DB32∕T 3764-2020 医疗污水病毒检测样品制备通用技术规范.docx
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1、ICS13.060.30Z 10DB32江苏省地方标准DB32/T 3764-2020医疗污水病毒检测样品制备通用技术规范General technical specification for the sample preparation of viral test in medical wastewater 2020-03-11发布2020-03-12实施发布江苏省市场监督管理局目次前言1 范围12 规范性引用文件13 术语、定义和缩略语14 试剂和材料25 仪器与设备36 样品采集、保存、运输和交接3 6.1样品采集3 6.2样品保存、运输和交接47 样品制备4 7.1总则4 7.2技术要
2、求4 7.3pH调节5 7.4预过滤与悬浮颗粒物病毒检测样品制备5 7.5游离态病毒检测样品制备5 7.6数据记录58 质量控制59 废物处置510 风险防范6 10.1现场采集6 10.2样品运输6 10.3实验室分析6附录A (资料性附录) 医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表7附录B (规范性附录) 医疗污水病毒检测样品制备过程中质量控制方法8参考文献10前 言为指导全省医疗机构开展医疗污水中病毒的监测,规范医疗污水病毒检测样品制备流程,确保监测数据准确,根据医疗机构水污染物排放标准污水监测技术规范等有关规定,特制定本标准。本标准由南京大学提出。本标准由江苏省生态环境厅归口。本标准起草单
3、位:南京大学宜兴环保研究院、南京大学、清华苏州环境创新研究院。本标准主要起草人:任洪强、张徐祥、耿金菊、刘鹏、黄霞、刘欣宇、许柯、朱燕、周小红、刘艳臣、吴兵、黄辉。医疗污水病毒检测样品制备通用技术规范1 范围本标准规定了医疗污水病毒检测样品制备的试剂和材料、仪器和设备、样品采集、保存、运输和交接、样品制备、质量控制、废物处置和风险防范要求。本标准适用于医疗污水病毒检测样品制备。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 18466-2005 医疗机构水污染物排
4、放标准HJ 91.1-2019 污水监测技术规范HJ 421-2008 医疗废物专用包装袋、容器和警示标志标准医疗废物集中处置技术规范(试行) 环发2003206号3 术语、定义和缩略语3.1 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1医疗污水 medical wastewater 从事疾病诊断、治疗活动的医院、卫生院、疗养院、门诊部、诊所、卫生急救站等产生的废水,主要指医疗机构门诊、病房、手术室、各类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平间等处排出的诊疗废水、生活及粪便污水。当医疗机构其他污水与上述污水混合排出时,视为医疗污水。3.1.2病毒 virus由核酸和蛋白质外壳构成的严格细
5、胞内寄生的非细胞生物。3.1.3样品制备 sample preparation根据检测方法的要求,将样品处理到符合后续分析要求的所有样品制备过程,包括但不限于pH调节、预过滤和样品富集等步骤。3.1.4病毒富集 viral enrichment通过吸附-洗脱、离心-重悬浮、过滤等技术方法,缩小样品体积同时提高样品中病毒浓度的过程。3.1.5空白样品 blank sample将实验用水代替实际样品,按照与实际样品一致的分析步骤进行测定。3.1.6空白加标样品 blank spike sample将实验用水代替实际样品,并添加已知量标准物质,按照与实际样品一致的分析步骤进行测定。3.1.7基体加标
6、样品 matrix spike sample在待测样品中添加已知量标准物质的样品,按照与实际样品一致的分析步骤进行测定。3.1.8噬菌体效价 bacteriophage titer每毫升试样中含有侵染性噬菌体的粒子数,一般以噬菌斑形成单位(Plaque forming unit, PFU)计数。3.2 缩略语下列缩略语适用于本文件。EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic Acid)Tris:三羟甲基氨基甲烷(2-Amino-2-hydroxymethyl-1, 3-propanediol)4 试剂和材料4.1 所用试剂应使用分析纯试剂和无菌纯水,特殊情况除
7、外。4.2 浓盐酸溶液:(HCl)=37 %。4.3 浓硫酸溶液:c(H2SO4)=18.4 mol/L。4.4 乙醇溶液:(C2H5OH)=75 %。4.5 消毒剂:有效氯浓度为1000 mg/L。4.6 次氯酸钠溶液:有效氯质量分数为5 %。4.7 次氯酸钠溶液:有效氯质量分数为0.1 %。取20 mL次氯酸钠溶液(4.6),与980 mL无菌纯水混合。4.8 硫代硫酸钠溶液:(Na2S2O3)=5 %。称取预先在105 110 干燥2 h的硫代硫酸钠50 g,溶于950 mL纯水中,在20 2 下平衡,混匀。放入聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中,密封保存。4.9 盐酸溶液:c(HCl)= 1 mo
