毒引起的一种无明显症状、仅表现产蛋母鸡产蛋量明显下降的疾病。3.2 产蛋下降综合征病毒唔gdrop syndrome virus, EDSV 产蛋下降
4、综合征病毒为腺病毒科、腺胸腺病毒属成员,为20面体对称、无囊膜双链DNA病毒。4 临床诊断4. 1 临床症状4. 1. 1 鸡群在产蛋高峰期(27周龄49周龄)产蛋下降15%50%,一般持续4周10周产蛋逐渐恢复到正常水平。4. 1. 2 鸡蛋破损率5%20%。4. 1.3 鸡蛋中有较多的畸形蛋、软亮蛋、无壳蛋、薄壳蛋、砂壳蛋,时有水样蛋清,褐亮蛋鸡产浅壳蛋、白壳蛋。4. 1.4 不同品种鸡感染时,产褐亮蛋的品种减蛋甚于白壳蛋的品种。4.2 病理变化本病一般没有明显的特征性病理变化,可见输卵管卡他性炎症,偶见输卵管勃膜水肿和/或腔内有白色渗出物。4.3 结果判定鸡群出现4.1中任何一种临床症状
5、和/或剖检出现4.2中的病理变化,可判定为疑似产蛋下降综合征,应进行实验室确诊。5 实验室确诊5. 1 病毒分离l NY/T 551-2017 5. 1. 1 试剂磷酸盐缓冲液CPBS,O.01 mol/L,pH 7.2),配制方法见附录A的A.10 5. 1.2 样晶的采集和处理按照NY/T541的规定进行样品采集,选择下列l种或2种样品:a) 扑杀疑似EDSV感染鸡,取适量输卵管和卵泡膜样品,研磨。加PBS制成1: 5混悬液后冻融3次,3000g离心10min,取上清,加人青霉素(终浓度为1000 IU/ mL)和链霉素(终浓度为1000g/mL) ,370C作用1ho b) 采集劣质蛋清
6、,加等量PBS,并加喜亟矗府为1000IU/mL)和链霉素(终浓度为1000g/mL) ,370C作用1ho 5. 1.3 鸭胚接种及尿囊液取孵育10日龄12届-、来Fklt京两-监鸭场的非免疫鸭胚,将0.2mL样品(5.1. 2)笋F酬d.齿地lEP9幽晒脸材V服te弃掉48h内死亡的鸭胚,收获48hl 5.2 分离物血凝5.2. 1 5.2. 1. 1 材料5. 2. 1. 1. 1 5. 2. 1. 1. 2 5.2. 1. 3. 2 5.2. 1. 3. 3 从第人到第3孔,5.2. 1.3. 4 每孔再加5.2. 1.3. 5 每孔加人255.2. 1.3.6 振荡混匀反应混合、孔的
7、红细胞呈明显的纽扣状沉到5.2. 1.4 结果判定结果判定细则如下:次,充分混匀。后吸取25L加孔为PBS对照。,或40C静置60min,PBS对照a) 在PBS对照孔出现红细胞完全沉淀的情况下,将反应板倾斜,观察各检测孔红细胞的凝集情况。以红细胞完全凝集的病毒尿囊液最大稀释倍数为该抗原的血凝滴度,以便红细胞完全凝集的病毒尿囊液的最高稀释倍数为1个血凝单位CHAU)。2 b) 如果尿囊液没有血凝活性或血凝效价小于41og2,则用初代分离的尿囊液在SPF鸭胚或非免疫鸭胚中继续传代两代。若血凝试验检测仍为阴性,则判定产蛋下降综合征病毒分离结果为阴性。c) 对于血凝试验呈阳性的样品,应采用EDSV标
8、准阳性血清进一步做血凝抑制试验,并与NDV和AIV阳性血清(H7亚型和H9亚型AIV阳性血清)进行鉴别诊断。5.2.2 血凝抑制试验5.2.2. 1 材料5. 2. 2. 1. 1 96孔V型微量反应板。5.2.2. 1. 2 微量移液器。5. 2. 2. 2 试剂5.2.2.2. 1 标准抗原:EDSV抗原。5.2.2.2.2 标准阳性血清:EDSV标NY/T 551-2017 5.2.2.2.3 其他阳性血清:新妒4-.IV)阳性血清(H7亚型和H9亚型AIV阳性血清)。5. 2. 2. 2. 4 阴性血清:5. 2. 2. 2. 6 1 % 5.2.2.3 4个根据5.2.下列方法计算可
9、。稀释后,5.2.2.4.3 .坷,堕4主曹雪马I玉S.2孔加人50LPBS。10孔,第10室温下(200C25静置60min。当PBS5. 2. 2. 4. 7 若血凝抑5.2.2.5 与新城症和应以NDV和AIV阳性血清宵幽幽鉴别诊断,用温画血清和/或AIV阳性血清代替EDSV标准阳性血清,进行血凝抑制试骚四吨目性血清和AIV阳性血清应不能对分离物产生血凝抑制,表l中示例结果表示EDSV分离结果阳性。表1应用血凝抑制试验鉴定分离物血清抗原EDSV阳性血清NDV阳性血清H7亚型AIV阳性血清H9亚型AIV阳性血清分离毒株+ EDSV标准抗原+ 应进行新城疫、禽流感的鉴别诊断。5. 2. 2.
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