DB44∕T 1411-2014 J亚群禽白血病病毒LAMP检测规程(广东省).pdf
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1、ICS 07.080 B 41 备案号44781-2015DB44 广东省由巳ET目,方析、准D844/ T 1411-2014 J亚群禽白血病病毒LAMP检测规程The LAMP detection of subgroup J avian leukosis virus 2014-08-18发布2014-11-18实施广东省质量技术监督局发布1 刚言牛;标准按GB/T1. 1-2009的规则ill行编写。本标准的附对A为资料性附录.本标(fl:iJl广东省农业厅提出并归u。本;标准起珩单位:华南农业大学毡医学院。本标准上起草人:巴l伟j凡、罗开创、樊忠县、徐J晶刚、廖明。本标准凶-次次有J.D
2、844/T 1411-2014 J 2 DB44/ T 1411-2014 J亚群禽白血病病毒LAMP检测规程1范围本标准规定了J亚群禽臼血病病毒(ALV-)的环介导等温扩增试验(LAMP)检测规程,远用于J亚群禽臼血病病毒的快速检测。2规范性引用文件3术语和定义3. 1 环介导等i.ffitt培1(loop-m甜atedisothermal ampl ification, L州的是指一种亲聚合酶(BstD N 倍的阳核酸扩3. 2 4. 1仪器、材料及试剂4. 1. 1仪器设备PCIl仪、制度电泳仪、7.K,-,.市1&11到1系统、高:i!台A离心,fJt(离心法度12000r/min以上
3、)、台式离心机或手掌式离心机(离心i草皮30 00r/min)、移液器(0守lL2此,iLlOL. 10LlOO此,100L1000L)、水浴箱、旋涡振荡器。4. 1.2材料O.5mL和1.5mL离心管。4. 1. 3口H7. 4 O. OlmoJ/L磷酸盐缓冲部液(PBS),称取磷E主主乱二纳1.096g、磷酸二氢纳0.31饱和l氧化钊8.5g,浴解于950mL?l在倒水中,完全溶解后用氮氧化制或盐酸调pH至7.4,定容至1000mL.灭菌后使用。4. 1.4组织裂f眼前在10mmol/L:经甲基氨基甲惋(Tris)Immol/L EDTA; 0.5% S悦。4. 1. 5蛋白酶K(j Om
4、g/ mLl将蛋白酶K19溶解于灭菌7J(50mL中,轻轻摇动,直至完全溶解,加灭菌3 4 D844/T 1411-2014 水定容至100rnL4. 1. 6 RNase A (iOrng/rnl) 取RNaseA O. 5g且于50ml坝料离心管中。)JD入;k.菌水40mL,浴解之后注:容至50rnL.100C煮沸15m;n.级但冷1;1至在世乱,分装j币:ti子20C保存。4. 1. 7 75唱乙醉浴液.取无水乙醉750mL.)J日入灭茵;j(定容至1000mL.-20C且在。4. 1. 8 1只化乙旋(IOmg/mLl,取泯化乙绽1.Og.加入水90mL.完全溶解后定容至100mL.
5、用侣m包装容器或移至棕色瓶中,室副呆ff.4.1. 9 50XTris冰乙般也泳缓冲液(TAE),在500mL水依次加入Tris242g、冰乙般(无水乙股)57. 1 rnL、pH8.0的0.5mollL乙二Jt在Dz:.简直(EDTA)100mL. )JU水定将全1000rnL.4. 1.10 lXTAE缓冲浪川非;在50XTAE缓冲液20,此.1Jn水定容至JOOOmL。4. 1. 11 1 %琼脂糖版胶将沽净的制l夜板水平1i立何在E作台仁Ii史上合适的非t-. ili fil(j称量琼斯租111.Og. 三ffJ瓶i.)JII入100mL1 X丁AE11.泳缓冲液.1J11 !辩解J)
6、j、JJ糖,和f琼月旨在lt济液冷却歪约50C1Pj, )JIl入10mg/mL淡化乙)挥手液5L.充分泌合。将丑i、HR椭j妓l院溶液沿!皮板边沿级1坠1H止it.入,革举胶l早I主f;市I)I:1 1 Ilun- 511l1ll左右,j:,剧院完伞凝固后,将1挝胶板放血入L主)JII入IX TAEI1.泳缓冲液的也泳槽中.士液面设过在kl眩,拔1-1-1梳子,以备)Jn伴咆泳。4. 1. 12电泳凝!jQ)JIl样缓冲浓:f.tE椭40.Og、pH8. o (.JO. 5mol/L EDTA 20mL、10%1一炕基磺酸制(SDS)5mL、决自由监50.Omg、水75mL先将庶糖完全浴血i
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