DB65∕T 4292-2020 牛羊布鲁氏菌病荧光偏振(FPA)检测方法(新疆维吾尔自治区).pdf
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1、ICS 11. 220 B 41 新疆维吾尔自主11习DB65 区地方标准DB65/T 4292-2020 牛羊布鲁氏菌病荧光偏振(FPA)检测方法Detection ofbrucellosis in cattle and sheep by Fluorescence Polarization Assay(FPA) 2021 - 01-01发布2021一02 -01实施新疆维吾尔自治区市场监督管理局发布0865/T 4292-2020 刚昌本标准按GB/T1.1-2020 (标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则相关要求编制。本标准由乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心提出。本标准由新疆
2、维吾尔自治区畜牧兽医局归口并组织实施。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧业标准化技术委员会技术归口。本标准由乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心、哈尔滨平:可生物技术有限公司起草。本标准主要起草人:李爱巧、王涛、李泽钦、周继萍、吴星星、连晓春、施远翔、周棕长、胡玉军、杨玲、马晓燕、张震、刘文伟、蔡扩军、李建玲、王立群。本标准实施应用中的疑问,请咨询乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心、哈尔滨平润生物技术有限公司。对本标准的修改意见建议,请反馈至新疆维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市新华南路167号)、新疆维吾尔自治区畜牧兽医局(乌鲁木齐市新华南路408号)、乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心(乌鲁木齐市南
3、湖西路15号)、哈尔滨平河生物技术有限公司(黑龙江省哈尔滨市国家高新技术产业开发区太湖北街5号)。新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话0991-2817197;传真0991-2311250;邮编:830004 新疆维吾尔自治区畜牧兽医局联系电话:0991-8568308;传真0991-8568940;邮编:830004 乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心联系电话:0991-4616369;传真0991-4616369;邮编:830063 哈尔滨平河生物技术有限公司联系电话18504660578;13845067089传真0451-87618177;邮编:150090IDLC:/T A1nl 叮
4、r飞叮八UU.JI I -tL7L-一LV牛羊布鲁氏菌病荧光偏振(FPA)检测方法1 范围本标准规定了牛、羊布鲁氏菌病荧光偏振(FPA)检测的生物安全措施、仪器设备与耗材、试剂和操作方法。本标准适用于新疆维吾尔自治区境内的牛、羊布鲁氏菌抗体水平的初筛检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单适用于本文件。GB 19489 实验室生物安全通用要求NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法DB 65/T 3893 羊布鲁氏菌病监测样品采集技术规范3 缩略语下列缩略语适用于本
5、文件。OIE W orld Organization for Animal Health 世界动物卫生组织FPA Fluorescence Polarization Assay 荧光偏振检测FPM Fluorescence Polarisation Analyser 荧光偏振分析仪mP Millipolarisation Units 荧光偏振值OPS O-Polysaccharide 0-多半唐mohms milliohms 兆欧姆4 生物安全措施为了保护实验室检测人员的安全,应由经过实验室生物安全培训的并取得检测员上岗证的工作人员进行布鲁氏菌病的实验室检测工作,采取必要的预防气溶胶感染的安全
6、措施。实验所产生的废弃物按照GB 19489中的有关规定执行。5 仪器设备与耗材5. 1 荧光偏振检测仪:试管型的布病便携式FPA检测仪和96孔的台式FPA检测仪两种。5.2 微量移液器(1L 10L、20L200L、100L 1000L)、多道移液器(10 L200L) 和吸头。5. 3 96孔黑色平底不透明微量板(聚苯乙烯板)。5.4 10 mmx75 mm棚硅玻璃试管。D865/T 4292-2020 5.5 旋涡振荡器。6 试剂6. 1 标准阳性血清:布鲁氏菌病荧光偏振商品化试剂。6. 2 标准阴性血清:布鲁氏菌病荧光偏振商品化试剂。6.3 FPA标记抗原:布鲁氏菌病荧光偏振商品化试剂
7、或自行配置方法见附录A。6.4 10 xFPA样品稀释液:布鲁氏菌病荧光偏振商品化试剂或试剂自行配置方法见附录A。7 操作方法7. 1 样品采集和处理按照NYfT541和DB65fT 3893中的方法采集和分离受检牛、羊的血清,分离后的血清应没有溶血现象,血清量通常为1mL备用。7. 2 操作前准备工作7.2.1 将试剂和样品恢复至室温18oc 28 oc。检测操作应在室温18oc 28 oc下进行。7.2.2 10倍FPA样品稀释液:在商业化稀释液瓶中加入200mL (电阻为18.2mohms)的去离子水,混合均匀后为1xFPA样品稀释液,直接使用。7.2.3 FPA标记抗原,直接应用。7.
8、 3 试管检测法7.3. 1 对照阴阳性血清检测7. 3. 1. 1 每天第一次试验前或FPA检测仪被移动后,都要检测对照血清。7.3.1.2 在两个10mmx75 mm棚硅玻璃试管(试管应清洁无指纹等,且无刮痕中分别加入1mL的lxFPA样品稀释液。7.3.1.3 分别在两个试管中加各入10L的阳性和阴性对照血清,充分混合均匀(旋涡混合器振动5s)。7.3.1.4 使用试管型便携式FPA仪分别读取两管的空白密度值。7.3.1.5 每管加入10L的FPA标记抗原,充分混合均匀(旋涡混合器振动5s)。7.3.1.6 孵育至少2min,最长不超过5mino 7.3.1.7 使用便携式FPA仪读取两
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