DB12∕T 946-2020 饲料中氨基酸的测定 离子交换色谱法.pdf
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1、ICS 65.120 B 25 DB12 天津市地方标准 DB12/T 9462020 饲料中氨基酸的测定 离子交换色谱法 Determination of amino acids in feeds-Ion exchange chromatography 2020 - 06 - 29 发布 2020 - 08 - 01 实施 天津市市场监督管理委员会 发 布 DB12/T 9462020 I 前 言 本标准依据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。 本标准起草单位:天津市畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人:杨鸿雁、梁世岳、李玉鹏、陈龙宾、范寰、乔家
2、运。 DB12/T 9462020 1 饲料中氨基酸的测定 离子交换色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中氨基酸的离子交换色谱法测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品的采集与制备、测定步骤和结果计算。 本标准适用于饲料原料、配合饲料及浓缩饲料中氨基酸含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 G
3、B/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 3.1 常规酸水解法 饲料中的蛋白质在盐酸的作用下, 水解成单一氨基酸, 经离子交换色谱法分离并以茚三酮柱后衍生测定。水解中,色氨酸全部被破坏,不能测量,胱氨酸和蛋氨酸部分氧化,不能测准。 3.2 氧化酸解法 将饲料蛋白中的含硫氨基酸(胱氨酸和蛋氨酸)用过甲酸氧化,使之转变为对酸稳定的氧化物,再通过酸水解法释放出来,经离子交换色谱法分离并以茚三酮柱后衍生测定。 3.3 碱水解法 饲料中的蛋白质在碱的作用下,水解出色氨酸,经离子交换色谱法分离并以茚三酮柱后衍生测定。 4 试剂和材料 4.1 本标准所用试剂和水,在没有注明其它要求时,均指分析纯试
4、剂和 GB/T 6682 中规定的一级水;所述溶液如未指明溶剂均系水溶液。 试验中所需溶液、 制剂及制品, 在没有注明其它要求时均按 GB/T 603的规定制备。 4.2 盐酸:优级纯。 4.3 盐酸溶液(6 mol/L):量取盐酸 500 mL,用水稀释至 1000 mL,混匀。 4.4 茚三酮溶液:按仪器说明书配制或购买。 4.5 pH 系列缓冲液、再生液:按仪器说明书配制或购买。 DB12/T 9462020 2 4.6 甲酸:浓度为 88%。 4.7 过甲酸溶液:将 30%过氧化氢与甲酸按体积比 1:9 混合,室温放置 1 h,置冰水浴中冷却 30 min,临用前配制。 4.8 盐酸溶
5、液(7.2 mol/L):取盐酸 600 mL,用水稀释至 1000 mL,混匀。 4.9 氢氧化锂溶液(4 mol/L):称取一水合氢氧化锂 167.8 g,用水溶解并稀释至 1000 mL,混匀。 4.10 柠檬酸钠缓冲液:称取柠檬酸三钠 14.71 g、氯化钠 2.92 g 和柠檬酸 10.50 g,溶于 500 mL 水中,加入硫二甘醇 5 mL 和辛酸 0.1 mL,定容至 1000 mL。 4.11 氢溴酸(48%):分析纯。 4.12 高纯氮气:纯度为 99.999%。 4.13 氨基酸混合标准储备液:含 L-天门冬氨酸、L-苏氨酸等 17 种常规水解分析用氨基酸,各组分浓度均为
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