DB62_T 4068-2019 食用百合脱毒技术规程(甘肃省).pdf
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1、ICS 65.020 B 16 DB62 甘肃省地、万标准DB62/T 4068-2019 食用百合脱毒技术规程2019-10-23发布2019-12-01实施甘肃省市场监督管理局发布DB62/T 4068-2019 目次前言.1 m围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语与定义.1 4 食用百合脱毒种苗生产疏程.1 5 1的夜的配制和保存.1 6 室咐灭菌.3 7 脱毒材料.3 8 病毒检测.4 9 脱毒组培苗扩繁.4 10 炜、苗移栽与管理.4 附录A(规范性附录)食用百合服毒种苗生产梳程.6 附录B(资料性附录)培养基药品名称、用量及母液配制.7 附录c(资料性附录)培养基配制.8 附录
2、D(资料性附录)基质消毒方法.9 I 0862/T 4068-2019 II 目IJ1=1 本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准自甘肃省农业农村厅提出、归口井监督实施。本标准自甘肃省农业科学院生物技术研究所制定c本标准主要起草人:林玉红、裴怀弟、崔文娟、石有太、障军、李淑洁。DB62/T 4068-2019 食用百合脱毒技术规程1 范国本标准规定了食用百合服毒种苗生产的术语和定义、常用i窑掖配制、培养基制作与处理、消毒与接种、脱毒苗生产等技术要求c本标准适用于茎尖培养和热处理相结合方哇生产食用百合服毒种苗c2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的
3、引用文件,仅注日期的版本适用于本文件c凡是不住日朗的号|用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本丈件。GB/T 603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB 5749 生活饮用水卫生标准GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法NY/T 174斗切花百合服毒种球下列术语和定义适用于本文件c3 术语与定义3.1 脱毒材料virus-fre巳mat巳rial利用生物技术手段,对感染病毒的植物组织进行茎尖剥离、热处理、化学药剂处理等有效服毒方法,从而获得的无病毒种苗材料c3.2 增吉直培养proliferationculture 将离体无菌芽苗周期性的分株、分配、剪苗等操作后转接入
4、新鲜增噩培养基中不断倍增的培养过程。3.3 程过养培e的阳十八时即VM到回情肿削酣m吁同吕巳试养合培百大导酶诱4 食用百合脱毒种苗生产流程见附录Ao5 溶液的配制和保存5.1 母液的配制5.1.1 串IJ备原则1 0862/T 4068-2019 MS为基础培养基,药品配制按照GB/T603规定方法配制,实验室用水执行GB/T6682标准,母液成份参见附录Bo配置好的母;在贴上标签,斗。C冰梧保存,贮藏时间在23个月之内,如有霉菌QX:l冗淀则不得使用。5.1.2 大量元素母液配制大量元素母液配成50倍的贮备液。不同药品单抽i自解,持前一种药品完全南解后再加入后一种化学药品,1在(lJ类推,用
5、三级蒸锢水定容至1000mL5.1.3 钙盐母液配制钙盐母、液配成50倍的贮岳液c将称量好的药品不断搅拌使之完全帘膊,用三组草帽水定容至1000m 5.1.4 微量元素母液配制世量元素母3夜配成100倍的贮备掖c不同药品单抽i窑解,持前一种药品完全擂解后再加入后一种化学药品,依次类推,用三级革情水定寄至1000mL5.1.5 铁盐母液配制铁盐母i夜配成1001击的贮岳液c分另Ui吾解FeS04.7H20和Na2-EDTA,不断搅拌使之完全暗解,再将2种m;t夜泪合,用三级革情水定容至1000mL5.1.6 维生章母;在配制蛙生素母液配成200倍的贮备液。不同药品单租暗解,宿牌后逐个混合,用三级
6、革情水走容至500mL5.1.7 植物激素母液配制(6_2音基腺哩吟)6-BA用2M的氢氧化呐助帘,再用三级革情水配制成0.5mglL或者1mg/L的母液;(菜乙酸)NAA用95%乙醇助悟,再用三级亲情水配制成0.5mglL或者1mg/L的母、液c配置好的母液贴上标签,-20C/Jj(自冷冻保存备用,用时提前解眩目口可,贮藏时间3个月之内,如在沉淀析出则不得使用c5.2 培养基配制与处理5.2.1 培养基配制基本培养基由化学药品、t在糖、王草月旨和水组成c所需黑帽浓度为30g/L琼脂粉浓度是5g/L配制培养基使用的水应按照GB5749标准执行。5.2.2 PH值的调整用酸度计QX:精密PH试生
7、民(干煤保存,避免受潮进行调试。PH值在5.86.0为直QPH5.8用1M的HC1调节c5.2.3 培养基的分装配制好的培养基趁热分装,200mL组培瓶每瓶装35mL40mL左右,分装后立即封口,做好标记。5.2.4 培养基的页菌与储藏2 DB62/T 4068-2019 将装入培养基的组培瓶放入高压灭菌铜咐,压力。11Mpa,国度121C,灭菌20mm,灭菌后取出培养基冷却持用c灭菌后的培养基可在无菌QX:洁净实验室r*J储藏不超过30do6 室内页菌6.1 组培室页菌接种室和培养室每半年用甲醒和高瞌酸押熏黑U)co使用剂量为每立方米空间用甲醒lOmUl0高瞌酸押5g的配比液熏菜。密封10h
8、12h后,开门窗Jm凤t臭气c6.2 接种室i肖毒保持接种室请沽卫生,在接种工作前进行紫外盯灭菌20min30min,必要时用75%乙醇喷雾沉降灰/、工仨c6.3 超;争工作台消毒开始工作前用紫外灯杀菌20mm30mm,鼓风20mm以上o6.4 接种人员消毒接种员无用肥皂白于,接种前在军J中间抉好专用实验服、拖鞋,戴上口罩,用75%乙醇项雾消毒c6.5 接种器楠、工作台面等消毒接种器橄(锤子、解剖刀和剪刀等置180C烘秸消毒,然后用酒精灯火焰灼;国灭菌,超净土1t台田、培养器皿外壁用75%的乙醇擦拭灭菌c7 脱毒材料7.1 材料的选择应选择生任幢壮、无病斑、鳞片肥厚、洁白的独头百合,用清水J中
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