DB37∕T 3893—2020 芋头病毒检测技术规程(山东省).pdf
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1、TCS 65.020 B 16 DB37 山东省山巳ET且,万标准DB 37fT 3893一-2020芋头病毒检测技术规程Detection and identification of taro viruses 2020 - 03 -31发布2020 - 05 -01实施山东省市场监督管理局发布DB 37fT 3893一-2020目IJ1=1 本标准由山东省农业农村厅提出。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口C本标准起草单位:山东省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人:姜珊珊、辛相启、吴斌、张眉、王升吉、辛志梅。I DB 37fT 3893-2020 芋头病毒检测技术规程1 范围本标准
2、规定了芋花叶病毒(Dasheenmosaic virus, DsMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)的RT-PCR的检测方法。本标准适用于芋头叶片中芋花叶病毒和黄瓜花叶病毒的检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,叉注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 检测对象3. 1 芋花叶病毒中文名:芋花叶病毒学名Dasheenmosaic virus 缩写DsMV分类地位:马铃薯Y病毒科CPotyviridae),马
3、铃薯Y病毒属CPotyvirus)病毒粒子、传播途径及危害:病毒粒子呈线状,长度约为750nmo一般通过蚓虫传播,还可通过机橄摩擦传播。感染DsMV的芋头植株通常表现为叶片花叶、斑驳、皱缩卷曲、口十脉黄化和茎坏死等症状。3. 2 黄瓜花日十病毒。中文名:黄瓜花叶病毒学名Cucumbermosaic virus 缩写CMV分类地位:雀麦花叶病毒科CBromoviridae),黄瓜花叶病毒属CCucumovirus ) 病毒粒子、传播途径及危害:病毒粒子为球状,直径2:nm30 nm。主要由蜡虫以非持久性方式传播。导致寄主出现花叶、黄化、皱缩等症状。4 主要仪器设备、用具和试剂4.1 仪器设备和用
4、具仪器设备和用具主要有:a) PCR仪:b) 电泳仪;c) 水平电泳槽;d) 凝胶成像仪:e) 高速冷冻台式离心机:f)纯J(义:g) 万分之一天平:h) 普通冰箱(OOC40C); i) -20oC低温冰箱:j) -70oC低温冰箱1k) 磁力搅拌器;1) 高压灭菌锅;m) 可调微量移液器00L、100L、200L、1000L、5000L):n) RNase-free吸头00L、200L、1000L)。RNase-free离心管(1.5mL、2.0mL) p) RNase-free PCR反应管。4. 2 试剂DB 37fT 3893-2020 所有实验用试剂均为分析纯;相关试剂配制方法详见
5、附录A:除特殊说明外,均为符合GB/T6682, 实验用水为无菌超纯水或去离子水。4. 2. 1 RNA :tJI:r.式开IJ:a) 多糖多酌植物RNA提取试剂盒或其他等效产品b) 三氯甲炕;c) 异丙醇:d) 75%乙醇:e) RNase-free超纯水。4. 2. 2 反转录试剂:a) 随机号|物:b) RNase抑制剂c) 逆转录酶AMV或其他等效酶;d) dNTPs (10 mM) e) -20oC贮藏。4.2.3 PCR 试齐IJ:a) DNA聚合酶试剂盒2xEsTaq MasterMix或其他等效产品:b) DNA分子量标记物100bp2000 bp: 50 xTAE缓i的/夜1
6、c) 核酸染料Gelred(1 OOOOx )溶液或其他等效溶液;d) 含10-4倍浓度Gelred的1%琼脂糖凝胶;e) 6xDNA上样缓冲液。5 RT-PCR检测方法5. 1 方法提要2 DB 37fT 3893-2020 芋花叶病毒和黄瓜花叶病毒皆为RNA病毒,利用TransZo1P1ant多糖多酌植物RNA提取试剂盒进行RNA纯化,然后进行RT-PCR检测,通过琼脂糖凝胶电泳对检测结果进行判定。5. 2 样品采集观察芋头叶片是杏出现叶脉褪绿、脉问褪绿黄化、叶片皱缩、花叶、叶片畸形等典型病毒病症状,取出现上述症状的样品装至无菌样品袋中,标记样品编号、取样时间、取样地点,于低温条件下C2O
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