学位论文:中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究.pdf
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1、安徽中医学院硕士学位论文中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究摘要目的:研究中药益智仁和盐炙益智仁的炮制工艺、建立相应质量标准,并对其进 行初步药效学对比研究,为益智仁及其盐炙品的工业化生产提供稳定可行、参数 可控的生产工艺,并为临床用药提供依据.方法:通过对益智仁及益智壳的各类成分进行比较研究,初步建立其质量评价指 标,并经过预试验选择出炮制工艺中主要影响因素;经过正交试验优选出最佳实 验室炮制工艺,并经过实验室放大试验后,进行十批中试放大试验,确定最佳工 艺参数;通过对十批中试益智仁和盐炙益智仁进行全面质量研究,并对在两种包 装条件下的三批样品进行稳定性考
2、察试验,建立益智仁和盐炙益智仁的质量标 准;通过对十批益智仁的药材进行HPLC分析,建立益智仁药材的指纹图谱;对益智仁及盐炙益智仁的挥发油进行GC-MS研究,分析炮制前后其挥发油成分 的变化;通过对动物应激反应和“阳虚证”和“阴虚证”小鼠免疫器官重量的影 响,对益智仁及盐炙益智仁的药效学进行初步研究。结果:确定益智仁和盐炙益智仁的炮制工艺,建立了益智仁和盐炙益智仁的质量 标准,并建立了益智仁药材的HPLC指纹图谱;益智仁和盐炙益智仁均能显著 增强小鼠耐寒能力和抗疲劳能力,显著增加阳虚和阴虚小鼠的免疫器官的重量。结论:炮制工艺稳定、可行、参数可控,质量标准能有效控制产品质量;该药材 及其盐炙品具
3、有较强的增强免疫作用.关键词:益智仁;盐炙益智仁;炮制工艺;质量标准;正交试验;皿指纹图 谱;气相色谱一质谱联用;药效试验.中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究ABSTRACTObjective:To stud y th e pr ecessing tech no l o gy a nd q ua l ity sta nd a r d o f Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e(FAO)a nd Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e fr ied with Sa l t(FAOFWS),a nd to co mpa r
4、e th e pr el imina r y ph a r ma co l o gic exper iments o f th em,wh ich pr o vid e th e stea d y wo r ka bl e a nd th e fa cto r ca n be co ntr o l l ed pr o d uctive tech no l o gy fo r ind ustr ia l pr o cess a nd th e exper imenta l ba sis fo r th e cl inica l a ppl ica tio n.Methods:By stud y
5、o n th e ma ny ch emica l ingr ed ients o f FAO a nd FAOFWS esta bl ish th e pr el imina r y eva l ua ting ind ica to r a nd th r o ugh pr epa r a tio n exper iment to ch o se th e ma in fa cto r o f pr ecessing tech no l o gy.We scr eened th e o ptimum l a b pr ecessing tech no l o gy ma inl y th r
6、 o ugh o r th o go na l d esign.After enl a r gel a b exper iment a nd pr o d uced tenba tch essa mpl es,wescr eened th eo ptimum tech no l o gy pa r a meter.Byr o und l yr esea r ch th eq ua l ity o f ten ba tch es pr o d uct o f FAOa nd FAOFWS,weesta bl ish ed th eq ua l ity sta nd a r d o f FAO a
