第十章-细胞骨架.ppt
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1、 第十章 细 胞 骨 架 三、细胞骨架的基本类型及其分布A 微丝(MF);B 微管(MT);C 中间丝(IF)D ABC叠加。一、细胞骨架的发现:一、细胞骨架的发现:戊二醛、常温固定、电镜制片。戊二醛、常温固定、电镜制片。二、研究细胞骨架的技术:二、研究细胞骨架的技术:免疫荧光抗体技术;激光共焦技术。免疫荧光抗体技术;激光共焦技术。四、细胞骨架功能四、细胞骨架功能(1)结构与支持结构与支持小肠上皮细胞小肠上皮细胞分裂细胞分裂细胞(2)胞内运输胞内运输(4)空间组织空间组织(3)收缩和运动收缩和运动肌动蛋白丝肌动蛋白丝中间丝中间丝马达蛋白马达蛋白微管微管神经元突起神经元突起肌动蛋白丝肌动蛋白丝微
2、管微管肌动蛋白丝肌动蛋白丝微管微管中间丝中间丝马达蛋白马达蛋白1.结构与支持作用结构与支持作用2.胞内运输作用胞内运输作用3.收缩和运动收缩和运动4.空间组织空间组织四、细胞骨架功能四、细胞骨架功能 本章内容本章内容第一节第一节 微丝与细胞运动微丝与细胞运动第二节第二节 微管及其功能微管及其功能第三节第三节 中间丝中间丝 一、微丝的组成及其组装一、微丝的组成及其组装二、微丝网格结构的调节与细胞运动二、微丝网格结构的调节与细胞运动三、肌球蛋白:依赖于微丝的分子马达三、肌球蛋白:依赖于微丝的分子马达四、肌细胞的收缩运动四、肌细胞的收缩运动第一节第一节 微丝与细胞运动微丝与细胞运动微丝,直径7 nm
3、,存在所有真核细胞中。微丝网络的空间结构与功能取决于微丝结合蛋白;微丝的组装与去组装与细胞突起形成、细胞微环境调节、胞质分裂、吞噬作用、细胞迁移等多种细胞过程相关;微丝还在细胞收缩和物质运输中起作用。第一节第一节 微丝与细胞运动微丝与细胞运动一、结构与成分一、结构与成分1.1.基本结构成分基本结构成分:肌动蛋白肌动蛋白(G-actin)(G-actin)2.2.肌动蛋白单体(肌动蛋白单体(G-actinG-actin)肌动蛋白纤维(肌动蛋白纤维(F-actinF-actin)3.肌动蛋白在生物进化过程中高度保守,肌动蛋白微小的差异可能会导致其功能的变化。组装组装去组装去组装肌动蛋白结构:单条肽
4、链折叠而成;肌动蛋白结构:单条肽链折叠而成;1 1分子分子ATPATP和和1 1分子分子MgMg2+2+结合于中间缝隙。结合于中间缝隙。微丝的结构:一条直径微丝的结构:一条直径7 nm7 nm的扭链,由肌动蛋白单体组成;外观为由的扭链,由肌动蛋白单体组成;外观为由2 2股股纤维呈右手螺旋盘绕而成,螺距纤维呈右手螺旋盘绕而成,螺距36 nm36 nm;在纤维内部,每个肌动蛋白单体;在纤维内部,每个肌动蛋白单体周围都有周围都有4 4个单体,上下各一,另外个单体,上下各一,另外2 2个位于一侧;具有裂缝的一端为负极。个位于一侧;具有裂缝的一端为负极。(二)微丝的组装及其动力性特征(二)微丝的组装及其
5、动力性特征1.微丝组装的条件微丝组装的条件G-actin结合结合ATP;高浓度的高浓度的Na+、K+;适当浓度适当浓度Mg2+.2.微丝的组装过程微丝的组装过程成核反应:成核反应:肌动蛋白寡聚体的形成;肌动蛋白寡聚体的形成;需要需要Arp2/3复合物的参与;肌动蛋白单体的临界浓度复合物的参与;肌动蛋白单体的临界浓度C0=Koff/Kon,高于,高于C0,自发组装。,自发组装。纤维的延长:纤维的延长:正极的组装速度比负极快。正极的组装速度比负极快。微丝组装中的踏车行为微丝组装中的踏车行为 微丝组装达到平衡时,表现为正极因添加肌动蛋白亚微丝组装达到平衡时,表现为正极因添加肌动蛋白亚基而延长,负极因
