GB 5009.259-2016 食品安全国家标准 食品中生物素的测定.pdf
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1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.2 5 92 0 1 6食品安全国家标准食品中生物素的测定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1发布2 0 1 6 - 0 9 - 2 0实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发 布G B5 0 0 9.2 5 92 0 1 6 前 言 本标准代替G B5 4 1 3.1 92 0 1 0 婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定 。本标准与G B5 4 1 3.1 92 0 1 0相比, 主要变化如下: 标准名称修改为“ 食品安全国家标准 食品中生物素的测定” ; 修改了标准曲线管和待测液管制备的表述方式; 修改了测定步骤表达方式
2、; 增加了谷薯类、 肉类、 新鲜果蔬、 藻类试样、 蛋类、 豆类、 坚果类、 内脏、 强化生物素的食品处理过程; 删除了仪器和设备中通用玻璃器皿的描述。G B5 0 0 9.2 5 92 0 1 61 食品安全国家标准食品中生物素的测定1 范围本标准规定了食品中生物素的测定方法。本标准适用于食品中生物素的测定。2 原理生物素是植物乳杆菌(L a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m) 生长所必需的营养素。在生物素测定培养基中,植物乳杆菌的生长与待测试样中生物素含量呈线性关系, 根据透光率与标准工作曲线进行比较, 即可计算出试样中待测物质的含量。3 试剂和
3、材料除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为G B/T6 6 8 2规定的二级水。3.1 试剂3.1.1 无水乙醇(C2H6O) 。3.1.2 氢氧化钠(N a OH) 。3.1.3 盐酸(HC l) 。3.1.4 柠檬酸盐。3.1.5 -淀粉酶:1.5U/m g。3.1.6 木瓜蛋白酶:5U/m g。3.1.7 硫酸(H2S O4) 。3.2 试剂配制3.2.1 乙醇溶液(5 0%) : 量取5 0 0m L无水乙醇与5 0 0m L水混匀。3.2.2 氢氧化钠溶液(0.5m o l/L) : 称取2 0g氢氧化钠, 溶于10 0 0m L水中, 混匀。3.2.3 氯化钠溶液(0.8
4、 5%) : 称取8.5g氯化钠, 加水溶解并稀释至10 0 0m L, 混匀。3.2.4 盐酸溶液(1m o l/L) : 吸取8 3m L盐酸, 用水稀释至10 0 0m L, 混匀。3.2.5 柠檬酸盐缓冲液(p H4.5) : 称取1.5g柠檬酸至一个1 0 0m L带磁力搅拌器的烧杯中, 加入约5 0m L蒸馏水至溶解, 再加入1 2m L的N a OH(1m o l/L) , 调节p H至4.5( 用0.1m o l/LHC l) , 将溶液转入1 0 0m L容量瓶中, 并用蒸馏水定容。该缓冲液可在28储存3d。3.2.6 蛋白酶-淀粉酶液: 分别称取2 0 0 m g木瓜蛋白酶
5、和 -淀粉酶, 加入2 0 m L水研磨至匀浆,30 0 0r/m i n离心5m i n 1 0m i n。现用现配。3.2.7 硫酸溶液(3%) : 量取3 0m L硫酸加入到10 0 0m L水混匀。G B5 0 0 9.2 5 92 0 1 62 3.3 标准品生物素(d - B i o t i n或V i t a m i nH) 标准品(C1 0H1 6N2O3S) : 纯度9 9%。3.4 标准溶液配制3.4.1 生物素标准储备液(1 0 0g/m L) : 精确称取1 0 0m g生物素标准品, 用乙醇溶液(5 0%) 溶解并转移至10 0 0m L容量瓶中, 定容至刻度。储存于
6、棕色瓶中, 于24冰箱保存1 2个月。3.4.2 生物素标准中间液(1.0g/m L) : 准确吸取1.0 0m L生物素标准储备液置于1 0 0m L棕色容量瓶中, 用乙醇溶液(5 0%) 稀释并定容至刻度, 混匀后储存于瓶中24冰箱保存6个月。3.4.3 生物素标准工作液(1 0n g/m L) : 准确吸取1.0 0m L生物素标准中间液置于1 0 0m L容量瓶中,用水稀释定容至刻度, 混匀。临用前现配。3.4.4 标准曲线工作液(1 0n g/m L) : 分两个浓度, 高浓度溶液的浓度为0.2n g/m L; 低浓度溶液的浓度为0.1n g/m L。从工作液中吸取两次各5m L,
7、用水分别定容到2 5 0m L和5 0 0m L。3.5 培养基3.5.1 乳酸杆菌琼脂培养基: 可按附录A配制。3.5.2 乳酸杆菌肉汤培养基: 可按附录A配制。3.5.3 生物素测定用培养基: 可按附录A配制。注:一些商品化合成培养基效果良好, 商品化合成培养基按标签说明进行配制。4 仪器和设备4.1 天平: 感量0.1m g。4.2 恒温培养箱:3 71。4.3 压力蒸汽消毒器:1 2 1(0.1 0m P a 0.1 2m P a) 。4.4 漩涡振荡器。4.5 离心机: 转速20 0 0r/m i n。4.6 分液器:0m L1 0m L。4.7 可调式电炉。4.8 p H计: 精度
8、0.0 1。4.9 分光光度计。4.1 0 超净工作台。注:玻璃仪器使用前, 用活性剂( 月桂磺酸钠或家用洗涤剂加入到洗涤用水中即可) 对硬玻璃测定管及其他必要的玻璃器皿进行清洗, 清洗之后2 0 0干热2h。5 菌种的制备与保存5.1 菌种植物乳杆菌L a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m(AT C C8 0 1 4) 。5.2 储备菌种的制备5.2.1 将菌种植物乳杆菌L a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m(AT C C8 0 1 4) 转接至乳酸杆菌琼脂培养基中, 在G B5 0 0 9.2 5 9
9、2 0 1 63 3 71恒温培养箱中培养2 0h2 4h, 取出后放入24冰箱中保存。每月至少传种一次, 作为储备菌株保存。5.2.2 将储备菌株接种至乳酸杆菌琼脂培养基中, 在3 71恒温培养箱中培养2 0h2 4h以活化菌株, 用于接种液的制备。保存数周以上的储备菌种, 不能立即用作接种液制备, 试验前应连续传种2代3代以保证细菌活力。5.3 接种液的制备用接种环将活化的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中, 于3 71恒温培养箱中培养1 6h2 0h。取出后将菌悬液离心弃去上清液, 再用氯化钠溶液(0.8 5%) 振匀并离心弃去上清液, 如此三次。最后用氯化钠溶液(0.8 5%) 稀释至透
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