GB 1886.174-2024 食品安全国家标准 食品添加剂 食品工业用酶制剂.pdf
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1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B1 8 8 6.1 7 42 0 2 4食品安全国家标准食品添加剂 食品工业用酶制剂2 0 2 4-0 2-0 8发布2 0 2 4-0 8-0 8实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布前 言 本标准代替G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 6 食品安全国家标准 食品添加剂 食品工业用酶制剂。本标准与G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 6相比,主要变化如下:增加了“酶制剂用辅料”“固定化酶制剂”和“固定化载体”的术语和定义;增加了酶制剂用辅料和固定化载体的技术要求;修改了大肠埃希氏菌的指标要
2、求;增加了酶制剂用辅料名单的附录要求;增加了附录中部分酶活力测定参考方法。G B1 8 8 6.1 7 42 0 2 4食品安全国家标准食品添加剂 食品工业用酶制剂1 范围本标准适用于 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准(G B2 7 6 0)和相关公告允许使用的食品工业用酶制剂。2 术语和定义2.1 食品工业用酶制剂由动物或植物的可食或非可食部分直接提取,或由传统选育或经基因重组技术得到的微生物(包括但不限于细菌、放线菌、真菌菌种)发酵、提取后,或再经进一步纯化、制剂化等工艺制得的(可含有一个或多个活性酶组分),用于食品工业,具有特殊催化活性的制剂产品。2.2 酶活力酶在一定条件下催化某一
3、特定反应的活性能力高低的指标。2.3 抗菌活性抑制或杀灭微生物的特性。2.4 酶制剂用辅料为酶制剂产品的活性保存、流通贮存、标准化使用等目的而加入的食品原料和食品添加剂。2.5 固定化酶制剂利用物理和(或)化学的方法将酶固定于载体上,在食品生产过程中以不可溶解状态发挥作用的产品剂型。2.6 固定化载体固定化酶制剂中起固定酶作用的材料。3 产品分类按产品形态分为固体剂型(含固定化剂型)和液体剂型。4 技术要求4.1 原辅料要求4.1.1 用于生产酶制剂的原辅料应符合相关要求,在规定的使用条件下,不应对最终食品产生有害健1G B1 8 8 6.1 7 42 0 2 4康的残留污染。4.1.2 用于
4、提取酶制剂的动物组织应符合肉类检疫要求。4.1.3 用于提取酶制剂的植物组织不应霉变。4.1.4 对微生物生产菌种应进行分类学和(或)遗传学的鉴定,并应符合 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准(G B2 7 6 0)及相关公告。菌种的保藏方法和条件应保证发酵批次之间的稳定性和可重复性。4.1.5 为了酶制剂产品的活性保存、流通贮存和标准化使用,商品化的酶制剂允许加入必要的辅料成分。酶制剂用辅料不应在最终食品中发挥功能作用,一般按生产需要适量使用,在达到预期的目的下尽可能减少使用品种和用量。酶制剂中允许使用的辅料名单见附录A。4.1.6 固定化酶制剂所使用的固定化载体应符合 食品安全国家标准