6、蛋白亚基的离开而缩短,这一现象称为基而延长,负极因蛋白亚基的离开而缩短,这一现象称为“踏车行为踏车行为”。(三)影响微丝组装的特异性药物(三)影响微丝组装的特异性药物细胞松弛素:与微丝结合后,可将微丝切断,并结合细胞松弛素:与微丝结合后,可将微丝切断,并结合在微丝末端抑制肌动蛋白在该处聚合。在微丝末端抑制肌动蛋白在该处聚合。鬼笔环肽:与微丝表面有强亲和力,但不与肌动蛋白鬼笔环肽:与微丝表面有强亲和力,但不与肌动蛋白单体结合,能阻断微丝的降解,使其保持稳定状态。单体结合,能阻断微丝的降解,使其保持稳定状态。细胞用罗丹明细胞用罗丹明标记的鬼笔环肽染标记的鬼笔环肽染色显示微丝的分布色显示微丝的分布二
7、、微丝网格结构的调节与细胞运动二、微丝网格结构的调节与细胞运动(一一)非肌肉细胞内微丝的结合蛋白非肌肉细胞内微丝的结合蛋白大多数非肌肉细胞中,微丝是一种动态结构,它们持续地进行组装与去组装。体内肌动蛋白的组装在2个水平上受到微丝结合蛋白的调节:可溶性肌动蛋白的存在状态;微丝结合蛋白的种类及其存在状态。细胞内微丝网络的组织形式和功能通常取决于与之结合的微丝结合蛋白。根据微丝结合蛋白作用方式的不同,可将其分为:肌动蛋白单体结合蛋白、成核蛋白、加帽蛋白、交联蛋白、割断及解聚蛋白。肌动蛋白结合蛋白与微丝的组装在合适条件下,结合ATP的肌动蛋白既可参与微丝正极端的组装,也可在负极端组装。胸腺素4与肌动蛋
8、白单体结合后,抑制肌动蛋白参与微丝的组装。前纤维蛋白(抑制蛋白)与肌动蛋白单体的底部结合,促进微丝正极端的组装,阻断负极端的组装。2.2.成核蛋白成核蛋白成核是肌动蛋白体外组装的限速步骤。在外来信号作用下,活化的Arp2/3复合物与细胞膜或其它适当的细胞结构结合,提供一个肌动蛋白的结合位点,大大加速了成核过程;新的肌动蛋白在正极端加入,而Arp2/3复合物则位于纤维的负极端。Arp2/3复合物也可结合在已有的微丝上,启动微丝的组装,新形成的微丝与原有的纤维呈70夹角;多个侧支的组装可使微丝连成一个树状网络。3.3.加帽蛋白加帽蛋白与微丝末端结合阻止微丝解聚或过度组装的蛋白质。微丝的负极端有Ar
9、p2/3复合物结合,处于稳定态;微丝的正极端多数通过CapZ或凝溶胶蛋白超家族成员而被加帽。凝溶胶蛋白和脱帽作用受细胞膜上GPCR-PIP2调控。4.4.交联蛋白交联蛋白微丝的排列方式主要由微丝交联蛋白的种类决定。成束蛋白将相邻的微丝交联成平行排列,而凝胶形成蛋白将微丝连接成网状。微丝交联蛋白都有2个相似的肌动蛋白结合位点,这些蛋白能够以单分子或二聚体形式将相邻微丝交联起来;多肽链上两肌动蛋白结合位点的间距决定微丝束或网的松紧程度。交联蛋白与微丝的互作交联蛋白与微丝的互作A 丝束蛋白和绒毛蛋白等交联而成的微丝束为紧密包被型,肌球蛋白不能进入,因而无收缩能力。B 有-辅肌动蛋白交联形成的微丝束相
10、连的纤维之间比较宽松,肌球蛋白可进入并与微丝互作,此种微丝束是可收缩的。C 细丝蛋白将微丝交联成网状结构。5.5.割断及解聚蛋白割断及解聚蛋白凝溶胶蛋白在高Ca2+浓度下,能将较长的微丝切成片段,使肌动蛋白由凝胶态向溶胶态转化;长的微丝被切断产生游离小片段,可加速合成或降解;丝切蛋白/肌动蛋白解聚因子能够与肌动蛋白单体或微丝结合,加速解聚。(二)细胞皮层(二)细胞皮层皮层:紧贴细胞质膜的胞质区域,并由微丝交联蛋白交联成凝胶态三维网状结构。位置:紧贴细胞质膜的区域.成分:肌动蛋白+交联蛋白、凝溶胶蛋白.相关运动:胞质环流、吞噬作用、变皱膜运动等.运动机制:Ca2+引起皮层凝溶胶状态的改变。(三)
