DB44∕T 2206-2019 冬瓜品种抗小西葫芦黄花叶病毒鉴定技术规程(广东省).pdf
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1、ICS 65.020.20 B 31 DB44 广东省地方标准 DB44/T 22062019 冬瓜品种抗小西葫芦黄花叶病毒 鉴定技术规程 The regulation for resistance evaluation of wax gourd to zucchini yellow mosaic virus 2019 - 10 - 31 发布 2020 - 01 - 31 实施 广东省市场监督管理局 发 布 DB44/T 22062019 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准附录A为规范性附录,附录B、C、D为资料性附录。 本标准由广东省农业农村厅提出并归
2、口。 本标准主要起草单位:广东省农业科学院植物保护研究所、湖南省植物保护研究所。 本标准主要起草人:何自福、汤亚飞、佘小漫、刘勇、蓝国兵、邓铭光、于琳、李正刚。 DB44/T 22062019 1 冬瓜品种抗小西葫芦黄花叶病毒鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了冬瓜品种抗小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)鉴定技术的术语和定义、毒原准备、人工接种抗性鉴定、病情调查、抗病性评价及鉴定报告的撰写。 本标准适用于冬瓜品种及材料对小西葫芦黄花叶病毒的人工接种抗性鉴定。 2 术语与定义 下列术语和定义适合于本标准。 2.1 小西葫芦黄花叶病毒 Zucc
3、hini yellow mosaic virus,ZYMV 小西葫芦黄花叶病毒为马铃薯Y病毒科(Potyviridae)马铃薯Y病毒属(Potyvirus)成员,具有马铃薯Y病毒属成员基因组结构的典型特征,主要依靠蚜虫以非持久方式传播,也可以通过病株汁液和机械接触等方式传播,但不能通过种子传播,主要侵染冬瓜、黄瓜、西葫芦、甜瓜、西瓜等葫芦科作物。ZYMV侵染的植物出现花叶、斑驳、褪绿黄化、叶面凸凹不平、卷曲畸形、新叶变小、果实畸形、果面颜色不均匀或产生褐斑等症状,或植株出现矮化,新梢坏疽,甚至凋萎死亡。 2.2 毒原 virus source 毒原ZYMV-DG:采自广东冬瓜主产区的典型病样,
4、经检测、纯化、鉴定、扩繁后,保存的用于后续实验的样品。 2.3 人工机械摩擦接种 artificial mechanical inoculation 通过人工操作,在供试植物叶面上造成微小伤口,使病毒从伤口进入细胞内而引起发病的过程。 2.4 抗病性鉴定 identification of disease resistance 采用合适的技术方法,鉴定作物对特定病害的抗性水平。 3 毒原 ZYMV-DG 准备 从广东冬瓜主产区采集表现花叶、斑驳、泡状突起等症状的病叶,经RT-PCR确定病样中存在ZYMV,然后通过摩擦接种到能产生枯斑的健康苋色藜植株叶片上, 经2至3次单斑分离, 将分离后的病源
5、接种到健康的冬瓜植株上繁殖,待接种植株显症后进行分子检测,测序确定无误后,采集病叶,放置-80保存备用。具体见附录 A。 DB44/T 22062019 2 4 仪器设备 电子天平,研钵,超低温冰箱,量筒,普通冰箱,PCR 仪,电泳仪,凝胶成像系统,移液器,离心机,恒温水浴锅。 5 人工接种抗性鉴定 5.1 接种室 室内抗性鉴定应在具备良好发病环境的60目防虫日光温室中进行。 5.2 育苗 将冬瓜种子用温水浸种2 h4 h,放置在28恒温培养箱催芽至露白,直播于8 cm12 cm黑色塑料育苗杯中,每杯2粒。播种用基质土为经121湿热灭菌消毒30 min的新鲜育苗基质土。育苗在60目防虫日光温室
6、内进行,室内温度应控制在2530,确保幼苗为生长健壮、长势一致的无病苗。 5.3 鉴定品种设置 鉴定品种随机排列设置,4次重复,每个处理30株。 5.4 接种 5.4.1 接种时间 挑选健康无病的冬瓜苗,在子叶期进行接种。 5.4.2 接种病原制备 1 g新鲜或-80保存的病原病毒感染的发病叶组织加10 mL磷酸缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.2,见附录D),在灭菌的研钵中匀浆,再经灭菌的纱布过滤,其滤液为接种悬浮液。 5.4.3 接种方法 在叶面上撒少量400目600目金刚砂,然后用棉签蘸取接种悬浮液在叶片上沿叶脉方向轻轻摩擦,再用清水将叶面多余的悬浮液和金刚砂轻轻洗去。 5.4.4
7、 接种后的管理 供试幼苗置于接种室内继续培养,保持接种室温度为2530,自然光照,常规水肥栽培管理。 6 病情调查 6.1 调查时间 接种后7 d35 d进行,每隔7 d调查一次。 6.2 病情分级标准 冬瓜苗期病情级别及其相对应的症状描述见表1。 DB44/T 22062019 3 表1 小西葫芦黄花叶病毒引起的冬瓜病毒病病情分级标准 病情级别 症状描述 0 级 全株无症状 1 级 心叶脉明或轻花叶 3 级 心叶及中部叶片花叶 5 级 心叶及中部叶片花叶,少数叶片畸形、皱缩,植株轻度矮化 7 级 重花叶、多数叶片畸形、皱缩,植物矮化 9 级 重花叶、叶片明显畸形,植株严重矮化,甚至死亡 6.
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