DB15∕T 1531-2018 反刍动物瘤胃上皮通透性测定 Ussing Chamber法(内蒙古自治区).pdf
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1、 ICS 65.020.30 B 44 备案号:61243-2019 DB15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 15312018 反刍动物瘤胃上皮通透性测定 Ussing chamber 法 Determination of ruminal epithelium permeability in ruminants-ussing chamber Method 2018-12-20 发布 2019-03-20 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 15312018 I 前 言 本标准按GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内
2、蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会(SAM/TC19)归口。 本标准起草单位:内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大学。 本标准主要起草人:胡红莲、高民、杨淑青、程萌、孙燕勇、宋利文、王丽芳、王梦雅、李洋、羿静。 DB15/T 15312018 1 反刍动物瘤胃上皮通透性测定 Ussing chamber 法 1 范围 本标准规定了反刍动物瘤胃上皮通透性的术语和定义、测定方法。 本标准适用于牛、羊等反刍动物瘤胃上皮通透性的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)
3、适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 反刍动物 ruminants 有反刍这种消化方式的一类哺乳动物,这类动物具有复杂的瘤胃、网胃、瓣胃和皱胃,如牛、羊、骆驼、鹿等。 3.2 上皮通透性 epithelium permeability 上皮被某些大分子物质(相对分子量150道尔顿)以非载体或通道介导的被动扩散方式通过的特性,不包括对离子(如Na+、Cl-)的渗透。 3.3 跨膜电位差 potential different,PD 上皮组织的表皮层与基底膜层之间的电位差,单位为mV/cm2h,用于反映上皮组织的活性
4、。 3.4 短路电流 short-circuit current,Isc 在单位时间内穿过上皮并使得跨上皮电压降为零的电流,单位为Ma/cm2h,用于反映上皮离子的转运能力,Isc增加表明离子通过上皮的转运能力增强。 3.5 组织导电性 tissue conductance,Gt 跨膜电位与Isc的比值,单位为mS/cm2h,用于反映上皮组织对离子的通透性,Gt增强表明上皮完整性受损,上皮通透性增加。 4 试剂 4.1 如无特别说明,所用试剂均为分析纯,水应符合 GB/T 6682 的规定。 DB15/T 15312018 2 4.2 琼脂糖。 4.3 缓冲溶液 4.3.1 组成 80.0 m
5、mol/L NaCl,5.0 mmol/L KCl ,0.4 mmol/L NaH2PO4 H2O, 2.4 mmol/L Na2HPO4 2H2O, 10.0 mmol/L C3H5NaO2, 25.0 mmol/L C2H3NaO2 3H2O, 5.0 mmol/L C4H7NaO2, 1.2 mmol/L MgCl2 6H2O, 1.2 mmol/L CaCl2 2H2O, 25.0 mmol/L NaHCO3。 4.3.2 配置 准确称取NaCl 4.6800 g、 KCl 0.3725 g、 NaH2PO4 H2O 0.0552 g、 Na2HPO4 2H2O 0.4272 g、 C
6、3H5NaO2 0.9600 g、C2H3NaO2 3H2O 3.400 g、C4H7NaO2 0.5500 g、MgCl2 6H2O 0.2436 g、CaCl2 2H2O 0.1764 g和NaHCO3 2.1000 g 放入1000ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。调整溶液pH为7.4(溶液pH7.4,用HCl调整;溶液pH7.4,用NaOH调整),将配置好的缓冲溶液置于4冰箱备用。 4.4 电极的制备 称取2.0 g 琼脂放于50 ml 离心管中,加入3 mol/L KCl 溶液50 ml,置于100水浴锅中加热直至离心管中液体呈透明粘稠状,无气泡后取出。用5 ml 注射器吸取适量K
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