11、应力纤维(三)应力纤维紧贴黏着斑的细胞质膜内侧的大量呈束状排列的微紧贴黏着斑的细胞质膜内侧的大量呈束状排列的微丝束。丝束。位置:黏着斑内的微丝束位置:黏着斑内的微丝束成分:微丝、肌球蛋白成分:微丝、肌球蛋白IIII、原肌球蛋白、细丝蛋白、原肌球蛋白、细丝蛋白和和辅肌动蛋白辅肌动蛋白功能:使细胞产生张力,参与细胞分化功能:使细胞产生张力,参与细胞分化机制:机制:?应力纤维和黏着斑的分布3.3.细胞伪足的形成与细胞迁移细胞伪足的形成与细胞迁移细胞迁移现象细胞迁移现象 神经嵴细胞从神经管向外迁移。神经嵴细胞从神经管向外迁移。细胞迁移过程:细胞迁移过程:突起的形成突起的形成锚定位点的确立锚定位点的确立
12、细胞迁移细胞迁移尾部前移尾部前移细胞迁移的机制:细胞迁移的机制:-肌动蛋白的聚合与肌动蛋白纤维的解聚肌动蛋白的聚合与肌动蛋白纤维的解聚荧光标记的鬼笔环肽染色显示体外培养细胞内微丝的分荧光标记的鬼笔环肽染色显示体外培养细胞内微丝的分布及细胞周缘伸出的伪足布及细胞周缘伸出的伪足动物细胞前缘的伪足动物细胞前缘的伪足 及细胞内的微丝及细胞内的微丝扫描电镜所显示的细胞伪足扫描电镜所显示的细胞伪足细胞皮层细胞皮层应力纤维应力纤维 伪足伪足非肌细胞前缘肌动蛋白的聚合和伪足的形成1 胞外信号与受体结合并启动胞内信号;2 胞内信号作用于WASP,并激活Arp2/3复合物,启动微丝的组装;3 肌动蛋白单体在微丝正
13、极端聚合,是微丝向胞膜延伸;4 Arp2/3复合物结合到微丝的侧面,启动微丝侧支的组装;5 微丝的正极不断延伸,推动细胞质膜形成伪足;6 微丝的负极端解聚。(五)微绒毛(五)微绒毛微绒毛中的微丝和微丝交联蛋白微绒毛中的微丝和微丝交联蛋白A 微绒毛内部微丝及微丝交联蛋白;B 小肠上皮细胞表面微绒毛;C 耳蜗毛细胞顶端的静纤毛。(六)胞质分裂环(六)胞质分裂环胞质分裂环胞质分裂环 胞质分裂动力来自于收缩环上肌球蛋白所介导的极性相反的微丝之间的滑动。出现时期:有丝分裂末期 成分:肌动蛋白、肌球蛋白 收缩机制:微丝的组装与去组装 暂时性微丝和永久性微丝暂时性微丝和永久性微丝A.BA.B属于永久性微丝;
14、属于永久性微丝;C.DC.D属于暂时性微丝属于暂时性微丝A:微绒毛中的微丝束微绒毛中的微丝束B:细胞质中的张力纤维细胞质中的张力纤维C:伪足中的微丝束伪足中的微丝束D:胞质分裂环胞质分裂环微丝结合蛋白微丝结合蛋白与膜结合蛋白与膜结合蛋白成束蛋白成束蛋白交联蛋白交联蛋白长纤维长纤维末端阻断(加帽)末端阻断(加帽)解聚解聚单体单体单体隔离单体隔离纤维切割蛋白纤维切割蛋白微丝结合蛋白功能示意图微丝结合蛋白功能示意图 微丝结合蛋白的功能:微丝结合蛋白的功能:稳定微丝结构稳定微丝结构;改变微丝的改变微丝的凝溶胶状态凝溶胶状态;实现微丝与其他部位的实现微丝与其他部位的连接连接;调节微丝的调节微丝的聚合和降
15、解聚合和降解。三、肌球蛋白:依赖于微丝的分子马达三、肌球蛋白:依赖于微丝的分子马达 在细胞内参与物质运输的马达蛋白可分为3类:沿微丝运动的肌球蛋白;沿微管运动的驱动蛋白和动力蛋白。(一)肌球蛋白的种类 在骨骼肌细胞内,多个II型肌球蛋白分子组装成肌原纤维的粗丝,并被相关结构约束在一定的区域,肌球蛋白的头部和组成微丝的肌动蛋白亚基之间的互作导致粗细丝之间的滑动。IIII型肌球蛋白分子型肌球蛋白分子2 2重链重链+4+4轻链轻链粗肌丝粗肌丝所有肌球蛋白都具有相似的马达结构域(保守区域),可作为肌球蛋白的分类依据,而多肽链C端和N端扩展部分则存在很大差异。II型肌球蛋白成员在心肌、骨骼肌和平滑肌中产