7、 nd FAOFWS.we stud y o nth e finger pr into f FAO fr o m a na l yzed th e tenba tch espr o d ucts byHPLC.We fir st a ppl ied GC-MS to id entify a nd co mpa r e th e ch emica l co nstituents o f vo l a til e o il fr o m FAO a nd FAOFWS.By pr el imina r y ph a r ma co l o gic exper iments,we wo ud stu
8、d y th a t FAO a nd FAOFWS infl unced str ess r ea ctio n a nd th e weigh t o f Ya ng-Deficiency Synd r o me a nd Yin-Deficiency Synd r o me r a ts5 immune o r ga n.Results:We esta bl ish ed th e pr ecessing tech no l o gy a nd q ua l ity sta nd a r d o f FAO a nd FAOFWS.At sa me time,we esta bl ish
9、 ed th e finger pr int o f FAO to o.we fo und th a t FAO a nd FAOFWS co ul d enh a nced r a ts co l d r esista nce a nd a nti-fa tigue a bil ities.Th ey co ul d enh a nced th e weigh t o f Ya ng-Deficiency Synd r o me a nd Yin-Deficiency Synd r o me r a ts immune o r ga n to o.Conclusion:Th e pr ece
10、ssing tech no l o gy is sted d y a nd wo eka bl e,a nd ifs tech no l o gy pa r a meter co ul d be co ntr o l l ed.Th e q ua l ity sta nd a r d co ul d r o und l y mo nito r th e q ua l ity o f pr o d uct.FAO a nd FAOFWS co ul d str ength ened 2中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究immune functio ns.Key words:Fr uctus a
11、 l pinl a e o xyph yl ia e(FAO);Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e fr ied with Sa l t(FAOFWS);pr ecessing tech no l o gy;q ua l ity sta nd a r d;o r th o go na l d esign;(h igh per fo r ma nce l iq uid ch r o ma to gr a ph y)HPLC;finger pr int;Ga s ch r o ma to gr a ph yma ss spectr um(GC-MS);(th
12、in l a yer ch r o ma to gr a ph y)TLC;pr el imina r y ph a r ma co l o gic test.3中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究中英文名词对照表缩略词中文名英文名英文缩写益智Al pinia o xyph yl l a Miq.AOM益智仁Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia eFAO益智壳Al pinia o xyph yl l a Miq.Hul lAOMH盐益智仁Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e fr ied with Sa l tFAOFWS紫外
13、ul tr a vio l etuv红外infr a r edIR质谱ma ss spectr umMS高效液相色谱h igh per fo r ma nce l iq uid ch r o ma to gr a ph yHPLC气相色谱-质谱联用ga s ch r o ma to gr a ph y-ma ss spectr umGC-MS薄层色谱th in l a yer ch r o ma to gr a ph yTLC相对标准偏差r el a tive sta nd a r d d evia tio nRSD娜免疫吸附法Enzyme-l inked Immuno So r bent A
