DB65∕T 4680-2023 健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率调查技术规范(新疆维吾尔自治区).pdf
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1、ICS 11.020CCS C 01B65新疆维吾尔自治区地方标准DB65/T 46802023健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率调查技术规 范Technical specification for investigation of Neisseria meningitidis carrier rate in healthy population2023-07-20 发布2023-09-20 实施新疆维吾尔自治区市场监督管理局 发布DB65/T 46802023目 次前言.II1 范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14缩略语.15调查人群.26调查技术要求.2附录A(规范性)带菌率调查流程图.
2、4附录B(规范性)带菌率调查登记表.5附录C(规范性)STGG肉汤管配制方法.6附录D(规范性)Real-time PCR检测.7附录E(规范性)脑膜炎奈瑟菌培养.10IDB65/T 46802023I/,刖 百本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规 定起草。本文件由新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心提出。本文件由新疆维吾尔自治区卫生健康委员会归口并组织实施。本文件起草单位:新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心、新疆医科大学第一附属医院、新疆喀什地 区卫生健康委员会、新疆维吾尔自治区标准化研究院。本文件主要起草人:谢娜、岳锡宏、符文慧、陈兆云、陈涛
3、、凯赛尔吾斯曼、彭孝旺、李娟、孙 璐、王崇伟、关丽娜。本文件实施应用中的疑问,请咨询新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心。对本文件的修改意见,请反馈至新疆维吾尔自治区卫生健康委员会(乌鲁木齐市天山区新疆龙泉街 191号)、新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心(乌鲁木齐市天山区东泉路街道碱泉一街380号)、新疆 维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市天山区新华南路167号)。新疆维吾尔自治区卫生健康委员会 电话:09 9 1-8560651传真:09 9 1-8567240邮编:830001新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心 电话:09 9 1-3824473传真:09 9 1-382269 6邮编:83
4、0011新疆维吾尔自治区市场监督管理局 电话:09 9 1-2311250传真:09 9 1-2311250邮编:830004IIDB65/T 46802023健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率调查技术规范1范围本文件规定了脑膜炎奈瑟菌带菌率调查的术语和定义、缩略语、调查人群、调查技术要求。本文件适用于健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率调查。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1流行性脑脊髓膜炎meningococcal meningitis由脑膜炎奈瑟菌通过呼吸道传播引起的化脓性脑膜炎,简称“流脑”。3.2脑膜炎奈瑟菌 Neisseria meningiti
5、dis引起流脑的病原体。3.3带菌率 carriage rate健康人群中,口咽部携带有脑膜炎奈瑟菌的比例。3.4密切接触contact指同吃同住人员,包括家庭成员、托儿所、幼儿园、学校里的同班者及处在同一小环境中的人群。4缩略语下列缩略语适用于本文件。MM:流脑(Meningococcal Meningitis)Nm:脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)CFU/mL:每毫升菌落形成单位(Colony Forming Unit per mL)Real-time PCR:实时荧光聚合酶链式反应(Real-time Polymerase Chain Reaction)STG
6、G:脱脂奶粉胰蛋白葡萄糖甘油肉汤(Skim mHkTryptone Glucose Glycerol broth)sod。基因:铜-锌超氧化物歧化酶基因(superoxide dismutase Cu-Zn)1DB65/T 46802023c/M基因:荚膜转运基因(capsule transport A)5调查人群被调查的健康人群应同时符合以下两种情况:a)一周内无流脑相关症状,包括发热、头痛、呕吐、脑膜刺激征等。b)一周内无流脑病例密切接触史。6调查技术要求6.1 流行病学调查6.1.1 明确调查流程带菌率调查流程图见附录A。6.1.2 带菌率调查登记表带菌率调查登记表见附录B。6.1.2.
