DB51∕T 1284-2011 空肠弯曲杆菌分离鉴定技术规范(四川省).pdf
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1、TCS 11.220 B 41 备案号30887-2011DB51 四. , 省Eh巳tTJ 方标准DB51/T 1284一-2011空肠弯曲杆菌分离鉴定技术规范2011-06 -27发布2011 - 07 -01实施四川省质量技术监督局发布D851月1284-2011目;欠目.Fr . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
2、1 1 范围. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 规范性引用文件. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3、 1 3 术语和定义. 1 4 空肠弯曲杆菌的分离鉴定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 附录A(资料性附录)培养墓和试剂制备. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 本标准附录A为资料性附录本标准由四川省畜牧食品局提出井归口本标准由四川省质量技术监督局批准目IJ1
4、=1 本标准由四川省动物疫病预防控制中心负责起草D851月1284-2011本标准起草人:张焕容、余勇、张东、毛光琼、汤承、岳华、陈代平、郭莉、吴宜、李金海、岁毅II 0851月1284-2011空肠弯曲杆菌分离鉴定技术规范1 范围本标准规定了空肠子3曲杆菌(Campylobacterjejuni)的分离鉴定方法。本标准适用于鸡、鸭、鹅、野禽、猪、牛等多种畜禽空肠可由杆菌的分离与鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的号|用文件,其最新版本(包括所育的修改单)适用于本文件。GB!T 4789.28 食品引生
5、微生物学检验染色法、培养基和试剂。GB!T 6682分析实验室用水规格和试验力法。3 术语和定义下列术语和定义适用J本标准。3. 1 于肠弯曲杆菌Campy/obacterjejun 叫主主多种动物和人腹泻,在环坊及健康动物体内广泛存在。曲体大小为O.3m0.4mX1.5m 3. o 11m ,弯曲轩状或海鸥展翅状,暴露于常气中后很快形成球状体,革兰氏染色阴性。3. 2 聚合酌链式反应Polymerasechain reaction, PCR 是种分子生物学技术,用于体外大量扩增特定的ONA片段3. 3 号|物Primer是人工合成的两段寡核背酸序列,用于聚合同每链式反应,其巾条引物与目标片段
6、-端的-条ONA模板链开补,另一条引物与目标片段另一端的另一条ONA模板链可补、。4 空肠弯曲杆菌的分离鉴定4. 1 设备和材料4. 1. 1 二氧化碳培养箱4.1.2 微量移液器(0.1LlO.l L、2.lL20L、20.lL200L、200LlOOO.lL)及相向型弓的无菌|肢头D851月1284-20114.1.3 微型离心机(适合了对PCR反应管进行离心操作)4.1.4 无菌工作什4.1.5 接种环、接种针、酒精灯及酒精棉球4.1.6 PCR扩增仪及电泳仪4. 2 培养基和试剂(见附录的4.2.1 改良Skirrow氏琼脂基础培养基CSkirrowAgar Base, Modifie
7、d) 4. 2. 2 常肠弯曲杆菌琼脂某础培养基CCampylobacterAgar Base) 4. 2. 3 Cary-Blair民运送培养基CCary-BlairTransport Medium) 4. 2. 4 革乓氏染色液4.2.5 TAE缓冲液4. 2. 6 琼脂糖及显色液4. 2. 7 相关牛化试剂3%过氧化氢溶液、1%盐酸二甲基对苯二眩溶液、1%一茶酌乙醇溶液、甘氨酸、醋酸铅培养基、马尿酸铀培养基、二氧化铁、主专院酸、耐酸盐培养基、对氨基苯陆酸、醋酸、奈胶、TTC琼脂基础培养基。4. 2. 8 PCR鉴定相关试剂Taq DNA聚合酶C5U/L)、MgC12C25mmol/L)、
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