5、食品接触材料及制品用添加剂使用标准(G B9 6 8 5)、食品安全国家标准 食品添加剂使用标准(G B2 7 6 0)或其他在食品中允许使用的原料清单的规定。4.2 理化指标产品酶活力应符合声称。注:部分酶制剂的酶活力测定参考方法参见附录B。企业可按相应标准中给出的或企业规定的方法测定。4.3 污染物限量污染物限量应符合表1的规定。表1 污染物限量项 目限 量检验方法铅(P b)/(m g/k g)5.0G B5 0 0 9.7 5或G B5 0 0 9.1 2总砷(以A s计)/(m g/k g)3.0G B5 0 0 9.7 6或G B5 0 0 9.1 14.4 微生物限量微生物限量应
6、符合表2的规定。其中,经基因重组技术得到的微生物生产的酶制剂不应检出生产菌。表2 微生物限量项 目限 量检验方法菌落总数/(C F U/g或C F U/m L)5 00 0 0G B4 7 8 9.2大肠菌群/(C F U/g或C F U/m L)3 0G B4 7 8 9.3大肠埃希氏菌/(C F U/g或C F U/m L)不应检出G B4 7 8 9.3 8沙门氏菌(2 5g或2 5m L)不应检出G B4 7 8 9.44.5 抗菌活性微生物来源的酶制剂不应检出抗菌活性,抗菌活性按 食品安全国家标准 食品微生物学检验 微生物源酶制剂抗菌活性的测定(G B4 7 8 9.4 3)执行。2
7、G B1 8 8 6.1 7 42 0 2 4附 录 A酶制剂用辅料名单 酶制剂用辅料名单见表A.1。表A.1 酶制剂用辅料名单序号名称C N S号I N S号1柠檬酸0 1.1 0 13 3 02柠檬酸钠0 1.3 0 33 3 1 i i i3柠檬酸钾0 1.3 0 43 3 2 i i4乳酸0 1.1 0 22 7 05乳酸钠1 5.0 1 23 2 56磷酸0 1.1 0 63 3 87焦磷酸二氢二钠1 5.0 0 84 5 0 i8焦磷酸钠1 5.0 0 44 5 0 i i i9磷酸二氢钙1 5.0 0 73 4 1 i1 0磷酸二氢钾1 5.0 13 4 0 i1 1磷酸氢二铵0
8、 6.0 0 83 4 2 i i1 2磷酸氢二钾1 5.0 0 93 4 0 i i1 3磷酸氢钙0 6.0 0 63 4 1 i i1 4磷酸三钙0 2.0 0 33 4 1 i i i1 5磷酸三钾0 1.3 0 83 4 0 i i i1 6磷酸三钠1 5.0 0 13 3 9 i i i1 7六偏磷酸钠1 5.0 0 24 5 2 i1 8三聚磷酸钠1 5.0 0 34 5 1 i1 9磷酸二氢钠1 5.0 0 53 3 9 i2 0磷酸氢二钠1 5.0 0 63 3 9 i i2 1焦磷酸四钾1 5.0 1 74 5 0(v)2 2焦磷酸一氢三钠1 5.0 1 34 5 0(i i
9、)2 3聚偏磷酸钾1 5.0 1 54 5 2(i i)2 4酸式焦磷酸钙1 5.0 1 64 5 0(v i i)2 5冰乙酸(又名冰醋酸)0 1.1 0 72 6 02 6乙酸钠(又名醋酸钠)0.0 1 32 6 2 i2 7盐酸0 1.1 0 85 0 72 8氢氧化钙0 1.2 0 25 2 62 9氢氧化钾0 1.2 0 35 2 53 0碳酸钠0 1.3 0 25 0 0 i3G B1 8 8 6.1 7 42 0 2 4表A.1 酶制剂用辅料名单(续)序号名称C N S号I N S号3 1硫酸3 2氢氧化钠3 3氨水(包括液氨)3 4二氧化硅0 2.0 0 45 5 13 5硬脂
10、酸镁0 2.0 0 64 7 03 6硅酸钙0 2.0 0 95 5 23 7抗坏血酸钙0 4.0 0 93 0 23 8抗坏血酸棕榈酸酯0 4.0 1 13 0 43 9抗坏血酸(又名维生素C)0 4.0 1 43 0 04 0抗坏血酸纳0 4.0 1 53 0 14 1二氧化硫0 5.0 0 12 2 04 2焦亚硫酸钾0 5.0 0 22 2 44 3焦亚硫酸钠0 5.0 0 32 2 34 4亚硫酸钠0 5.0 0 42 2 14 5亚硫酸氢钠0 5.0 0 52 2 24 6低亚硫酸钠0 5.0 0 64 7苯甲酸1 7.0 0 12 1 04 8苯甲酸钠1 7.0 0 22 1 1