8、l/L。量取83 mL浓盐酸溶液(4.2),缓慢加入917 mL水中,混匀。4.10 氯化镁溶液:c(MgCl2)=2.5 mol/L。称取预先在105 110 干燥2 h的无水氯化镁 23.80 g,溶解于80 mL水中,加水稀释至100 mL,混匀。4.11 稀硫酸溶液:c(H2SO4)=100 mmol/L。使用玻璃棒沿杯壁向纯水中缓慢加入5.4 mL浓硫酸溶液(4.3),充分混匀。待冷却至室温后,加水稀释至1000 mL,放入聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中,密封保存。4.12 稀硫酸溶液:c(H2SO4)=0.5 mmol/L。向纯水中加入5 mL的稀硫酸溶液(4.11),充分混匀。待冷却至室
9、温后,加水稀释至1000 mL,放入聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中,密封保存。4.13 氢氧化钠溶液:c(NaOH)=1 mol/L。称取4 g氢氧化钠溶解于纯水中,混匀,待冷却至室温后,加水稀释至100 mL,放入聚乙烯瓶中,密封保存。4.14 氢氧化钠溶液:c(NaOH)=1 mmol/L。向纯水中加入1 mL氢氧化钠溶液(4.13)充分混匀,加水稀释至1000 mL,并放入聚乙烯瓶中,密封保存。4.15 100Tris-EDTA缓冲液:称取12.11 g三羟甲基氨基甲烷,3.36 g乙二胺四乙酸二钠,溶解于80 mL纯水中,使用盐酸溶液(4.9)调节pH值至8.0,加水稀释至100 mL。放入聚
10、乙烯瓶中,密封保存。4.16 磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠0.58 g,磷酸氢二钠2.5 g,氯化钠8.5 g,溶解于850 mL纯水中,定容至1000 mL。转移至硬质玻璃瓶中于121 灭菌15 min,于4 保存,不超过1个月。4.17 玻璃纤维滤膜:直径90 mm,孔径0.45 m。4.18 混合纤维素酯滤膜:表面负电滤膜,直径90 mm,孔径0.45 m。4.19 超滤离心管:容积15 mL,配有100 kDa滤膜。4.20 离心管:材质为聚丙烯,容积15 mL。4.21 冻存管:容积2 mL。5 仪器和设备5.1 水质取样器:容积不小于2500 mL,材质为有机玻璃。5.2 真空泵:
11、最高压力大于等于4 bar,最高真空度大于等于-80 KPa,最高空载流量大于等于20 L/min。5.3 砂芯过滤器:滤头直径为90 mm,接收瓶体积为1000 mL,并配备漏斗。5.4 高速冷冻离心机:离心温度可在4 20 范围内调节,转速可在010000 g范围内调节,配备50 mL规格离心管。5.5 超低温冰箱:最低保存温度为-80 。5.6 冰箱:温控范围能够保证达到2 8 。5.7 pH计:测量范围014,最小分度为0.1 pH单位。6 样品采集、保存、运输和交接6.1 样品采集6.1.1 应按照HJ 91.1-2019中5.1和GB 18466-2005中6.1.1的规定设置单位
12、污水排放口,并设置排放口标志。6.1.2 采样前应了解医疗污水来源及性质、排放规律、医疗污水处理工艺、污水类型和污水排放标准等情况。6.1.3 在单位污水排放口设置监测点位,应按照GB 18466-2005中6.1.2的规定。当监测污水处理设施对病毒的整体处理效率时,应在污水进入污水处理设施的进水口和污水处理设施的出水口设置监测点位;当监测各污水处理单元对病毒的处理效率时,在各污水进入污水处理单元的进水口和污水处理单元的出水口设置监测点位。6.1.4 单位污水排放口的监测点位,监测频率每月不应少于一次;污水处理设施的进水口和污水处理设施的出水口的监测点位,监测频率每季度不应少于一次;污水处理单
13、元的进水口和污水处理单元的出水口的监测点位,监测频率每季度不应该少于一次。6.1.5 采样频率为每4 h采样一次,一日至少采样3次,测定结果以日均值计。6.1.6 收治了传染病病人的医疗机构,应根据GB 18466-2005中6.1.3的规定增加采样频率。单位污水排放口的监测点位,应每日监测;污水处理设施的进水口和污水处理设施的出水口的监测点位,每周不应少于一次;污水处理单元的进水口和污水处理单元的出水口的监测点位,每周不应少于一次。6.1.7 采样容器采用聚乙烯塑料桶,使用前应用次氯酸钠溶液(4.7)浸泡30 min,并使用无菌水冲洗3次。6.1.8 采样前,水质取样器应用次氯酸钠溶液(4.
14、7)浸泡30 min,并使用无菌水冲洗3次。6.1.9 采样前,水质取样器和采样容器应使用待采样品冲洗3次。6.1.10 样品采集体积应不少于5 L,保存于聚乙烯塑料桶中。6.1.11 若样品为经过有效氯消毒的污水,应在采样后立即用硫代硫酸钠溶液(4.8)充分中和游离余氯。可考虑每升水样添加10 mL硫代硫酸钠溶液(4.8),混匀。6.1.12 样品容器上应粘贴标识或标签,采集时记录样品信息,注明编号、采样日期、采样地点和采样者姓名等信息。6.2 样品保存、运输和交接6.2.1 样品保存、运输和交接应符合HJ 91.1-2019中第7章的规定。6.2.2 采样后,样品应立即冷藏避光保存,冷藏温
15、度宜为2 8 。样品采集结束后应密封保存,并使用75 %乙醇擦拭消毒或有效氯1000 mg/L的消毒剂对外包装擦拭消毒后,再进行二次密封后装运回实验室。 6.2.3 运输过程中应防止样品容器霜冻、破裂、温度升高或外部污染。6.2.4 样品的制备应在24 h内完成。若因实验条件限制无法及时完成,应将水样于-20 保存,不超过1周,且应避免反复冻融。7 样品制备7.1 总则7.1.1 医疗污水病毒检测样品包括吸附于污水中悬浮颗粒物表面的病毒检测样品和污水中游离态病毒检测样品。7.1.2 样品制备应尽量于采样现场完成。若现场不满足制备要求,应按照6.2的规定转移至实验室进行处理。7.1.3 根据病毒
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