7、1基本资料的收集收集被调查人群的基本情况,包括以下内容:a)姓名;b)性别;c)出生年月;d)民族;e)职业;f)居住方式;g)呼吸系统疾病;h)抗生素使用情况;i)流脑疫苗接种史。6.1.2.2流脑疫苗接种信息的收集收集被调查人群的流脑疫苗接种情况,包括疫苗的种类、接种次数、接种日期等资料,。6.2 口咽拭子标本的采集、运输、处理及保存6.2.1标本的采集6.2.1.1采集前准备6.2.1.1.1试剂及耗材一次性无菌口咽拭子、压舌板、哥伦比亚血平板、双抗巧克力平板或双抗哥伦比亚血平板、STGG 肉汤管等。STGG肉汤管的配制方法见附录C。2DB65/T 468020236.2.1.1.2调查
8、采样人员确定采样人员应为经过培训的专业技术人员。6.2.1.1.3调查采样人员防护调查采样人员应穿工作服(白大褂)、戴一次性使用帽子、穿一次性使用隔离衣、戴一次性乳胶手 套、戴一次性使用外科口罩。6.2.1.2 采集6.2.1.2.1每个被采样者应采集1支口咽拭子,采样前准备一次性使用采样器(口咽拭子)。6.2.1,2.2采样时,被采样者应张大口,发出“啊”的声音,用压舌板下压舌中部,暴露出咽喉部位。6.2.1.2,3将一次性使用采样器(口咽拭子)伸进咽喉部位,在咽后壁悬雍垂后上方的位置迅速用力 左右擦拭2次3次。6.2.1.2.4采集完成后,将口咽拭子标本头部放入STGG肉汤管中,使拭子头部
9、完全浸入液体中,多 出的部分折断丢弃,拧紧螺旋管盖。6.2.2 运输标本采集完成后,需在2。8。冷藏状态下4 h之内尽快送至实验室。6.2.3 处理和保存6.2.3,1标本采集后,置于漩涡振荡器上连续振荡1 min,直接进行Real-time PCR检测(见附录D)和脑膜炎奈瑟菌培养(见附录E)。注:如当天无法开展检测,标本送至实验室后,应立即冻存于一20(及以下冰箱或干冰中。6.2,3.2冷冻样品,从冰箱或干冰中取出STGG肉汤管,室温放置至完全融化。按以上步骤进行标本 的处理。注:剩余标本应立即冻存于一20 P及以下冰箱或干冰中,以备复核检测。6.3 菌株保存及运输6.3.1菌株可保存于脱
10、纤维羊血管或10%的脱脂牛奶管,一20 P长期保存。6.3.2菌株需在冷冻或冻干状态下运输。3DB65/T 46802023附录A(规范性)带菌率调查流程图A.1带菌率调查流程带菌率调查流程图见图A.1。注:血清学分型实验与血清群特异性荧光PCR检测实验,两者开展其一即可。图A.1带菌率调查流程图4DB65/T 46802023附录B(规范性)带菌率调查登记表B.1健康人群带菌率调查登记带菌率调查登记表见表B.1。表B.1带菌率调查登记表采样编号姓名性别(1.男;2.女)出生年 月(或 岁)民族职 业居住方式(1聚居;2 散居)一周内 有无呼 吸系统 疾病(1 有;2 无),注明疾 病种类一周
11、内 有无服 用抗生 素(1 有;2 无3不详)注明药 物种类流脑疫苗接 种史(1.A 群;2.A+C 群;3.A群 与A+C群;4.其他(疫 苗名称);5.不详;6.未种)采样 日期(年/月/日)培养 结果(1.阳 性;2.阴 性)备 注注1:采样编号由9位数字组成,前6位是县国标编码,后3位是自然顺序号,从001开始。示例:阿克苏地区库车市调查的第21个适龄儿童,采样编号是652902021。注2:聚居:以学校或其他集体为单位,集中住宿。注3:散居:聚居以外的其他居住形式。5DB65/T 46802023附录C(规范性)STGG肉汤管配制方法C.1 STGG肉汤管配制STGG肉汤管配制试剂见
12、表C.1。表C.1 STGG肉汤管配制试剂成分用量胰蛋白大豆肉汤基础粉15 g葡萄糖粉2.5 g脱脂奶粉10g甘油50 mL双蒸水500 mL注:按照比例调整每种成分的用量,以配制实际需求量。C.2配制方法C.2.1在大小合适的干净容器里依次放入双蒸水、胰蛋白大豆肉汤基础粉、脱脂奶粉和葡萄糖粉;C.2.2将容器置于磁力搅拌器上,室温高速(1000 rpm1500 rpm)搅拌20 min,直到完全溶解;C.2.3加入甘油,室温中速(500 rpm 1000 rpm)继续搅拌10 min;C.2.4将溶液分装于1.5 mL的冻存管中,每支分装1 mL,拧上螺帽(留少量空隙);C.2.5将装有溶液
13、的冻存管置于121。103 kPa137 kPa,高压10 min,取出,置室温冷却,拧紧 螺帽。C.3质量检测C.3.1无菌实验随机挑取3支冻存管,用无菌枪头从每支中吸取100叱肉汤,接种于哥伦比亚血平板(倾斜法),待完全吸收后将平板置于37。,5%CO2条件下培养24h,观察是否有菌落生长,无任何菌落生长的肉汤 继续进行生长实验。C.3.2生长实验取少许新鲜培养的脑膜炎奈瑟菌菌苔,置于无菌生理盐水中配制0.5麦氏单位的菌悬液(菌落计数 约为2X 108CFU/mL),稀释1 X 1。5倍,取100 piL接种于哥伦比亚血平板(用接种环涂抹至整个平板),待完全吸收后将平板置于37,5%CO2
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