SN∕T 1460-2015 输入性蚊类携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒的检测方法(出入境检验检疫).pdf
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1、书 书 书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜 代替 输入性蚊类携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒的检测方法犇犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀犿犲 狋 犺 狅 犱 狊犳 狅 狉狑犲 狊 狋狀 犻 犾 犲狏 犻 狉 狌 狊犪 狀 犱犛 狋 犔狅 狌 犻 狊犲 狀 犮 犲 狆 犺 犪 犾 犻 狋 犻 狊狏 犻 狉 狌 狊犮 犪 狉 狉 犻 犲 犱犫 狔犻 犿狆 狅 狉 狋 犲 犱犿狅 狊 狇 狌 犻 狋 狅 犲 狊 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书 书 书前言本标准按照 给出的规则起草。本标准代替 输入性蚊类携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒的检测方法 。本标准与 相比,主要变
2、化如下: 增加了规范性引用文件; 对生物安全要求进行了修订,删除了在生物安全级实验室的操作要求,增加了生物安全实验室设计原则、病毒核酸分子检测操作要求、实验室设施和设备,检测工作的安全防护和实验室废弃物处理的要求; 对病毒核酸分子检测方法进行了修订,增加了实时荧光 方法; 删除了附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国宁波出入境检验检疫局。本标准主要起草人:郑剑宁、胡群、李红、裘炯良。本标准所代替标准的历次版本发布情况为: 。犛犖犜 输入性蚊类携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒的检测方法范围本标准规定了国境口岸输入性蚊类携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒检测的
3、生物安全要求、检测对象、检测方法、结果的报告。本标准适用于检验检疫机构对输入性蚊类体内携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒检测和报告,对口岸发现的蚊类检测西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒也可参照执行。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 分析实验室用水规格和试验方法 实验室生物安全通用要求 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 输入性蚊类犻 犿狆 狅 狉 狋 犲 犱犿狅 狊 狇 狌 犻 狋 狅 犲 狊通过入境交通工具、集装箱、货物及行
4、李带入境内的库蚊、伊蚊属蚊类。 西尼罗病毒狑 犲 狊 狋狀 犻 犾 犲狏 犻 狉 狌 狊;犠犖犞西尼罗热的病原体,属黄病毒科黄病毒属,为单链病毒。西尼罗病毒分两个基因型,导致人类感染西尼罗病毒的分离株主要为型。主要分布于非洲、中东、西亚和北美。 圣路易脑炎病毒犛 狋 犔狌 犻 狊犲 狀 犮 犲 狆 犺 犪 犾 犻 狋 犻 狊狏 犻 狉 狌 狊;犛犔犈犞圣路易脑炎的病原体,属黄病毒科黄病毒属,为单链病毒。主要分布于北美洲。缩略语下列缩略语适用于本文件。 值:循环阈值( ):焦碳酸二乙酯( ): 羧基荧光素( )犛犖犜 :逆转录聚合酶链式反应( ):四甲基罗丹明( )检测对象输入性蚊类。生物安全要
5、求实验室及检验应遵照以下生物安全要求:)生物安全实验室设计原则应遵照 的规定。)实验室设施和设备应遵照 规定的 实验室要求。)实验室废弃物处理应遵照 对废物处置的要求。)检测工作的安全防护应遵照 型规定的二级生物安全个体防护要求。)病毒核酸分子检测检测操作要求应遵照相关国家标准的规定。病毒核酸分子检测 普通犚犜 犘犆犚方法和实时荧光犚犜 犘犆犚方法 仪器和设备需要如下仪器设备:)荧光定量仪;)仪;)二级生物安全柜;)普通冰箱;) 超低温冰箱;)普通台式离心机;)高速冷冻离心机(离心力可达 犵) ;)微量可调移液器( 、 、 、 ) ;)涡旋器;)电泳仪;)凝胶成像分析系统;)高压灭菌锅。 主要
6、试剂 除另有规定外,所有化学试剂均采用分析纯。 实验用水应符合 中一级水的规格。用于(包括核酸抽提)时所用的水应是无酶的水。 核酸提取试剂为 总提取试剂或商品化的病毒提取试剂盒。 引物和探针为根据表和表的序列进行合成引物和探针,加无酶的超纯水配制成 的储存液。犛犖犜 表普通犚犜 犘犆犚检测的引物病毒种类引物扩增片段大小 上游引物 : 下游引物 : 上游引物 : 下游引物 : 表实时荧光犚犜 犘犆犚检测的引物和探针病毒种类引物扩增片段大小 上游引物 : 下游引物 : 探针: 上游引物 : 下游引物 : 探针: 一步法普通 试剂盒采用德国 公司 )。 一步法荧光 试剂盒采用宝生物工程(大连)有限公
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