DB44∕T 1926-2016 合成基因 质量要求(广东省).pdf
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1、ICS 03. 120 G 30 备案号54368-2017DB44 广东省由巳tT且,方标准DB44/ T 1926-2016 合成基因质量要求Quality requirements for synthetic gene 2016-12-02发布2017-03-02实施广东省质量技术监督局发布1 目IJ=i 本标准按照GBrr1.1-2009给出的规则起草.本标准由广东省质量技术监督局提出并归口.DB44/ T 1926-2016 本标准起草单位深圳|华大基因科技有限公司、广东省标准化研究院、广东产品质量监督检验研究院、深切|华大基因研究院.本标准主要起草人:沈明、胡葳、王娟、陈泰、王云、
2、赵宏翠、谭嘉力、谢强、宋样银、牡佳婷、李倩一。2 OB44/ T 1926-2016 合成基因质量要求1 范围本标准规定了合成基因产品的质量要求、质量检测试验方法及合成的DNA检测报告。本标准适用于合成基因产品质量评价及其检测程序.2 规范性引用文件GB/ l 6682 GB/ T 19495. 1 GB/T 19495. 2 GB/ l 19495. JB/ l 6777 YY/r 0087 YY/T 0657 3 术语、定标准GB/T1 3. 1. 1 定串1)序列3. 1. 2 00棚100,. 260 nm处光密度与280注在分光光度测定分析中,3. 1. 3 00,.100 260n
3、m处光密度与230nm处光密度的比值.注在分光光度测定分析中,OD,fI:表其他杂)Jt(多精等)的光密度.DNA纯品的OD.IOD,应大于或等于2.3 4 DB44/ T 1926-2016 3. 1.4 质粒plasmid细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子。注h参见JJF1265-2010. 注2,能稳定地独立存在于染色体外,井传递到子代,一般不整合到宿主染色体上.3. 1. 5 琼脂穰;疑胶电泳agarosegel electrophoresis 一种简便高效的分离和纯化DNA片断的方法。注1参见SN/T2497.21- 2010. 注2,由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电
4、荷的磷酸根残基,因此在电场中向正极移动.在一定的电场强度下.DNA分于的迁移速度取决于分子筛效应.具有不同的相对分子质量的DNA泳动速度不一样,因而可依据DNA分子的大小来使其分离.在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到幢测.3. 1. 6 限制性核酸内切酶restrictionendonuclease 可以切割双链DNA)字列的一类核酸酶。3. 1. 7 DNA型111芋DNAsequencing 分析特定DNA片段的碱基序列,即腺嚓岭、胸腺同苦呢、胞暗呢与鸟累岭的钊列方式的技术。3. 1. 8 序列比对aI ignment 为确定两个或多个序列之间的相
5、似性和同源性,而将它们按照一定的规律排列并分析的技术.3. 2 缩略语下列缩略语适用于本文件。EB (Ethidium Bromide)一一澳化乙呢。D( Optical Density)一一光密度DNA ( Deoxyribonucleic acid)一-脱氧核糖核酸4 质量评价要求4. 1 质量等级划分产品质量等级划分见表1,2 DB44/ T 1926-2016 表1产品质量等级划分检测产品种类等级挤标优符合4.2、4.3、4.4要求质粒DNA或合成的DNA片段合格符合4.2、4.4要求不合格不符合4.2或4.1要求甘油菌液合格符合4.4要求不合格不符合4.4要求4.2 合成DNA的纯度
6、和总量4.2. 1 合成的DNA纯度要求样品溶解在TE溶液(pH7-8.5)中.00拥/002腑的比值应在1.8-2. 0之间.00/00,应2.0.表2所示为合成的ONA纯度要求。表2DNA纯度判断指标。D拙。D,=1.8- 2. 0;。问/仙过2.0日 D皿/OD酬1.8或)2.0或0问./OD,2.0 4.2.2 ONA总量要求ONA总亟需大于或等于定制需求.4. 3 合成DNA完整性合成ONA完整性判断,采用5.2所规定的检测方法进行。根据产品形式上的差异,需检测的合成ONA产品应分为两类,相关要求如下:合成的ONA片段:要求电泳阁中条带单一,无其他杂质污染:一一包含有合成ONA产品的
7、质粒:要求电泳图中应存在目标条带且条带明亮,参考图谱参见附录A.质粒自尊切检验后的电泳图谱中,依据ONAMarker指示判断,出现与合成的ONA产品大小一致的条惜,可参见附录A中l页粒酶切电泳图。4.4 DNA序列的一致性合ni;DNA序列与定制序列匹配度应达到100弛。5 质量检测试验方法5. 1 合成DNA的纯度和总量检测5. 1. 1 合成ONA的纯度检测须符合GB/T19495. 3要求,为保证00260测量值有效性,其测量值范围应为0.05-1.O.如果不在此范固,应对合成ONA进行适当的稀释或浓缩。3 5 6 DB44/T 192-2016 5.1.2 利用紫外分光光度计测定合成D
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