16、生强大收缩力;VII肌球蛋白参与黏着斑的动态变化;某些I型肌球蛋白对钙通道的活性具有调控作用。(二二)肌球蛋白的结构肌球蛋白的结构沿微丝运动的分子马达,通常含3个结构域:马达结构域、调控结构域、与肌球蛋白复合体组装相关尾部结构域。包含1个肌动蛋白亚基结合位点和1个具有ATPase活性的ATP结合位点;该结构域在肌球蛋白超家族中高度保守,是肌球蛋白定性和酚类的依据,负责化学能到机械能的转变。调控结构域是一段螺旋,也是肌球蛋白结合轻链的结合部位,在肌球蛋白上发挥杠杆作用。根据分子结构差异,分为传统的肌球蛋白和非传统的肌球蛋白。VI型肌动蛋白的运动方向为从微丝的正极端向负极端移动,其余的肌动蛋白都是
17、向微丝的正极端移动。1.II1.II型肌球蛋白型肌球蛋白肌球蛋白体外运动的试验模型肌球蛋白体外运动的试验模型 纯化的肌球蛋白S1片段被固定在盖玻片上,加入微丝;当加入ATP时,微丝沿盖玻片移动。胰蛋白酶处理II型肌球蛋白,产生轻酶解肌球蛋白(LMM)和重酶解肌球蛋白(HMM);HMM经木瓜蛋白酶处理,形成肌球蛋白头部(HMM-S1)和杆部(HMM-S2)。2.2.非传统类型肌球蛋白非传统类型肌球蛋白I型肌球蛋白只有1个头部(马达结构域)和尾部,并且在体外不能组装成纤维。V型是由2条肽链组成的二聚体,具有2个头部。四、肌细胞的收缩运动四、肌细胞的收缩运动(一)肌纤维的结构(一)肌纤维的结构骨骼肌
18、骨骼肌肌纤维束肌纤维束肌纤维肌纤维肌原纤维肌原纤维肌节肌节 骨骼肌的组成骨骼肌的组成骨骼肌骨骼肌肌纤维束肌纤维束肌纤维肌纤维肌原纤维肌原纤维肌节肌节肌纤维是由数百条肌原纤维组成的集束。每根肌纤维由肌节收缩单元呈线性重复排列而成。肌原纤维的带状条纹由粗肌丝和细肌丝有序组装而成。粗肌丝由肌球蛋白组装而成,细肌丝的主要成分为肌动蛋白,辅以原肌球蛋白和肌钙蛋白。肌球蛋白的头部突出于粗肌丝表面,并可与细肌丝上肌动蛋白亚基结合,构成粗细肌丝之间的横桥。松弛(B上)和收缩(C上)状态下,肌节中明暗带有规律的排列状态;松弛(B下)和收缩(C下)状态下,粗肌丝和细肌丝的结构示意图;D 肌肉中粗肌丝横切图;E 肌
19、肉中粗肌丝和细肌丝交汇处的电镜图,细肌丝围绕粗肌丝的六角形排列。肌节的组成肌节的组成 粗肌丝:粗肌丝:肌节肌节 细肌丝:细肌丝:肌球蛋白肌球蛋白肌动蛋白肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白原肌球蛋白、肌钙蛋白细肌丝细肌丝粗肌丝粗肌丝与肌肉收缩相关的蛋白与肌肉收缩相关的蛋白A.A.肌球蛋白肌球蛋白(myosinmyosin)含含2 2条重链和条重链和4 4条轻链条轻链头部具有头部具有ATPATP酶活力酶活力B.原肌球蛋白原肌球蛋白(trpomyosin,Tm)两条平行的多肽链形成两条平行的多肽链形成a a螺旋螺旋 位于肌动蛋白螺旋沟内位于肌动蛋白螺旋沟内 调节调节肌动蛋白肌动蛋白与与肌球蛋白头部肌球蛋
