NY∕T 3152.1-2017 微生物农药 环境风险评价试验准则 第1部分:鸟类毒性试验(农业).pdf
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1、ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3152.1-2017 微生物农药环境风险评价试验准则第1部分:鸟类毒性试验Risk assessment test guidelines for microbial pesticide一Part 1: A vian toxicity test 2017-12-22发布2018-06-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 3152. 1-2017 目IJ1=1 NY/ T 3152 (微生物农药环境风险评价试验准则分为6个部分:一一第1部分:鸟类毒性试验;一-第2部分:蜜蜂毒性试验;一一第3部分:家蚕毒性试验;第4部
2、分:鱼类毒性试验;一一第5部分:渣类毒性试验;第6部分:藻类生长影响试验。本部分为NY/T3152的第l部分。本部分按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部种植业司提出并归口。本部分起草单位:农业部农药检定所、环境保护部南京环境科学研究所。本部分主要起草人:程燕、曲甏在、卡元卿、周艳明、张俊、吴声敢、单正军。I 1 范围微生物农药环境凤险评价试验准则第1部分:鸟类毒性试验本部分规定了微生物农药对要求。本部分适用于微生2 规范性引用文件3. 1 微生物是以细菌、有害生物作用3.2 供试物试验中NY/
3、T 3152.1-2017 、试验报告等的基本于本文细菌芽泡、真茵抱子、细菌到物范震唱起cter酒喝阜Is撞-acterialor protozoan cyst 显微镜下一个完整的个体芽掘矗血囊,通常是指能在合温事基上形成单个CFU的一个完整的实体。细菌营养体vegetative bacterium 单个活的生物体,通常是指能在合适的培养基上形成一个CFU的实体。3.6 原生生物protozoa 原生生物门各个成员的一个完整的营养体、于包子或抱囊。3.7 病毒virus 显微镜下一个完整的病毒颗粒或包涵体。l NY/ T 3152. 1-2017 3.8 最大危害暴露量maximum haza
4、rd e邓osurelevel 微生物农药有效成分在环境中对非靶生物可能产生危害的最大暴露量,通常以预测暴露量与安全系数的乘积来表示。3. 9 毒性toxicity 微生物和/或毒素引起受试生物中毒或病变的能力,其作用过程不一定同时发生微生物的感染、复制和生命活动。3. 10 致病性pathogenicity 微生物感染宿主后,在宿主体内存活及繁衍,对宿主造成损伤或病变的能力,通常与宿主的耐受性或敏感性有关。3. 11 半数致死量median lethal do西eor concentration, LD5O/ LC5O 在规定时间内,通过指定感染途径,使一定体重或年龄的受试生物半数死亡所需最
5、小微生物数量或毒素量。3. 12 半数感染量median infective d脱orconcentratEOEhmJIC目在规定时间内,通过指定感染途径,使一定体重或年龄的受试生物半数感染所需最小微生物数量或毒素量.4 试验概述在一定试验条件下,以一定的供试物浓度或剂量测试对受试鸟的致死毒性和致病性等影响。当供试物最大危害暴露量试验出现对受试生物50%及以上的个体死亡或致病时,则还需进行剂量效应试验和致死(病)验证试验。致死毒性以LD50表征;致病性以10,0值表征。5 试验方法5. 1 材料和条件5. 1. 1 试验生物推荐物种为日本鹊鸦CCoturnixcoturnix ja户onica
6、)、野鸭CAnasplatyrhynchos)、北美鹊鸦CColi-nus virginianus)、鸽子CColumbalivia)等的幼鸟(孵化后14d24 d,且试验开始时受试鸟之间体重差别不超过10%)。受试鸟健康状况良好,引人实验室后7d内的死亡率应5%。5. 1.2 供试物5. 1.2. 1 类型微生物母药、制剂产品等。5. 1.2.2 批次通常情况下,试验中供试物应采用同一批次的产品。但在不得不使用另一批次产品时,应在试验报告中记录供试物的批次。5. 1.2.3 计蚊方法计数方法如下:细菌可采用稀释平板菌落计数法、荧光定量PCR等测定;真菌抱子以CFU为计数单位,可采用稀释平板菌