11、4 9山梨酸1 7.0 0 32 0 05 0山梨酸钾1 7.0 0 42 0 25 1丙酸1 7.0 2 92 8 05 2丙酸钠1 7.0 0 62 8 15 3丙酸钙1 7.0 0 52 8 25 4对羟基苯甲酸甲酯钠1 7.0 3 22 1 95 5对羟基苯甲酸乙酯1 7.0 0 72 1 45 6对羟基苯甲酸乙酯钠1 7.0 3 62 1 55 7聚氧乙烯(2 0)山梨醇酐单月桂酸酯(又名吐温2 0)1 0.0 2 54 3 25 8聚氧乙烯(2 0)山梨醇酐单棕榈酸酯(又名吐温4 0)1 0.0 2 64 3 45 9聚氧乙烯(2 0)山梨醇酐单硬脂酸酯(又名吐温6 0)1 0.0
12、 1 54 3 56 0聚氧乙烯(2 0)山梨醇酐单油酸酯(又名吐温8 0)1 0.0 1 64 3 36 1甘油(又名丙三醇)1 5.0 1 44 2 26 2D-甘露糖醇1 9.0 1 74 2 16 3微晶纤维素0 2.0 0 54 6 0 i6 4氨基乙酸(又名甘氨酸)1 2.0 0 76 4 04G B1 8 8 6.1 7 42 0 2 4表A.1 酶制剂用辅料名单(续)序号名称C N S号I N S号6 5碳酸钙(包括轻质和重质)1 3.0 0 61 7 0 i6 6硫酸钙1 8.0 0 15 1 66 7氯化钙1 8.0 0 25 0 96 8氯化镁1 8.0 0 35 1 1
13、6 9丙二醇1 8.0 0 415 2 07 0麦芽糖醇1 9.0 0 59 6 5(i)7 1麦芽糖醇液1 9.0 2 29 6 5(i i)7 2山梨糖醇1 9.0 0 64 2 0(i)7 3山梨糖醇液1 9.0 2 34 2 0(i i)7 4乳糖醇(又名4-D吡喃半乳糖-D-山梨醇)1 9.0 1 49 6 67 5阿拉伯胶2 0.0 0 84 1 47 6黄原胶(又名汉生胶)2 0.0 0 94 1 57 7纤维素7 8氧化镁(包括重质和轻质)7 9乙醇8 0明胶2 0.0 0 28 1海藻酸钠(又名褐藻酸钠)2 0.0 0 44 0 18 2羧甲基纤维素钠2 0.0 0 34 6
14、 68 3聚葡萄糖2 0.0 2 212 0 08 4瓜尔胶2 0.0 2 54 1 28 5磷酸酯双淀粉2 0.0 3 414 1 28 6氯化钾0 0.0 0 85 0 88 7硫酸镁0 0.0 2 15 1 88 8L-半胱氨酸盐酸盐1 3.0 0 39 2 08 9硬脂酸(又名十八烷酸)1 4.0 0 95 7 09 0聚乙二醇1 4.0 1 215 2 19 1肌醇9 2乙酸锌9 3L-半胱氨酸9 4硫酸铵9 5硫酸钠9 6硫酸锰9 7氯化铵9 8氯化钠9 9醋酸钙(乙酸钙)注:合适的各种食品原料作为酶制剂用辅料,不在本表列出。所用食品原料需符合相应的标准。5G B1 8 8 6.1
15、 7 42 0 2 4附 录 B部分酶制剂的酶活力测定参考方法B.1 部分酶制剂的酶活力测定参考方法部分酶制剂的酶活力测定参考方法见表B.1。表B.1 部分酶制剂的酶活力测定参考方法序号种类参考方法1-淀粉酶-淀粉酶制剂(G B/T2 4 4 0 1)2-乙酰乳酸脱羧酶附录B中B.23-葡聚糖酶-葡聚糖酶制剂(Q B/T4 4 8 1)4菠萝蛋白酶 酶制剂质量要求 第1部分:蛋白酶制剂(G B/T2 3 5 2 7.1)5蛋白酶(包括乳凝块酶)酶制剂质量要求 第1部分:蛋白酶制剂(G B/T2 3 5 2 7.1)6果胶酶附录B中B.3或 碱性果胶酶制剂(Q B/T4 4 8 2)7过氧化氢酶