14、ssa yELISA4中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究刖百益智仁为姜科植物益智Al pinia o xyph yl l a Miq.的成熟果实.为中医临床常 用药材,由于益智仁的炮制方法历代不统一,目前尚未见客观统一的炮制品种及 炮制工艺,有生品去壳用、生品带壳用;盐炙品传统炮制工艺操作多凭药工经验 进行、缺乏统一的工艺技术参数,产品质量评价以感观为主,多为定性描述,缺 乏定量的内控指标参数,造成产品质量参差不齐,影响临床效果,难以适应规模 化生产和日益增长的用药需求。鉴于此,本课题组成员在对益智仁炮制的历史沿 革和现代文献研究的基础上,选择益智仁常用的
15、两种商品规格,即益智仁、盐炙 益智仁,通过对益智仁的挥发油含量、水浸出物、醇浸出物和酸浸出物、多糖、总黄酮的含量进行系统分析,并以水浸出物、醇浸出物和酸浸出物等的含量作为 其主要考察指标,研究确定益智的去壳工艺和盐制的工艺技术参数,建立益智仁、盐制益智仁二种饮片的中试生产工艺,同时建立益智仁、盐制益智仁二种饮片的 质量标准,进一步探讨益智仁、盐制益智仁二种饮片的皿指纹鉴别图谱,以 便对其进行质量控制,从而为振兴中药事业,加快中药产业现代化发展战略步伐 作出贡献.5中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究第一部分:益智的成分及初步质量研究2000版、2005版中国药典对益智仁和盐益智仁的质量控制仅以
16、性状检 查、显微和薄层鉴别以及挥发油的含量测定来进行质量评价,然而随着储存时间 的长短、储存方式的不同甚或产地的不同,对挥发油均有较大的影响,从而难以 评价益智的质量.由于益智的质量控制比较粗糙、笼统,为了给益智仁及其炮制 品的质量评价提供一个准确的量化指标作为参考,本课题希望通过对益智的化学 成分进行全面研究后,从中分离得到益智的指标性成分或有效成分及其有效部 位,以便为益智的炮制工艺的优选和质量控制提供依据。L益智化学成分的研究L1样品制备:取净益智,粉碎,制成粗粉后备用。L 2实验试剂及仪器:薄层层析硅胶(青岛海洋化工有限公司)、硅胶(青岛海 浪硅胶干燥剂厂,柱层析用)、分析天平(江苏常
17、熟恒器厂)、Hi S11-2电 热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂)、SB-取循环水式多用真空泵(郑州长 城科工贸有限公司)、真空干燥箱(上海浦东跃欣科学仪器)、VRS4B型熔点 测定仪(上海索光光电技术有限公司)、VGAUTO Spec-3000质谱仪、所用试 剂均为分析纯61.3益智有效成分的提取及分离称取10%的益智粗粉,以乙醇拌匀浸润后,装入渗漉筒中,再以乙醇浸泡 24小时后,以20ml/h in的速度用乙醇进行渗漉提取,收集渗漉液,减压回收乙 醇,得浓缩液。取浓缩液,加蒸播水将含醇量调至7仍后分次以氯仿萃取,减压 回收氯仿得氯仿萃取物。取氯仿萃取液,以乙醇溶解完全后,用硅胶拌样,水浴蒸
18、干,再在红外灯下 完全烘干.装入已处理好的硅胶色谱柱中,以石油酸一乙酸乙酯进行梯度洗脱,每500ml收集一份,回收洗脱液,并将每份洗脱液进行检识,将组分相同的 洗脱液合并。结果在180 201份的合并液中有大量片状结晶析出,在1407 1516份的 合并液中有大量白色沉淀产生,分别滤取后得样品结口样品B将样品A再经过硅胶小柱分离后得化合物I,经测定熔点为139-140C,与对照品。一谷笛醇的Rf值一致,并经过对该化合物的NB进行分析,如图如6中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究下所示:图1-1。一谷笛醇NB图综上所述,该化合物为。一谷笛醇.将样品B经过丙酮重结晶,得到无定形粉末,再以甲醇加热使
19、之完全溶解,趁热过滤,浓缩,静置后得到大量白色化合物n析出,化合物n Mo l ish反应为 阳性反应,经硫酸水解后对水解糖液进行PS分析,检出葡萄糖,对水解后的昔 元进行检识并用6一谷备醇对照品对照检出。一谷留醇,熔点测定值为:298-29究并经过对该化合物的NB进行分析,NB图如下所示:图1-2胡萝卜昔NE图7中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究由以上试验及N6结果,确定化合物II为胡萝卜甘.由于6一谷备醇和胡萝卜昔大量分布在多种植物中,自身的生理活性较弱,无法作为益智的指标性定量成分用来控制其质量.2益智仁中总黄酮含量测定据文献报道,益智中主要含有:挥发油、菇类、黄酮类、庚烷衍生物类成分
