T∕SHZSAQS 00130-2022 绵羊活体冲胚操作技术规程.pdf
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1、 ICS 65.020.30 CCS B 41 团体标准 T/SHZSAQS 001302022 绵羊活体冲胚操作技术规程 2022-10 -05 发布 2022-10-05 实施 石河子市质量标准化协会 发 布 T/SHZSAQS 001302022 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 3.1 供体羊 . 1 4 供体羊的选择与饲养管理 . 1 4.1 供体羊的选择 . 1 4.2 供体羊的饲养管理 . 2 5 供体羊的超数排卵及人工授精 . 2 5.1 超数排卵 . 2 5.2 配种 . 3 6 羊手术冲胚及胚胎质量鉴定 . 3
2、 6.1 手术冲胚 . 3 6.2 胚胎发育期鉴定 . 5 附录 A(资料性附录) 绵羊活体冲胚药品、主要器械与设备 . 7 附录 B(资料性附录) FSH 3d 注射时间及剂量 . 9 附录 C(规范性附录) 试剂配制 . 10 附录 D(资料性附录) 记录表 . 11 T/SHZSAQS 001302022 II 前 言 本文件参照GB/T1.1-2020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则给出的规则起草。 本文件起草单位:新疆农垦科学院畜牧兽医研究所。 本文件主要起草人:万鹏程、刘昱成、张振良、卢守亮、倪建宏、王晶晶、石国庆、刘长彬、傅祥伟、郭延华、代蓉。 T/SHZSA
3、QS 001302022 1 绵羊活体冲胚操作技术规程 1 范围 本文件规定了绵羊活体冲胚操作的术语与定义及供体羊的选择与饲养管理、供体羊的超数排卵及人工授精、绵羊手术冲胚及胚胎质量鉴定等。适用于绵羊活体冲胚的操作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件; 不注日期的引用文件, 其最新版本 (包括所有的修改单)适用于本文件。 NY/T1571 羊胚胎移植技术规程 DB62/T1308 羊胚胎移植技术操作规程 DB65/T4074 绵羊体外胚胎生产技术操作过程 DB65/T4497 绵羊腹腔镜
4、定时输精技术操作规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 供体羊 指提供胚胎的母羊。 4 供体羊的选择与饲养管理 4.1 供体羊的选择 4.1.1 品种优良、生产性能好、经济价值高。 4.1.2 遗传性能稳定、谱系清楚。 4.1.3 T/SHZSAQS 001302022 2 体质健壮、繁殖机能正常、无遗传病、生殖疾病和传染性疾病。年龄在15周岁。 4.1.4 产历清晰,性周期正常。 4.1.5 产羔90d以上,经观察至少有2个以上正常发情周期的母羊。 供体羊的选择应符合NY/T1571相关要求。 4.2 供体羊的饲养管理 4.2.1 饲养环境 保持饲养环境温度稳定、适宜、卫
5、生、干燥、避免应激反应。 4.2.2 饲喂方式 制定合理的供体羊日粮配方,保证营养平衡,充足清洁饮水,适当的运动。 5 供体羊的超数排卵及人工授精 5.1 超数排卵 5.1.1 超数排卵的季节和发情周期 超数排卵最佳时间为每年的9月上旬至12月下旬。绵羊的发情周期在1517.5d。供体母羊在超排前期需观察2个完整的发情周期。 5.1.2 药品 FSH(促卵泡素)、PG(前列腺素)、LH(垂体促黄体生成素)、CIDR(含孕激素阴道栓塞)。 5.1.3 超数排卵方法 放入海绵栓或CIDR(含孕激素阴道栓)之日,作为发情周期的第0天,在第9天开始注射FSH,每日早、晚各注射1针,中间间隔约12h,连