16、 工业用酶制剂测定技术导则(G B/T3 5 5 3 8)8木瓜蛋白酶 酶制剂质量要求 第1部分:蛋白酶制剂(G B/T2 3 5 2 7.1)9木聚糖酶 木聚糖酶制剂(Q B/T4 4 8 3)1 0葡糖淀粉酶(淀粉葡糖苷酶)附录B中B.41 1普鲁兰酶 工业用酶制剂测定技术导则(G B/T3 5 5 3 8)1 2乳糖酶(-半乳糖苷酶)工业用酶制剂测定技术导则(G B/T3 5 5 3 8)1 3无花果蛋白酶F i c i n 酶制剂质量要求 第1部分:蛋白酶制剂(G B/T2 3 5 2 7.1)1 4纤维素酶C e l l u l a s e 纤维素酶制剂(Q B/T2 5 8 3)1
17、 5蔗糖1-果糖转移酶(又名果糖基转移酶)果糖基转移酶制剂(Q B/T5 3 5 7)1 6脂肪酶 脂肪酶制剂(G B/T2 3 5 3 5)1 7转葡糖苷酶附录B中B.51 8溶菌酶 食品安全国家标准 食品添加剂 溶菌酶(G B1 8 8 6.2 5 7)B.2-乙酰乳酸脱羧酶活力的测定B.2.1-乙酰乳酸脱羧酶可以与-乙酰乳酸反应脱羧,将-乙酰乳酸羧基转化为3-羟基-2-丁酮的酶。B.2.2-乙酰乳酸脱羧酶活力在3 0、p H6.0的条件下,1g或1m L酶样品与底物-乙酰乳酸发生反应,每分钟生成1m o l的3-羟基-2-丁酮(乙偶姻),即为1个酶活力单位,以U/g(或U/m L)表示。
18、B.2.3 分光光度计法B.2.3.1 范围本方法规定了-乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定方法。本方法适用于用分光光度计测定-乙酰乳酸脱羧酶制剂中-乙酰乳酸脱羧酶的酶活力。本方法6G B1 8 8 6.1 7 42 0 2 4不适用于啤酒和其他含醇产品中-乙酰乳酸脱羧酶的酶活力的测定。试样中3-羟基-2-丁酮(乙偶姻)和/或双乙酰的存在会使试验结果偏大。乙偶姻在贮存时易形成二聚体,从而影响试验结果。但若遵循配制步骤中所述的措施去预防,本方法仍可使用。B.2.3.2 原理-乙酰乳酸脱羧酶与底物-乙酰乳酸反应脱羧生成乙偶姻。乙偶姻在碱性条件下与萘酚和肌酸的混合物反应生成红色产物。通过在5 2 2n m下
19、测定溶液的吸光度,可以从乙偶姻标准曲线上得出反应生成的乙偶姻的量,进而计算出-乙酰乳酸脱羧酶的酶活力。B.2.3.3 试剂和材料除特殊说明外,所用的试剂均为分析纯,水均为符合G B/T6 6 8 2中规定的二级水。B.2.3.3.1 乙偶姻(3-羟基-2-丁酮)CH3C O CH(OH)CH3,C A S号:5 1 3-8 6-0,纯度9 5%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。B.2.3.3.2 ME S(9.7 6g/L)-氯化钠(3 5.0 6 4g/L)-聚氧化乙烯十二烷基醚(1.5 2m L/L)缓冲液:分别称取2-N-吗啉代 乙基磺酸(2-N-m o r p h o l i
20、n oe t h a n e s u l f o n i ca c i d,ME S)4 8.8 0g和氯化钠1 7 5.3 2g于烧杯中,用约4.5L水溶解,然后加入1 5%的聚氧化乙烯十二烷基醚溶液7.6 0m L,搅拌均匀;用约1m o l/L氢氧化钠溶液调节p H至6.0 00.0 5。然后移入50 0 0m L容量瓶中,用水定容,搅拌均匀。该溶液在常温(1 52 0)下的保存期为1周。B.2.3.3.3-乙酰乳酸底物(2.0 0m L/L):吸取乙基-2-乙酸基-2-甲基乙酰乙酸1 0 0L于5 0m L容量瓶中,加入约0.5 0m o l/L的氢氧化钠溶液6.0m L,振摇2 0m
