QB∕T 4572-2021 酵母β-葡聚糖[轻工].pdf
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1、ICS 67.180 CCS X 69 中华人民共和国轻工行业标准酵母。-葡聚糖Yeast p-glucan 2021-05-17发布QB/T 4572-2021 代替QB/T4572-2013 2021-10-01实施中华人民共和国工业和信息化部发布.-QBIT 4572一2021目。昌本文件按照GBIT1.1-2020 标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替QB厅4572-2013酵母葡聚糖),与QB厅4572-2013相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下:a) 增加了酵母葡聚糖原料的酶解测定方法(见6.4); b) 增加了乳制品中酵母葡聚糖的
2、测定方法(附录A)。本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国食品工业标准化技术委员会工业发酵分技术委员会(SACITC64/SC 5)归口。本文件起草单位:中国食品发酵工业研究院有限公司、安琪酵母股份有限公司、凯爱瑞配料贸易(上海)有限公司、珠海天香苑生物科技发展股份有限公司、广西一品鲜生物科技有限公司、食品行业生产力促进中心、光明乳业股份有限公司、石家庄君乐宝乳业有限公司、汤臣倍健股份有限公司、完美(广东日用品有限公司、无限极(中国有限公司、安琪纽特股份有限公司、上海纽崔特健康食品有限公司。本文件主要起草人:陈楠楠、张海波、沈家生、陈雪松、周世伟、李斌、张锋华、贾晓江、魏鲜娥、李晓敏、孙红
3、梅、丁庆波、刘明、邓娟娟、王杰红、康曼曼、廖英扬、吴李娟、贾宏信、刘海荣、郭新光、李珍、郁晓艺、陈结梅、曹文海、张彦。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:一-2013年首次发布为QBIT4572-2013; 一一本次为第一次修订。I QB1T4572一2021酵母-葡聚糖1 范围本文件规定了酵母葡聚糖的术语和定义、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输及贮存。本文件适用于以酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)为主要原料,经过细胞破壁,酶解或不酶解,酸、碱处理,分离提纯,干燥等工序制得的酵母葡聚糖产品的生产、检验和销售。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的
4、规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单适用于本文件。GB!T 191 包装储运图示标志GB!T601 化学试剂标准滴定溶液的制备GB!T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB!T603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB 4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB 4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.10-2016食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄
5、球菌检验GB 5009.3-2016食品安全国家标准食品中水分的测定GB 5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定GB 5009.5-2016食品安全国家标准食品中蛋白质的测定GB 5009.6食品安全国家标准食品中脂肪的测定GB!T6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 7718食品安全国家标准预包装食品标签通则GB 15203食品安全国家标准淀粉糖3 术语和定义3. 1 下列术语和定义适用于本文件。酵母。-葡聚糖yeast p-glucan 来源于酵母细胞壁的以(1,3)-D-葡聚糖为主链,含有萨(1,6)分支的可食用的一种多糖。注:可作为食品或食品配料。4 分子式、相对分子质量及
6、结构式4.1 分子式(C6HlQOS)n, 125运n运25000。QB/T4572一2021相对分子质量4.2 20 0004 000 000 (按2018年国际原子量表)。结构简式4.3 CH2 汇y一OH b凸-(1,3)-D-1tiHli椭-(1,3)-D-丑i萄糖-(1,3)-D-有jji椭要求5 鉴别符合酵母萨葡聚糖的红外光谱特征。应与标准品红外光谱图(图1)一致,具有以下所有特征:一-3419cm-1附近有较宽、较强的吸收峰(糖类的O-H键的伸缩振动吸t&d毒)一-2923cm-1附近有较弱吸收峰(糖类C-H键伸缩振动吸收峰)一-889cm-1附近有较弱吸收峰(糖类P构型特征吸收
