DB15∕T 3279-2023 苜蓿根腐病锐顶镰刀菌鉴定方法(内蒙古自治区).pdf
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1、 ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 32792023 苜蓿根腐病锐顶镰刀菌鉴定方法 Identification of fusarium acuminatum of alfalfa root rot 2023-12-29 发布 2024-01-29 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 32792023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会(SAM/TC 19)归口。本文件起草单位:内蒙古自治区农牧业科学院、内
2、蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古自治区乡村振兴研究中心。本文件主要起草人:史志丹、孙红霞、丁海君、房永雨、杨永青、郭呈宇、伊风艳、燕梦娇、郭晨、孙林、刘思博、张英、刘亚东、李国强。DB15/T 32792023 1 苜蓿根腐病锐顶镰刀菌鉴定方法 1 范围 本文件规定了苜蓿锐顶镰刀菌根腐病鉴定的主要仪器与用具、主要试剂与材料、实验室检测、结果判定。本文件适用于苜蓿锐顶镰刀菌根腐病的室内鉴定。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。锐顶镰刀菌根腐病 fusarium acuminatum root rot 由锐顶镰刀菌(Fusarium acu
3、minatum)引起的苜蓿根腐病,在感染初期,苜蓿的根皮附近会出现褐色或暗褐色的坏死斑,根系毛根减少,部分叶子出现黄叶,发病严重时叶片枯黄,植株根部的中柱腐烂霉变,并发生坏死,根茎出现中空,侧根出现大量腐烂坏死,分枝减少。4 主要仪器与用具 光学显微镜、摇床、培养箱、超净工作台、高速冷冻离心机、PCR仪、培养皿、酒精灯、血球计数板、解剖刀、接种针、移液器、枪头、离心管。5 主要试剂与材料 试剂 5.1.1 次氯酸钠。5.1.2 无水乙醇。5.1.3 硫酸链霉素(500 mg/mL)。5.1.4 真菌基因组提取试剂盒。5.1.5 PCR SuperMix。5.1.6 凝胶电泳试剂:琼脂糖,TAE
4、,Loading Buffer,DL2000 DNA Marker。培养基 5.2.1 水琼脂培养基(WA:Water Agar):琼脂粉 15 g,加蒸馏水定容至 1000 mL,121 高压湿热DB15/T 32792023 2 灭菌 20 min。5.2.2 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA:Potato Dextrose Agar):马铃薯 200 g,葡萄糖 20 g,琼脂粉 15 g,加蒸馏水定容至 1000 mL,121 高压灭菌 20 min。5.2.3 马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB:Potato Dextrose Broth):马铃薯 200 g,葡萄糖 20 g,加蒸馏水定
5、容至 1000 mL,121 高压灭菌 20 min。5.2.4 绿豆琼脂培养基(MBA:Mung Bean Agar):绿豆粉 60 g,琼脂粉 15 g,加蒸馏水定容至 1000 mL,121 高压灭菌 20 min。6 实验室检测 病原菌的分离和纯化 6.1.1 病原菌的分离 从苜蓿田采集患有根腐病的典型病株。用水清洗样品表面的砂砾和土壤,从根部病健交界部位切成约0.5 cm0.5 cm的小组织块,用75%酒精和1%次氯酸钠分别处理3 min和5 min,无菌水清洗5次。把表面消毒的发病组织放在PDA培养基上25 培养,见附录A中的图A.1。6.1.2 病原菌的纯化 待PDA培养基长出菌
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