20、白头部的结合的结合C.肌钙蛋白肌钙蛋白(troponin,Tn)TnC TnC 特异地与特异地与CaCa2+2+结合结合TnT TnT 与与原肌球蛋白原肌球蛋白有高度亲和力有高度亲和力TnI TnI 抑制抑制肌球蛋白肌球蛋白ATPaseATPase活性活性肌肉收缩的机制A.A.肌纤维接受神经冲动肌纤维接受神经冲动B.B.肌质网释放肌质网释放CaCa2+2+C.C.原肌球蛋白移位原肌球蛋白移位D.D.粗细肌丝的相对滑动粗细肌丝的相对滑动E.E.CaCa2+2+的回收的回收粗粗细细肌肌丝丝相相对对滑滑动动示示意意图图肌肉收缩过程图解 在初始状态,组成粗肌丝的肌球蛋白头部(马达结构域)未结合ATP时
21、,该肌球蛋白的头部与细肌丝结合,并成僵直状态。1-2 ATP结合到肌球蛋白头部导致与肌动蛋白纤维的结合力下降,肌球蛋白与肌动蛋白分开;3 ATP水解为ADP+Pi,水解产物仍与肌球蛋白结合,获能的肌球蛋白头部发生旋转,向肌丝的正极端抬升;4 在Ca2+存在下,肌球蛋白头部与靠近肌丝正极端的一个肌动蛋白亚基结合;5 Pi释放,肌球蛋白颈部结构域构象改变,导致肌球蛋白头部与细丝的角度发生变化,拉动细肌丝导致细肌丝相对粗肌丝的滑动;6 ADP释放,肌球蛋白的头部结构域与细肌丝之间又回到僵直状态。微丝存在部位微丝存在部位 相关蛋白构成相关蛋白构成引发的运动方式引发的运动方式 运动机制运动机制 细胞皮层
22、细胞皮层 应力纤维应力纤维 伪足伪足 胞质分裂环胞质分裂环 肌肉肌肉肌动蛋白肌动蛋白交联蛋白交联蛋白凝溶胶蛋白凝溶胶蛋白胞质环流胞质环流吞噬作用吞噬作用变皱膜运动变皱膜运动CaCa2+2+浓度变化,浓度变化,引起凝溶胶状引起凝溶胶状态的转变态的转变肌动蛋白肌动蛋白肌球蛋白肌球蛋白原肌球蛋白原肌球蛋白细胞产生张力细胞产生张力?肌动蛋白肌动蛋白 迁移运动迁移运动微丝的聚合与微丝的聚合与解聚解聚 肌动蛋白肌动蛋白 肌球蛋白肌球蛋白 细胞分裂细胞分裂微丝的聚合与微丝的聚合与解聚解聚肌动蛋白、肌动蛋白、肌球肌球蛋白、原肌球蛋蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白白、肌钙蛋白 肌肉收缩肌肉收缩 粗细肌丝的相粗细肌丝的
23、相 对滑动对滑动小结:第一节第一节 细胞骨架概述细胞骨架概述 发现、技术、分类、功能发现、技术、分类、功能 第二节第二节 微丝微丝 微丝的成分微丝的成分 微丝的组装:条件、过程、药物微丝的组装:条件、过程、药物 微丝结合蛋白微丝结合蛋白 微丝与细胞运动微丝与细胞运动知识拓展:知识拓展:查阅文献了解查阅文献了解“肌营养不良症肌营养不良症”的的 分子基础与及细胞骨架的关系分子基础与及细胞骨架的关系。第二节第二节 微管及其功能微管及其功能1 微管的结构组成与极性2 微管的组装和去组装3 微管组织中心4 微管的动力学性质5 微管结合蛋白对微管网络结构的调节6 微管对细胞组织结构的组织作用7细胞内依赖于
24、微管的物质运输8纤毛和鞭毛的结构与功能9纺锤体和染色体运动一、结构组成与极性一、结构组成与极性1.1.基本结构单位基本结构单位-微管蛋白微管蛋白和和微管蛋白微管蛋白2.2.在二聚体上有在二聚体上有GTPGTP和二价阳离子和二价阳离子的结合位点。的结合位点。微管蛋白微管蛋白上的上的GTPGTP结合位点为结合位点为N N位点(不可交换位点)位点(不可交换位点)微管蛋白微管蛋白上的上的GTPGTP结合位点为结合位点为E E位点(可交换位点)位点(可交换位点)一个秋水仙素结合位点;一个秋水仙素结合位点;一个长春花碱结合位点。一个长春花碱结合位点。多基因编码。多基因编码。3.微管横截面:有13个球形蛋白
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