7、峰。5.1 叫:叫. 叫. 叫. 叫;叫4叫叫-Jbmu:中,lw叫ls-d(法)M时棋烟缸汩1x) -m m 、长被2xl 在XXl图1酵母自-葡聚糖标准品的红外光谱图感官要求应符合表1规定。5.2 2 5.3 理化指标应符合表2a乳制品中酵母5.4 污染物限量5.5 微生物应符合表3j主n为同一批次产接受水平的限量值M为菌6试验方法6. 1 一般要求QB1T4572一2021表1感官要求见杂质单位为克每百克可本方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合GBrr6682中水的规格。所用试剂,在未注明其他规格时,均指分析纯。分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品,在没有注明其Q
8、B/T4572一2021他要求时,均按GBIT601、GBIT602、GBIT603的规定制备。6.2 感官6. 3 鉴别称取5g样品却至400C,除去脱脂后样品。6. 3. 2 测定采用澳化饵压成透明状片剂,对6.4.1.1 原理j主:在酵母-葡聚糖水解过程中,导致检测结果中酵母6.4.1.2.1 6.4.1.2.2 离柱。6.4.1.2.3 进样。6.4.1.3 6.4. 1.3. 1 6.4.1.3.2 6.4.1.3.5 6.4.1.3.6 匀。4 下加压成型制的分98 .C100 .C干燥2hQB厅4572-20216.4.1.4 样品处理称取0.40g (精确至0.001g)样品或
9、酵母葡聚糖对照晶(6.4.1.3.5)至20mL带螺帽的试管中,加入6.0mL盐酸(63.2),盖紧振荡,得到均一的悬浮液。将试管放入30C7l浴中保持45min(每15 min用涡旋混合器振荡混合1次)。然后将悬浮物转移到200mL螺旋盖耐热瓶中,用100mL120 mL的水,分几次洗涤试管,洗涤液并入带螺旋盖耐热瓶中。将带螺旋盖耐热瓶放入高压灭菌锅,121c, 60m血。取出后冷却至室温,用氢氧化铀溶液(6.4.1.3.6)将溶液pH调至67,随后转移至200mL容量瓶中,以水(6.4.1.3.1)定容,并混匀。使用0.22m孔径的醋酸纤维素膜过滤备用。6.4.1.5 标准曲线的绘制分别吸
10、取葡萄糖标准榕液(6.4.1.3.4)2.0 mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL到10mL容量瓶中,用水(6.4.1.3.1)定容并摇匀,得到葡萄糖浓度分别为400mgIL、800mgIL、1200mgIL、1600mgIL、2000mgIL的系列标准溶液。在6.4.1.2.3色谱条件下进样20L,根据色谱峰面积和葡萄糖浓度绘制标准曲线。6.4.1.6 样品及对照晶的测定在同样的色谱条件下,将处理后的样品和酵母葡聚糖对照品溶液分别注入色谱仪中,记录各色谱峰的保留时间和峰面积。用葡萄糖标准溶液的色谱峰保留时间定性,用葡萄糖标准溶液色谱峰的峰面积来定量。6.4.1.7 结果计算
11、酵母葡聚糖的含量按公式(1)计算:. x0.2xl00 X. = -1-_.- -xO.9xF, . (仆m1 xl000 式中:Xl 一一样品中酵母葡聚糖的含量,单位为克每百克(g/100g); Cl 一一根据样品溶液的峰面积,通过标准曲线计算得到的样品溶液的葡萄糖的含量,单位为毫克每升(mgIL);0.2 一一样品或标准品酵母葡聚糖处理后定容的体积,单位为升(L);100一一百分含量转换系数:ml 一一称取样品的质量,单位为克(g);1000一一毫克与克的转换系数:0.9 一一将葡萄糖换算成酵母葡聚糖的系数:Fl 一一样品酸水解中葡萄糖被破坏造成结果偏低的经验补偿系数。Fl值按公式。)计算
12、:F:=乓x(100-W)xm2xl000. (2) a乌x0.2xl00 xO.9式中tPl 一一一酵母 葡聚糖对照品的纯度(依据试剂厂家提供的检测报告),单位为克每百克(g1100 g); W 一一酵母-葡聚糖对照品的水分(依据试剂厂家提供的检测报告),单位为克每百克5 QBIT 4572 - 2021 (gl100 g); m2 一一称取酵母葡聚糖对照品的质量,单位为克Cg);1000一一毫克与克的转换系数:C2 一一根据酵母葡聚糖对照品溶液的峰面积,通过标准曲线计算得到的对照品溶液的葡萄糖的含量,单位为毫克每升(mgIL);0.2 一一样品或酵母葡聚糖对照品处理后定容的体积,单位为升(
13、L);100 一一百分含量转换系数:0.9 一一将葡萄糖与酵母萨葡聚糖的换算系数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留至整数。6.4.1.8 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的5%。6.4.2 酶解法6.4.2.1 原理酵母-葡聚糖经氢氧化饵溶液凝胶化后,通过溶壁酶、萨(1,6)-葡聚糖酶、-(1,3)-葡聚糖酶和萨葡萄糖昔酶多次酶解,最终水解为葡萄糖。葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下催化葡萄糖氧化,生成D葡萄糖酸牛内脂和过氧化氢。过氧化氢经过氧化物酶CPOD)催化,与4-氨基安替比林和对经基苯甲酸生成红色眼亚胶(GODPO
14、D法。利用分光光度计在510nm波长处测定酿亚肢吸光度,计算试样中葡萄糖含量,进而计算得到酵母萨葡聚糖的含量。6.4.2. 2 仪器和设备6.4.2.2.1 涡旋混合器。6.4.2.2.2 恒温水浴锅。6.4.2.2. 3 分光光度计。6.4.2. 3 试剂和溶液6.4.2.3.1 酵母萨葡聚糖对照品:己知纯度,且纯度二三70%。6.4.2.3.2 溶壁酶:酶活力二三200uJmg。6.4.2.3.3 科(1,6)-葡聚糖酶:酶活力2uJmg。6.4.2.3.4(1,3)有聚糖酶和萨葡萄糖昔酶混合酶:酶活力分别注100uJmL和20uJmL。6.4.2.3.5 葡萄糖系列标准溶液:分别量取0.
