DB35∕T 1929-2020 鸭瘟抗体间接ELISA 试剂盒检测技术规范(福建省).pdf
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1、I CS 11. 220 B 41 DB35 子吕建省由巳ET圃,、万标准DB35/T 1929-2020 鸭瘟抗体间接ELISA试剂盒检测技术规范Detection technical specification of indirect ELISA test kit for duck plague antibody 2020 -09 -29发布2020 -12 -29实施福建省市场监督管理局发布DB35/T 1929-2020 目次前言. 1 范围. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 规范性引用文件. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 疫病简述. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 原理. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 主要仪器. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 主要试剂. 7 试剂盒的组成、组装和保存.2 8 试剂盒的要求. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 9 样品的采集、保存与运输.4 10 试剂盒操作步骤.4 1 结果判定. . . .
5、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 附录A(规范性附录)相关试剂的配制.6 参考文献.8 I 目IJ1=1 本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由福建省农业科学院提出。本标准由福建省农业农村厅归口。DB35/T 1929-2020 本标准起草单位:福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福建省动物疫病预防控制中心、福州市动物疫病预防控制中心。本标准
6、主要起草人:陈珍、傅光华、刘道泉、刘荣昌、黄瑜、史惠、吴波平、陈翠腾、陈冬群、陈秀明、施少华、朱春华、刘斌琼、蔡国漳。II 鸭瘟抗体间接ELISA试剂盒检测技术规范1 范围本标准规定了鸭瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的检测技术规范。本标准适用于鸭血清中鸭瘟抗体的定性检测。2 规范性亏|用文件DB35/T 1929-2020 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB!T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法3 疫病简述鸭瘟Cduckplague,DP)又称为鸭病毒性
7、肠炎,俗称大头瘟是由鸭瘟病毒引起的一种急性、高度致死性传染病,不同日龄的鸭均易感染。特征病变为食道、小肠和泄殖腔粘膜出血、坏死、清房,病程稍长者食道和泄殖腔粘膜表面形成黄白色伪膜。该病传播迅速、发病率和死亡率高,广泛流行于我国华南、华中和华东地区。4 原理本标准是针对鸭瘟抗体间接ELISA试剂盒建立的检测技术规范。工作原理为:当鸭血清中鸭瘟抗体阳性时,在间接ELISA抗体反应过程中,鸭血清中的鸭瘟抗体先与包被的纯化鸭瘟病毒结合,形成抗原抗体复合物,随后与辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鸭IgG相结合,加入显色剂显色,置450 nm波长下测定光密度值COD4S11) ,通过分析其p/M直判定鸭
8、血清中鸭瘟病毒抗体的水平。5 主要仪器所使用的主要仪器如下:刮目每标仪(具有450nm波长滤光片)。b) 37 oc土1oc恒温箱。c) 96孔酶标板。cl) 振荡器。e) 可调微量移液器:包括多道00吐、100L、300L)和单道等。6 主要试剂所使用的主要试剂如下:DB35/T 1929-2020 a) 包被抗原:按照附录A中A.1配制。b) 标准阳性血清:按照附录A中A.2配制。c) 标准阴性血清:按照附录A中A.3配制。d) 参考品:阳性参考品(通过中和试验和本试剂盒检测均为阳性)20份,阴性参考品(通过中和试验和本试剂盒检测均为阴性)20份,每份参考品分装为每支15L装于无菌离心管中
9、,做好标记,置于一70oc :1:.5 oc保存备用。e) 酶标二抗HRP标记的羊抗鸭IgGof) TMB显色液TMB含量为200g/mLg) 碳酸盐缓冲液:按照附录A中的A.4配制。h) 20XPBS溶液:按照附录A中的A.5配制。i) 稀释液:按照附录A中的A.6配制。j) 洗涤液:按照附录A中的A.7配制。k) 终止液:按照附录A中的A.8配制。除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂,实验用水应符合GB!T6682-2008中一级水的要求。7 试剂盒的组成、组装和保存7. 1 试剂盒A的组成7. 1. 1 标准阴性血清,10 f.lL,清亮、无溶血。7. 1.2 标准阳性血洁,10
10、止,清亮、无溶血。7. 1.3 酶标二抗,10此,无色透明液体。7. 2 试剂盒B的组成7.2. 1 包被好的酶标板,3块,每个酶标板最大检测持检样品份数为90份。7. 2. 2 磷酸盐缓冲液(20XPBS), 100 mL,无色透明。7.2.3 TMB显色液,10 mL/瓶 X3瓶,无色透明,棕色瓶装,避光保存。7.2.4 终止液,40 mL,无色透明。7.2.5 吐温20,500此,无色透明。7.2.6 操作说明书,1份。7. 3 试剂盒的组装7.3. 1 本试剂盒由试剂盒A和试剂盒B组成。7. 3. 2 试剂盒外包装上应标明产品名称、包装规格、生产单位、生产批号、生产日期、有效期、产品标
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