6、续3d,递减注射。注射第5针FSH时,取出CIDR,同步注射0.1mgPG。FSH、PG注射用量见附录B。并符合DB65/T4074相关要求。 5.1.4 供体羊发情鉴定 T/SHZSAQS 001302022 3 在第6次注射FSH时,即对超排供体羊进行发情观察。观察时间:早晚各1次,每次不少干0.5h。观察方法:试情公羊系好试情布,放入母羊群中试情,每3040只供体羊放1只试情公羊,以母羊站立接受试情公羊爬跨作为发情的标准,并记录好发情的准确时间。 5.2 配种 5.2.1 种公羊的选择 选择谱系健全,检疫合格,遗传性能稳定,生产性能优良,精液品质良好的种公羊。 5.2.2 腹腔镜定时输精
7、 腹腔镜定时输精使用器材、输精方法应符合DB65/T4497相关要求。 图 1 腹腔镜定时输精方法示意图 5.2.3 常规输精 a) 采精前对种公羊外生殖器清洗消毒。采精、精液稀释、输精用的器具严格灭菌、消毒。 b) 母羊外阴部须进行清洗消毒。 c) 稀释后的精液温度要保持在25 左右。 d) 用开膣器打开阴道找到子宫颈外口,将输精器插入子宫颈外口不少于1cm,注入定量精液。 5.2.4 配种的最适时间 确认供体母羊发情后,立即进行第一次输精,之后每隔12h输精1次。鲜精液活力在70%以上,每次输精有效精子数不少于3107个,输精次数34次。 6 羊手术冲胚及胚胎质量鉴定 6.1 手术冲胚 6
8、.1.1 冲胚主要器材 T/SHZSAQS 001302022 4 手术台、剃毛刀、创布、止血纱布、剪毛剪、手术刀柄、手术剪、止血钳、巾帕钳、持针器、肠钳(带乳胶管)、手术刀片、缝合针、镊子、120mm表面皿、180mm表面皿、68#头皮针(尖端磨钝)、1820#针头(尖端磨钝)、10mm透明硅胶管、10ml注射器、20ml注射器、8mm玻璃管和35mm培养皿等。见附录A。 6.1.2 冲胚所需药品 75%酒精、碘酊、新洁尔灭、0.9%生理盐水、青霉素、全麻药等。见附录A。 6.1.3 冲胚液的配置 杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)配方见附录C。 6.1.4 供体羊手术冲胚步骤 按附录D做好采胚记录
9、。 6.1.4.1 供体羊手术 手术部位在离乳房前端约2cm处,腹中线的两侧均可。 a) 手术前空腹 2436h,适量饮水; b) 麻醉及保定:麻醉剂量视绵羊体重而定,将母羊侧卧或仰卧保定; c) 剪去手术部位的毛,剪毛范围约 20cm 20cm。用肥皂水清洗手术部位,同时用剃毛刀剃净毛茬,再用清水洗净; d) 用 0.1%的新洁尔灭消毒手术器械 30mim; e) 用碘伏消毒手术部位; f) 用 70%酒精棉球对手术的部位脱碘、晾干; g) 固定手术创巾; h) 避开血管,用手术刀将手术部位纵向切开 35cm 长的刀口,将皮下结缔组织分离,暴露肌膜; i) 用手术刀将肌膜轻轻切开,暴露肌肉层
10、,再用刀柄后端将肌肉层和腹膜钝性分开; 在骨盆腔,耻骨前沿触膜子宫角,并将子宫、卵巢引出刀口外,记录两侧卵巢黄体和卵泡数。 6.1.4.2 输卵管冲胚 超数排卵母羊发情后,在6672h内,从输卵管中采集28细胞胚胎。 a) 用 68#头皮针从宫管连接部的子宫端导入到输卵管峡部; b) 将冲卵管从输卵管喇叭口插入 2cm 左右,冲卵管远端与 120mm 表面皿相接; c) 事先用 10ml 注射器抽取 58ml 冲卵液,与头皮针连接,把冲卵液缓缓推出,胚胎即通过母羊输卵管回收到表面皿中。另一侧输卵管操作同上。 6.1.4.3 子宫冲胚 T/SHZSAQS 001302022 5 在超排母羊发情后
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