15、6mL、1.0mL、2.5mL、4.0mL和5.0mL葡萄糖标准溶液(6.4.1.3.4)至10mL容量瓶中,加水定容并混匀。其葡萄糖浓度分别为0.12 gIL、 0.20gIL、 0.50gIL、0.80 gIL、1.00gIL。6.4.2.3. 6 氢氧化伺溶液(2mol/L)称取11.2g氢氧化饵,水充分溶解后,定容至100mL,混匀后,40C冷藏保存。6.4.2.3.7 氢氧化纳溶液c1mol/L) :称取4.0g氢氧化锅,水充分溶解后,定容至100mL,并混匀。6.4.2.3.8 乙酸纳缓冲溶液A(0.2 mol/L) :分别称取5.25g无水乙酸纳和2.16g冰醋酸至400mL水中
16、,氢氧化铀溶液(6.4.2.3.7)或冰醋酸调节pH至5,水定容至500mL,井混匀。6.4.2.3.9 乙酸制缓冲溶液B(1.2 mol/L)分别称取4.96 g无水乙酸纳和32.32 g冰醋酸至400mL 水中,氢氧化纳溶液(6.4.2.3.7)或冰醋酸调节pH至3.8,定容至500mL,并混匀。6 QBrr 4572-2021 6.4.2.3.10 缓冲溶液C(pH7.5):溶解1.212g三起甲基氨基甲烧CTris)、1.169g氯化纳以及0.416gEDTA四纳二水合物于90mL纯净水中。用盐酸或氢氧化纳溶液(6.4.2.3.7)调节pH至7.5,最后水定容至100mL,并混匀。6.
17、4.2.3.11 溶壁酶溶液C10ul.L)移取适量溶壁酶至含有10%缓冲溶液C(6.4.2.3.10)中,使溶璧酶最终浓度为10ulJ1.L(-150C条件下可保存1年,不应反复冻融)。6.4.2.3.12 (1,6)-葡聚糖酶溶液:溶解适量(1,6)-葡聚糖酶(6.4.2.3.3)于乙酸纳缓冲溶液A(6.4.2.3.8)中,终浓度为1ul300J1.L (悬浊液,-150C条件下可保存60天,不应反复冻融)0 6.4.2.3.13 混合酶溶液:移取适量(1,3)-葡聚糖酶和葡萄糖昔酶混合酶(6.4.2.3.4),加入适量乙酸纳缓冲熔液A(6.4.2.3.8)稀释混匀,使最终浓度分别为20u
18、lmL和4ulmL (使用期间冰浴保存,当天使用:未使用的可以-150C冰冻保存2年,不应反复冻融。6. 4. 2. 3. 14 GODPOD缓冲液:向200mL容量瓶中加入160mL左右水,随后分别加入27.2g磷酸二氢饵,8.4 g氢氧化纳和6.0 g对提基苯甲酸,搅拌使其完全溶解后,调节pH至7.4。最后加入0.8g叠氮化锅,溶解后加水定容。40C保存,有效期4年。稀释:量取GODPOD缓冲液48mL至1000mL容量瓶中,加水定容并混匀,现用现配。6. 4. 2. 3. 15 GODPOD混合酶粉末:葡萄糖氧化酶(二400u)、过氧化物酶(注1000u)和4-氨基安替比林。6. 4.
19、2. 3. 16 GODPOD工作液:移取20mL稀释后的缓冲液(6.4 .2.3.14)至1.0g混合酶粉末(6.4.2.3.15) 中并轻轻晃动至充分溶解。再加入剩余稀释后的980mL缓冲溶液(6.4.2.3.14),避光4C保存,有效期3个月(-20C保存,有效期12个月,不应反复冻融。6.4.2.3. 17 6.4.2.3.1O6.4.2.3.16也可使用商品化试剂或试剂盒。6.4.2.4样品处理称取样品或对照品(6.4.2.3.1)15mg20mg (精确至0.001g)至离心管中,加入O.4mL冷的氢氧化饵溶液(6.4.2.3.6),冰水浴涡旋20m血,冰水浴期间多次短时涡旋至全部
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