DB34∕T 3293-2018 农田杂草反枝苋对草甘膦抗性检测技术规程(安徽省).pdf
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1、ICS 65.020 B 04 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 32932018 农田杂草反枝苋对草甘膦抗性检测 技术规程 Code of practice for detection of glyphosate-resistant redroot pigweed (Amaranthus retroflexus L.) in cropland 文稿版次选择 2018 - 12 - 29 发布 2019 - 01 - 29 实施安徽省市场监督管理局 发 布 DB34/T 32932018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准由安徽省农业科学院棉花研
2、究所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:安徽省农业科学院棉花研究所、中国农业科学院棉花研究所、岳西县农业技术综合服务中心、六安市植物检疫植物保护站、来安县农业技术推广中心、太湖县种植业管理局、宣城市种植业管理局、黄山市农业科学研究所、安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所。 本标准主要起草人:李淑英、路献勇、马艳、马小艳、阚画春、程福如、陈敏、刘小玲、郑曙峰、程森林、王维、徐道青、石扬娟、祁静星、胡俊斌、胡锋、吴明奎、胡本进。 DB34/T 32932018 1 农田杂草反枝苋对草甘膦抗性检测技术规程 1 范围 本标准规定了农田杂草反枝苋(Amaranth
3、us retroflexus L.)对除草剂草甘膦抗性检测试剂与溶液、仪器和设备、生物试材、试验步骤、数据统计与分析与抗药性水平的评价。 本标准适用于反枝苋对除草剂草甘膦抗性的检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 胚根长度 Length of radicel 从与种子连接处到胚根顶端。 2.2 胚轴长度 Length of hypocotyl 从与种子连接处到胚轴顶端。 3 试剂与溶液 3.1 草甘膦原药。 3.2 莽草酸(Shikimic Acid;3,4,5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸;99纯度)。 3.3 10 Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)。
4、3.4 0.1 Triton X-100。 3.5 0.3高锰酸钾(KMnO4)。 3.6 0.25 mol/L 盐酸。 3.7 1 mol/L 氢氧化钠。 3.8 0.1 mol/L 甘氨酸(C2H5NO2)。 3.9 0.1高碘酸(HIO42H2O)。 4 仪器和设备 4.1 培养皿(内径 9 cm)。 4.2 盆钵。 4.3 移液器(20 L、100 L、200 L、1000 L 和 5000 L)。 4.4 可控定量喷雾设备。 DB34/T 32932018 2 4.5 紫外可见光分光光度计。 4.6 离心管(1.5 mL,2 mL,10 mL)。 4.7 超高速离心机。 4.8 光照
5、培养箱。 4.9 人工气候箱:可设定温度为白天 30黑夜 25、相对湿度(RH)60 10、光照周期 12 h: 12 h(L: D)。 5 生物试材 5.1 试验土壤 采集有机质含量3 g/kg、pH 6.06.5 或 6.57.0 壤土粉碎风干后备用,试验前在 120干燥箱内烘 6 h(灭活土壤内杂草种子)。 5.2 杂草种子 采集各试验样点成熟的反枝苋种子。种子的田间采集区域不小于 100 m50 m,每隔 20 km 取样 1次,然后将每个地区或县域内所取样本混合。同时在没有施用过草甘膦地区采集反枝苋种子,作为敏感对照。 杂草种子 4低温冰箱中保存。 6 试验步骤 6.1 杂草种子处理
6、 首先将供试反枝苋种子用质量分数为 0.3的高锰酸钾溶液浸泡消毒 10 min,用无菌水清洗 3 次。然后在 9 cm 培养皿内放 2 层滤纸,每皿放入 50 粒反枝苋种子,置于光照培养箱内催芽,培养周期和温度设为白天 3012 h、黑夜 2512 h,当种子露白时待用。 6.2 反枝苋幼苗处理 试验土壤定量装至盆钵的 4/5 处。采用盆钵底部渗灌方式,使土壤完全湿润。将预处理的供试反枝苋种子均匀撒播于土壤表面,覆土 0.51.0 cm 左右,播种后移入人工气候箱常规培养。以盆钵底部渗灌方式补水。杂草出苗后进行间苗,当反枝苋长至 34 叶期时定苗,每钵保留长势一致的 10 棵幼苗。 6.3 药
7、液配制 6.3.1 Triton X-100 系列溶液配置 6.3.1.1 30 Triton X-100 量取 30 mL Triton X-100,加水定容到 100 mL。 6.3.1.2 10 Triton X-100 量取 33.33 mL 30 Triton X-100,加水定容至 100 mL。 6.3.1.3 0.1 Triton X-100 DB34/T 32932018 3 量取 1 mL 10 Triton X-100,加水定容到 100 mL。 6.3.2 草甘膦母液配置 准确称取一定量的草甘膦原药,用丙酮溶解,并加入 10 Triton X-100,配制成母液备用。
8、6.4 测定方法 测定方法可选择附录A、附录B、附录C 中的任一种,以附录B 中整株植物测定法为宜。 6.5 结果调查 根据不同测定方法,选择如下结果调查方法: 培养皿测定法:在草甘膦处理后 7 d 测量反枝苋胚根和胚轴的长度。 整株植物测定法:在施药后 8 d,记录每个剂量处理的反枝苋药害症状与级别(见表 1),然后剪取地上部分称量鲜重,再放入干燥箱内,经 7048 h 烘干后称取干重。 莽草酸测定法:根据吸光值,结合莽草酸的标准曲线,计算出不同浓度药剂处理后反枝苋体内莽草酸的累积量。 表1 草甘膦对反枝苋毒害症状分级标准 级 别 反枝苋药害症状 0 无症状。 1 叶片轻微萎蔫。 2 心叶出
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