21、 i n后,加入缓冲液到约4 0.0m L;用约1m o l/L盐酸调节溶液的p H至6.0 00.0 5。然后,再用缓冲液定容。该溶液使用前配制。B.2.3.3.4 萘酚(1 0.0g/L)/肌酸(1.0g/L)显色剂:分别称取1-萘酚5.0g和肌酸0.5g移入5 0 0m L容量瓶中,用约1m o l/L的氢氧化钠溶液溶解并定容。该溶液使用前配制。配制时需避光,并且冰浴。警告:1-萘酚可燃,有毒。对眼和黏膜有刺激性。吞咽或经皮肤吸收都能引起中毒。B.2.3.3.5 乙偶姻储备液(1.0 0 0g/L):取一定量的乙偶姻于试管中,在3 7恒温箱中溶解。然后将试管置于冰水中使乙偶姻重结晶。重结
22、晶后,乙偶姻不含有影响试验结果的乙偶姻二聚体,可用于储备液的配制;称取重结晶后的乙偶姻0.1 0 0g,精确至0.0 0 01g,移入1 0 0m L容量瓶中,用水溶解并定容。注:乙偶姻对热不稳定,且容易吸潮,因此需放置在干燥器中冷藏(2 6)保存。如发现物质有明显的吸潮现象,建议放弃不用。该溶液在冷藏条件下的保存期为1周。B.2.3.3.6 乙偶姻标准溶液,用乙偶姻储备液和水按照表B.2稀释而成,该溶液应每天配制。表B.2 乙偶姻标准溶液标准点乙偶姻储备液/m L水/m L稀释倍数乙偶姻/(m g/L)11 0 0.00.0a21.09 9.01 0 0.01 0.032.09 8.05 0
23、.02 0.044.09 6.02 5.04 0.056.09 4.01 6.76 0.068.09 2.01 2.58 0.0 a用水做第一个标准点。7G B1 8 8 6.1 7 42 0 2 4B.2.3.4 仪器和设备B.2.3.4.1 分析天平:精度为0.0 0 01g。B.2.3.4.2 p H计:精度为0.0 1。B.2.3.4.3 恒温水浴锅:3 00.1。B.2.3.4.4 分光光度计:可在5 2 2n m下测定吸光度。B.2.3.4.5 计时器。B.2.3.4.6 涡旋振荡器。B.2.3.5 分析步骤B.2.3.5.1 乙偶姻标准曲线的制备分别吸取配制好的乙偶姻标准溶液4
24、0 0L于6个不同的1 0m L试管中。然后按表B.2依次在每个试管中加入显色剂4.6 0m L,用涡旋振荡器充分混合均匀。室温下反应4 0.0m i n后,使用分光光度计,在5 2 2n m下测定各管溶液的吸光度。B.2.3.5.2 标准对照品的制备建议使用一个有代表性的、稳定的样品作为标准对照品。在每次分析中,将该标准对照品与样品一同进行检测,以判断试验的重复性。B.2.3.5.3 样品溶液的制备从样品中称取一定量的样品,精确至0.0 0 05g,用溶液稀释。其稀释的倍数要使样品的最终吸光度H1落在乙偶姻标准曲线的范围内。B.2.3.5.4 标准曲线的绘制以5 2 2n m波长下的吸光度为
25、Y轴,乙偶姻的浓度(m g/L)为X轴,绘制标准曲线,计算出标准曲线的斜率h(或用回归方程计算)。B.2.3.5.5 测定将试样溶液和底物先置于3 0水浴中预热约1 0m i n,吸取酶样品溶液2 0 0.0L于3 00.1水浴中的1 0m L试管里,然后加入底物2 0 0.0L,立即计时,并用涡旋振荡器充分混匀,迅速放回水浴中。反应2 0.0m i n后,依次向试管中加入显色剂4.6 0m L,用涡旋振荡器充分混匀。置于室温,重新开始计时。反应4 0.0m i n后,使用分光光度计,在5 2 2n m波长下测定各管溶液的吸光度。同时用缓冲液代替试样溶液进行空白试验。B.2.3.6 结果计算-
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