7、落计数法或血球计数板法等测定;2 NY/T 3152. 1-2017 一一原生动物以个体数目为计数单位,可采用血球计数板法等测定;一一病毒以包涵体等感染单位为计数单位,可采用荧光定量PCR、血球计数板法等测定;一-其他单位,根据微生物的类型和特性选择最适当的计数方法.以上推荐计数方法,参见附录A、附录B、附录C。5. 1. 3 主要仪器设备超净工作台。灭菌锅。显微镜。解剖镜。分光光度计。聚合酶链式反应仪。试验用鸟笼。温湿度计。玻璃容器。天平等。5. 1.4 试验条件受试鸟类5. 2. 3 效应观察试验期间每日反应时认为鸟已死亡。5.2.4 试验周期通常试验观察时间应持续30则需延长观察时间,直
8、至能够判5.2.5 最大危害暴露量试验。考虑微激产生开始出现死亡或明显病征,以下列不同暴露途径设置供试物最大危害暴露量。当因制剂剂型等条件限制,供试物溶液浓度不能达到最大危害暴露量时,则以供试物在水中能配制到的最大浓度进行试验。试验开始后,每日观察并记录受试鸟的中毒症状及死亡情况。当受试鸟在试验期间未发生死亡(病变)或死亡(病变)率不超过50%,则无需进行剂量效应试验和致死(病)验证试验。经口暴露和腹腔注射暴露的暴露量计算如下:a) 经口暴露量。最大危害暴露量按式。)计算。Dose=CXVo.IXW. (l) 式中:Dosemax一一最大危害暴露量,单位为微生物数量(units); 3 NY/
9、 T 3152. 1-2017 C一一供试微生物农药配制浓度,单位为微生物数量每毫升(units/mL) ; V时一一受试鸟单位体重经口暴露时摄入农药体积,单位为毫升每千克(mL/kg),取值为5mL/ kg; W一一受试鸟体重,单位为千克(kg)。供试微生物配制浓度为1.OX 108单位/mL,或按供试微生物农药推荐施用浓度的10倍计算(两者均能达到时,取较高值为配制浓度)。以此经口最大危害暴露量连续5d经口给药,然后正常饲喂直至试验结束。b) 腹腔注射暴露量,最大危害暴露量按式(2)计算。Dos乌田二CXV叫回回 xw(2) 式中:Vinj能阳一一受试鸟单位体重经口腹腔注射时摄入农药体积,
10、单位为毫升每千克(mL/kg),取值为2mL/ kg. 供试微生物农药配制浓度为1.0X108单位/此,或按供试微生物农药推荐施用浓度的10倍计算(两者均能达到时,取较高值为配制浓度。以此腹腔注射最大危害暴露量一次性腹腔注射,然后正常饲喂直至试验结束。5. 2. 6 剂量效应试验根据最大危害暴露量试验结果,按一定比例间距设置5组7组供试物系列浓度,将受试鸟暴露于不同浓度的供试物下。试验开始后,每日观察并记录受试鸟的中毒症状及死亡情况,求出试验结束时供试物对受试鸟类的LDso或ID,o及其95%置信限。5.2.7 致死(病)验证试验在元菌条件下解剖死鸟或病鸟,分离感染组织并接种至适合的培养基中,
11、将培养物置于适宜目标菌株生长条件下培养,分离纯化疑似菌株,疑似菌株经形态学、生理生化及核酸等方法鉴定并确认为目标菌株后,再以相同暴露途径感染健康的受试鸟。如果受试鸟出现与先前试验相同的病症,则证实目标菌株对鸟类具有致死(病)能力。5. 3 数据处理5.3. 1 统计方法选择试验结果的数据处理可选择5.3.2、5.3.3中所述的统计学方法,也可根据试验情况选择其他合适的统计方法。5. 3. 2 差异显著性检验5.3.2. 1 概述差异显著性检验推荐采用独立样本t检验或单因子方差分析(One-WayANOVA, LSD检验)等。显著水平取0.05(差异显著)、pO.Ol(差异极显著。5.3. 2.
12、 2 独立样本t检验2组均值比较时可进行独立样本t检验。独立样本t检验按式(3)计算。. (3) 式中2X1,X2 分别为两样本平均数;式,f2分别为两样本方差;n 一一样本容量。5.3.2.3 One-Way ANOVA方差分析(LSD检验)NY/T 3152.1-2017 3组及以上均值比较时可进行方差分析。LSD检验按式(4)计算。LSD. = t.w . Si,(份式中:t.df.一一在F检验中误差自由度下,显著水平为的临界t值;Si.-玉,一一均数差异标准误,按式(5)计算。Sh,=d丽.!可.式中:MS,-F检验中误差均方En 一一各处理重复数。5. 3. 3 半数致死量或半鸟类半
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