DB33∕T 2246-2020 猪流行性乙型脑炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法(浙江省).pdf
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1、lCS 65. 020. 20 B 44 DB33 川、d江省山巳ETE, 万标准DB33/T 2246-2020 猪流行性乙型脑炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法Real-time PCR detection technique for Japanese encephalitis virus 2020 -03 -03发布2020 - 04 -03实施浙江省市场监督管理局发布本标准按照GB!T1. 1-2009的规定编写。本标准由浙江省农业农村厅提出。目IJ1=1 本标准由浙江省畜牧兽医和饲料标准化技术委员会归口。本标准起草单位:浙江省动物疫病预防控制中心。DB33/T 2246-2020 本
2、标准主要起草人:谢荣辉、张传亮、吴费立在、徐辉、刘霞、周吉、柴娟、虞一聪、王雅婷、周彩琴、赵灵燕、刘爱军、吴雪军。DB33/T 2246-2020 猪流行性乙型脑炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法1 范围本标准规定了猪流行性乙型脑炎病毒Capaneseencephalitis virus, EV)荧光定量RT-PCR检测的实验条件、操作步骤和结果判定等要求。本标准适用于猪流行性乙型脑炎病毒核酸的检测。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1 猪流行性乙型脑炎由猪流行性乙型脑炎病毒引起的一种急性传染病。猪的主要临床症状表现为高热、流产、死胎和公猪罩丸炎。3 实验条件3. 1 仪器3.
3、1. 1 高速冷冻离心机。3.1.2 荧光定量PCR仪。3.1.3 生物安全柜。3.1.4 组织研磨仪。3.1.5 微量移液器。3.1.6冰箱。3.1.7 涡旋混匀器。3.1.8 高压灭菌器。3. 2 试齐IJ除特别说明外,本标准所用试剂均为分析纯,所有试剂均用无RN/.酶污染的容器分装。3.2.1 Trizol:核糖核酸CRibonucleicacid, RNA)提取试剂。3.2.2 氯仿4C预冷。3. 2. 3 异丙醇4C预冷。3.2.4 焦炭酸二乙醋CDiethylpyrocarbonate,DEPC)水:取DEPC100L,加超纯水至100此,室温过夜,121 C高压灭菌15min,分
4、装,冻存备用。3.2.5 75%乙醇:用75mL无水乙醇,加DEPC水至100此,泪匀,-20 C预冷。DB33/T 2246-2020 3.2.6 商品化的一步法实时荧光RT-PCR反应试剂:One Step Prime ScripFM RT-PCR Ki t(Perfect Real Time, TAKARA),含有2xOneStep RT-PCR Buffer m、ExTaq HS (5 U/L)、PrimeScriptRT Enzyme Mix II和无RNA酶的水。3.2.7 O. 01mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液CPhosphatebuffered saline,PBS)取N
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