20、.现代研究表明,黄酮类化合物均在临床上有多种生物学活性,近年来对益智化学 成分的深入研究,发现其中几个重要成分便是黄酮类。而且黄酮类成分均较挥发 油易于控制,鉴于此,本实验以益智仁中总黄酮的含量为研究指标,探讨其测定 方法,从而为益智的质量评价提供一定的依据.21仪器与试剂757-CRT型紫外可见分光光度计(上海棱光仪器有限公司),心285型电子 天平(梅特勒书利多仪器有限公司)、石油酸,乙酸,亚硝酸钠,无水氯化铝,氢氧化钠均为分析纯 2 2方法与结果 2 2 1样品液的制备取益智仁生品适量,经粉碎机打粉过30目筛,得到益智仁粉末,置于洁净 干燥的广口瓶中,并密封好后备用。取本品粉末约2克,6
21、cpe干燥6小时,精密称定,置于圆底烧瓶中,先加 15倍量60 9cpe沸程的石油酸脱脂l h过滤.滤渣中再加12 5倍量60 9cpe 沸程的石油酸脱脂0.5h弃去石油酸液.再加入25倍量8跳勺乙醇回流2h 20 倍量的8g醇回流l h过滤,用80定醇少量洗涤容器和药渣,合并提取液和 洗液,挥去溶剂,以8%醇溶解过滤,定量转移至10311容量瓶中,加8%醇至刻度,摇匀,即得样品液。2 2 2标准液的配制精密称取于12cpe下干燥至恒重的芦丁对照品19.2mg置于l OOnl容量瓶中,加8%醇溶解,定容至l OQnl即得。2 2 3吸收波长的选择精密移取样品溶液3.0ml和对照品溶液3.0ml
22、分别置25ml容量瓶中,分别 8中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究加入5/a?Q和各1.0ml,静置6min再加入1(WHQ Qml,加水至 刻度摇匀后放置5min同法用相应的溶剂作空白,在300 600nm范围内进行扫 描,以确定样品溶液和芦丁对照品溶液的最大吸收波长.吸收图谱见图和图 1T由图可知,最大吸收波长为510nr aUV7S7CRT*叶T兄介尤先戊计黄杵-0。】200 220 24C no no 300 320 MO 360 3M _ 420 JO 400 460 520 540 50 SSOIfttt 2.,。*猊“冏:I2.M na 中坦 戈”向制:It*图IT对照品溶液吸
23、收图2 2 4标准曲线的绘制精密移取 2 2.2 项下标准液 2.5ml,3.Ch il,3.5ml,4.Qml,4.5ml,5.Onl于6个25ml容量瓶中,再依次用80X醇补足至5.Ch il,再加入5%娅Q和1仿公1。3 9中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究各1.Qnl,静置6min再加入ICWHIO.0ml,加水至刻度摇匀后放置15min 同法用相应的溶剂做空白,510nm下测定,结果在线性范围19.2-38如范 围内,吸收度与浓度呈良好的线性关系,其回归方程:A=0.0151GH).0381,相关 系数r=0.9999测定结果见表1-1绘制标准曲线见图1&表1T标准液吸光度(D样品
24、取样量(ml)-F6-40 5.0吸光度 A 0.328 0.388 0.445 0.503 0.560 0.620图15标准曲线2.2 5稳定性实验2 2 5.1母液的稳定性以样品液定容后计时,每小时测定一次,考察其稳定性.取样品液3.Qnl置 25ml容量瓶中,如2.2,3项下方法显色.测定结果见表1-2表12母液稳定性考察(n=6)时间Oh l h 2h 3h 4h 5h吸光度0.299 0.289 0.309 0.303 0.303 0.303结果X=0.301 RSEA2 224%结果表明,样品液在5h内基本稳定,2 2 5.2显色后样液的稳定性以样品显色放置5min后记时,考察其显
25、色后l h内稳定性。测定结果见表 结果表明显色后l h内样液基本稳定。10中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究表1-3显色后母液的稳定性(nW)时间(min)010 20 30 405060收度度 Q 2990.305 0.297 0.292 0.2940.2950.294结果X=O.297 RSM.615%2.2 6精密度实验精密移取同一份样品溶液共6份,每份3.0ml置25ml容量瓶中,如2.2 3 项下方法显色,同法以相应的溶剂做空白,于510nm下测定,结果见表1TRSD=0.531%精密度良好.表IT 精密度实验(nW)样品号 12 3 456吸收度 0.3150.317 0.316
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