DB42∕T 1864.4-2022 家禽疫病诊断技术规程 第4部分:禽白血病抗原ELISA检测方法(湖北省).pdf
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1、 ICS 11.220 CCS B 41 DB42 湖北省地方标准 DB42/T 1864.42022 家禽疫病诊断技术规程 第 4 部分:禽白血病抗原 ELISA 检测方法 Code for practice diagnostic techniques of poultry diseases series Part 4: Test method for ELISA detection of avian leukosis antigen 2022-05-26 发布 2022-07-26 实施 湖北省市场监督管理局 发 布 DB42/T 1864.42022 I 目次 前言 . II 引言 .
2、III 1 范围 . 4 2 规范性引用文件 . 4 3 术语和定义 . 4 4 原理 . 4 5 试验条件 . 5 6 试剂或材料 . 5 7 仪器设备 . 5 8 样品 . 6 9 试验步骤 . 7 10 结果判定 . 7 11 生物安全措施 . 8 DB42/T 1864.42022 II 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件DB42/T 1864家禽疫病诊断技术规程为系列标准。 本部分为DB42/T 1864的第4部分。DB42/T 1864发布了以下部分: 第 1 部分:家禽主要肿瘤病病原鉴别。 第 2 部
3、分:禽大肠杆菌致病群双重探针法检测 第 3 部分:鸡沙门氏菌、产气荚膜酸菌和空肠弯曲菌三重荧光 PCR 检测方法。 第 4 部分:禽白血病抗原 ELISA 检测方法。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所提出。 本文件由湖北省农业农村厅归口。 本文件起草单位:湖北省农业科学院畜牧兽医研究所、湖北省动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人:汪宏才、罗青平、邵华斌、彭伏虎、温国元、王红琳、张蓉蓉、卢琴、罗玲、张腾飞、张文婷、商雨 本文件实施应用的疑问,可咨询湖北省农业农村厅,联系电话:027-87665821,邮箱:;对
4、本规程的有关修改意见建议请反馈至湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,联系电话:027-87156122,邮箱:。 DB42/T 1864.42022 III 引 言 近年来,我国高度重视动物传染病的预防和控制工作,在国务院颁布的国家中长期动物疫病防治规划(20122020年)中明确要求进一步做好种禽场疫病净化、加强疫病检测诊断能力建设。家禽及蛋制品产业链是湖北省的十大重点产业链之一, 为了加快湖北省重点农业产业链建设, 保证家禽养殖健康与食品安全,依据湖北省重点农业产业链实施方案,对影响家禽及蛋制品产业链的禽白血病、禽致病性大肠杆菌、沙门氏菌等家禽重要疫病开展快速检测方法研究。为加快我省家禽疫病净
5、化进程,提升疫病的监测、 检测效率, 促进我省家禽业持续健康发展, 起草组围绕家禽疫病防控的需要, 研制了 家禽疫病诊断技术规程系列标准,拟由4个部分构成。 第一部分:家禽主要肿瘤病病原鉴别。目的在于开展家禽 J 亚群白血病病毒、马立克氏病病毒、网状内皮组织增生症病毒的快速检测,指导家禽肿瘤病的快速鉴别诊断。 第二部分:禽大肠杆菌致病群双重探针法检测。目的在于检测家禽泄殖腔拭子和粪便中的致病群大肠杆菌,指导家禽致病群大肠杆菌的快速检测。 第三部分:鸡沙门氏菌、产气荚膜梭菌和空肠弯曲菌三重荧光 PCR 检测方法。目的在于检测鸡肉及相关产品、鸡泄殖腔拭子和粪便中的沙门氏菌、产气荚膜梭菌和空肠弯曲菌
6、,指导鸡肉及相关产品细菌性疾病的快速检测。 第四部分:禽白血病抗原 ELISA 检测方法。目的在于检测种鸡群蛋清、血浆、精液、胎粪、肛拭子中禽白血病抗原 ELISA 检测,指导种鸡场禽白血病的净化检测。 DB42/T 1864.42022 4 家禽疫病诊断技术规程 第 4 部分:禽白血病抗原 ELISA 检测方法 1 范围 本文件规定了种鸡场禽白血病酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测方法所需试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤及结果判定。 本文件适用于种鸡群蛋清、血浆、精液、胎粪、肛拭子中禽白血病抗原ELISA检测。 2 规范
7、性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中, 注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 26436 禽白血病诊断技术 GB/T 27403 实验室质量控制规范食品分子生物学检测 NY/T 680 禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 禽白血病病毒 avian leukosis virus, ALV 禽白血病病毒属于反转录病
8、毒科、正反转录病毒亚科、反转录病毒属的一类病毒。ALV可分为AK 11个亚群,其中与鸡相关且需净化的亚群主要有A亚群、B亚群、C亚群、D亚群、J亚群和K亚群6个外源性病毒。 3.2 酶联免疫吸附试验 enzyme linked immunosorbent assay,ELISA 将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上, 利用抗原抗体反应的高度特异性与酶标记技术相结合,进行免疫反应的定性和定量检测方法。 4 原理 本文件采用酶联免疫吸附法(ELISA),该方法利用抗原抗体反应具有特异性,将抗禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体吸附到固相载体的表面后,形成固相抗体。加入待测样本,孵育使待测样本
9、中p27抗原与固相抗体充分反应,形成固相抗体-抗原复合物。加入兔抗p27蛋白多克隆抗体后,再加入辣根过DB42/T 1864.42022 5 氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体形成复合物。加入酶反应底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与待测物中禽白血病病毒p27蛋白的量直接相关,因此可以根据颜色的深浅来进行定性或定量分析。 5 试验条件 实验操作应在室温(1825)下进行。样品前处理应在二级生物安全柜中进行。 6 试剂或材料 6.1 试剂配制 本方法试验用水应按照GB/T 6682中规定的二级水, 所有实验用试剂均为分析纯。 试剂配制按照GB/T 27403规定。 6.2 试剂或材料 6.2
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