SN∕T 3306.16-2021 国境口岸环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 第16部分:寨卡病毒.pdf
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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3306.162021中华人民共和国海关总署发 布ICS 11. 020CCS C 622021-06-18发布2022-01-01实施国境口岸环介导恒温扩增(LAMP) 检测方法第16部分:寨卡病毒Loop-mediated isothermal amplification detection method at frontier port Part16: Zika VirusISN/T 3306.162021前 言本部分按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件是SN/T 3306国境口岸环
2、介导恒温扩增(LAMP)检测方法的第16部分。SN/T 3306已经发布了以下部分:第1部分:鼠疫杆菌;第2部分:产毒素霍乱弧菌;第3部分:志贺氏菌;第4部分:嗜肺军团菌;第5部分:布鲁氏菌;第6部分:黄热病毒;第7部分:猴痘病毒;第8部分:基孔肯雅病毒;第9部分:结核分枝杆菌;第10部分:炭疽芽孢杆菌;第11部分:副溶血性弧菌;第12部分:空肠弯曲菌;第13部分:疟原虫;第14部分:大肠杆菌O157:H7;第15部分:沙门氏菌;第16部分:寨卡病毒。第17部分:包虫。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件
3、起草单位:烟台国际旅行卫生保健中心、天津国际旅行卫生保健中心、中国科学检验检疫科学研究院、甘肃国际旅行卫生保健中心、北京蓝谱生物科技有限公司。本文件主要起草人:钟响、刘宁、高娟娟、左锋、韩辉、刘鹏、王颖、方绍庆、王莉、米佳。1SN/T 3306.162021国境口岸环介导恒温扩增(LAMP) 检测方法第16部分:寨卡病毒1范围本文件规定了国境口岸寨卡病毒的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法。本文件适用于国境口岸出入境人员血液、尿液、唾液等及埃及伊蚊、白蚊伊蚊携带寨卡病毒的筛查检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对
4、应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)租用于本文件。GB 19489实验室生物安全通用要素SN/T 4652.2 国境口岸寨卡病毒病防控技术规范第2部分:标本采集和处理方式SN/T 4652.3 国境口岸寨卡病毒病防控技术规范第3部分:实验室检测病原微生物实验室生物安全管理条例(中华人民共和国国务院令第424号)3缩略语下列缩略语适用于本文件。RNA:核糖核酸(ribonucleic acid)DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)dNTP:脱氧核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)EDTA:
5、乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetra acetic acid)LAMP:环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification)4生物安全措施及防污染措施寨卡病毒在我国归属于三类病原微生物,应在生物安全二级实验室(BSL-2)开展实验室检测。应按照病原微生物实验室生物安全管理条例等相关规定要求,做好生物安全防护工作。LAMP扩增灵敏度高使得其更容易污染导致假阳性,因此应高度重视扩增产物的污染问题,反应过程中和反应完成后应避免开盖。加样过程应在生物安全柜进行,加样顺序为:阴性对照、样本、阳性对照,切勿打乱顺序,否则易出现假阳性。废弃物处理
6、应符合GB 19489中的规定。5技术概要根据寨卡病毒的NS5基因序列设计内、外引物及环状引物,识别靶序列上的8个独立区域,利用Bst DNA聚合酶启动循环链置换反应,在特异性基因序列启动互补链合成,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物,同时从dNTP析出大量焦磷酸根离子。添加的2SN/T 3306.162021钙黄绿素显色剂初始与锰离子结合处于荧光淬灭状态,随着反应的进行,焦磷酸根离子夺去结合的锰离子,钙黄绿素恢复从而发出绿色荧光,进而与反应液中的镁离子结合使荧光增强。6试剂和材料6.1引物:根据寨卡病毒特有的NS5基因(见附录A)设计一套特异性引物、包括外
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