DB43∕T 2412-2022 鸡冷冻精液制作技术规程(湖南省).pdf
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1、43湖南省地方标准ICSCCS 65.020.30B 43DB43/T 24122022 鸡冷冻精液制作技术规程Code of practice for making rooster frozen semen发 布湖南省市场监督管理局2022-07发布-02022-10实施-088DB43/T 24122022 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 准备 1 5 精液采集与品质检测 2 6 细管精液制作 2 7 细管精液冷冻 3 8 细管冷冻精液解冻及活力检测 3 9 细管冷冻精液保存及解冻应用 4 附录 A(资料性)主要器具与耗材 5 附录 B(规范
2、性)冷冻精液用液配制与保存 6 附录 C(资料性)精子密度估测方法示例 7 附录 D(资料性)精子活力评判方法 8 附录 E(资料性)液氮熏蒸法冷冻装置与细管铺放示例 9 附录 F(资料性)解冻精液应用及输精效果检测 10 参考文献 11 DB43/T 24122022 II DB43/T 24122022 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位:湖南省畜牧
3、兽医研究所、全国畜牧总站、浏阳市农业发展事务中心、湖南光大牧业科技有限公司、浏阳市湘依园生态农业有限公司、湖南陶氏生态禽业科技发展有限公司。本文件主要起草人:燕海峰、李安定、朱芳贤、宋武、白文娟、李闯、赵晓、张旭、刘伯承、黄璇、邓萍、伍国强、江为民、冯小花、文平、刘海林、朱斌、陶金彪。DB43/T 24122022 IV DB43/T 24122022 1 鸡冷冻精液制作技术规程 1 范围 本文件规定了鸡冷冻精液制作的准备、精液采集与品质检测、细管精液制作、细管精液冷冻、细管冷冻精液解冻及活力检测、细管冷冻精液保存及解冻应用。本文件适用于鸡细管冷冻精液的制作。2 规范性引用文件 下列文件中的内
4、容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 30396 牛冷冻精液包装、标签、储存和运输 NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程 NY/T 3458 种鸡人工授精技术规程 NY/T 4047 家禽精液品质检测方法 3 术语和定义 NY/T 3458、NY/T 4047 界定的术语和定义适用于本文件。4 准备 4.1 器具与耗材 4.1.1 主要器具与耗材准备见附录 A。4.1.2 细管标示按 NY/T 1234 的规定执行,其中制作单位名称标示,采用习惯字
5、母、英文或者拼音首字母。4.1.3 重复使用的器具,使用后立即用清水浸泡。器具清洗和消毒操作按 NY/T 1234 与 NY/T 3458 的规定执行。4.1.4 细管、细管搓板、细管承载泡沫框等细管精液制作用具使用前置于 2 5 保温箱中,温度平衡后待用。4.1.5 水浴解冻保温箱中加入清洁自来水,水深大于 10 cm,放入冰袋或者冰块,保持水温为 2 5。4.2 用液 4.2.1 按照附录 B 配制所有用液。4.2.2 所有用液使用前置于 2 5 操作保温箱中,温度平衡后待用。4.2.3 所有用液与精液吸取前应摇匀。DB43/T 24122022 2 4.3 公鸡挑选与训练与训练 按 NY
6、/T 3458 规定执行。4.4 操作环境 4.4.1 操作环境应避免污染。4.4.2 冷冻精液制作室环境温度为 20 25。5 精液采集与品质检测 5.1 精液采集前准备 5.1.1 根据所采公鸡数量准备规格为 5 mL 的离心管。5.1.2 每只离心管中移入 0.2 mL 稀释液(I 液)。5.2 精液采集与稀释 5.2.1 手握加热已移入稀释液(I 液)的离心管,采用双人或单人背腹式按摩采精法采集精液,收集无污染、纯净精液,轻轻摇匀,置于 2 5 采精保温箱中。依次采集完所有公鸡精液,存于采精保温箱带回。5.2.2 在冷冻精液制作室外,将精液从采精保温箱中转移至 2 5 操作保温箱中。5
7、.2.3 自采集精液开始计时,宜在 30 min 时开始细管精液制作。如果远距离采集精液,采集后用稀释液(I 液)等比稀释,存放于 2 5 保温箱中尽快带回,应在精液采集后 4 h 内完成冷冻精液制作。5.3 精液品质检测 5.3.1 将显微镜温度设置在 32,按照 NY/T 4047 的方法检测精液品质。不同精子密度样品图示见附录 C。精子活力判定见附录 D。5.3.2 用于冷冻的精液应符合下列要求:a)精子密度不小于 15 亿个/mL;b)精子活力不低于 70或有效精子数不少于 10.5 亿个/mL。6 细管精液制作 6.1 液氮添加 至少在细管冷冻前 10 min,将液氮倒入细管熏蒸泡沫
8、箱等容器,液氮深度 3 cm4 cm。6.2 冷冻保护液添加 6.2.1 按照精子密度 7.5 亿个/mL、甘油最终浓度 6的冷冻精液制作要求,根据 5.3 检测的精子密度,选择甘油浓度适宜的冷冻保护液(II 液)并计算添加量。6.2.2 按计算量添加 2 5 的冷冻保护液(II 液),在 2 5 条件下平衡 10 min,准备灌装。6.3 精液灌装 6.3.1 人工灌装 DB43/T 24122022 3 6.3.1.1 握住细管精液棉塞端,另一端插入待灌装的精液中,分 2 次吸取精液,细管中间段留约 1 cm空气柱。6.3.1.2 擦干细管外壁残留液体,用热熔、超声波或封口粉封口,存放于
9、2 5 操作保温箱中。6.3.1.3 采用封口粉封口时,细管端含封口粉 2 mm,擦净细管外壁残留粉末。封口粉应根据需要量现取现用,防止污染。6.3.2 机械自动灌装 使用全自动细管精液灌装机灌装时,按操作说明书进行操作。7 细管精液冷冻 7.1 液氮熏蒸法 7.1.1 将厚度为 1 cm 的细管承载泡沫框套入细管搓板并置于搓板底部。7.1.2 以细管棉塞端指向操作者的方向,将细管铺放在细管搓板上。如需防止细管滑动或便于分组标记,则在细管棉塞端黏贴无纺布医用胶带形成细管带,胶带黏贴应既牢固,又利于浸入液氮后细管之间或胶带与细管间的剥离。7.1.3 平行抬起细管承载泡沫框,将细管从细管搓板整体转
10、移至细管承载泡沫框上。冷冻装置与细管铺放示例见附录E。7.1.4 将载有细管的细管承载泡沫框叠加于厚度为 3 cm5 cm 的泡沫框上,浮于已注入液氮的熏蒸泡沫箱液氮面上,细管带离液氮面距离 4 cm6 cm。盖上泡沫箱盖,静置 5 min 后将细管带迅速浸入液氮中。7.2 程序冷冻仪法 7.2.1 将细管架置于冷冻室,以-7/min 速率从 5 下降到-35,再以-60/min 速率从-35 下降到-140,于-140 停留 10 min,将细管立即浸入液氮中。7.2.2 其他操作按仪器操作说明书进行。8 细管冷冻精液解冻及活力检测 8.1 精液解冻 8.1.1 将冷冻细管精液从液氮中取出,
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