NY∕T 3756-2020 蚕豆品种真实性鉴定 SSR分子标记法[农业].pdf
《NY∕T 3756-2020 蚕豆品种真实性鉴定 SSR分子标记法[农业].pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《NY∕T 3756-2020 蚕豆品种真实性鉴定 SSR分子标记法[农业].pdf(18页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、. ICS 67 23 NY 中华人民共和国农业行业标准蚕豆品种真实性鉴定SSR分子标记法NY /T 3756-2020 Faba bean Vicia faba (L.) Lam. variety genuineness identification一SSR-based methods 2020 -11- 12发布2021-04-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY / T 3756-2020 目次lj言.川.11 l 也网2 规范nJ1厅IX1I3 术f11:主义. 4封(jO各i-.2 5原J1I!.2 6 检测J!:来. . 2 7 仪加设街、试剂刷部液配制8检拍1111f,Ui
2、 9 生fIJ在i十31与友/J10生, 1*报fif.7附及八(资料圳机.j,Jk) 浴1位阿tIil怀J,Jk I3C资料性1f,Jk)12对SSHI物怀P叫包装光IJI物分tIlJn在 . 11 附术CC资料卡l怀J,R)忡位变异扩.t)-l段衍,也(毛tlll位也泳)附录I)C资料性IljLJk) 参照样A111名单 . . 11 NY / 1 3756-2020 本标lfi111仑同农作物种子标IfI化技术委员会(SAC/TC37)旧。*标1(1起草单位企同农业技术tll广服务中心、中同农业科学院作物科学忻究所、川州省利:子价却!局、Jj向省种子价Jll!站。*标1(1;斗2f起.1
3、人古芳、宗纠l烧、赵主tt宗、杨涛、张力利、11(红岩、支|气振、季一111、刘荣、仰友兰、由此仰、包J己忠、任写Y!0 u NY 11 3756-2020 蚕豆品种真实性鉴定SSR分子标记法范围本标1UJt-了和JJIISSR分子怀icrk进行蚕豆Vici1/,(1. ) Lam. J常规川利性检测的术i:fi布l义.缩赂h.h;-i卫I!.检训I)j案.仪器设备、试剂刷济液削i!iJ检视IJ守主, i*.1价与-&J;,fM占月11 1斗。本标lfI适川于蚕豆古j,;ftIJ注:HI!J帝Hll川非IJ;实性身份鉴定.-1、适JII于实jJ).tl派:品种(cssc川ialde-rived
4、 varicly,巳DV)的鉴泣。2 规范性引用文件下列文件;:分某一作物/u*,fl的一套缺少数14、(I)1物。NY /1 3756-2020 3.8 扩展寻|物组合cxtend创primerpancl 411助 :J;怕检测的一套1)I物。4 缩赂语下9)封iinl岛识适)11寸本文l。bp币,U)H(hilsc pairl CTAI3, 1六炕基二Ijl基汲化饭Ccetyltrimethylammoniumhromidc DN八脱饥核糖核阪(deoxyribonuclcicacid) dNTls,Jj且低核相1,lf核忏三磷服(dcoxy-rihonucleosidc lriphosp
5、hi:llC) PAG巳,聚丙烯毗l胶凝胶I且泳(polyacrylamidegel cleclrophoresisl PCR,聚合前链式反应(polymerasechain reaction) SSR简单茧,复Fr-;Y(simplesequcnce repeatl T叫lIi耐热DNA聚合附(Taq1)-1八polymerasel5 原理T戒i由E豆4不二刊|例日叫),品IV川j,;f非刹种|卡t的J拈t击L肉t组fl1布t宇F在li汗j:能i虑E够l四Ht川叫l吁以i迦且吕i.立过过二4正t从4仇l代表农l性的试F驹怆丰样l品t叶l扭捉斗H取lI.DN八,J川川|川IS岱SR,;川I!物
6、吕胁进行扩附何丰和H电泳检i测则l山j川;来.怀肉IJl此t.叮以和利l川扩jm问阳川l段太/)小l卜、叫斗、|问口司l七监革e3分卡川d山川ll忡I似a拚圳1斗;SSR标i记己检训训测1)服J片束;且l理理1,采j川川|川1SSR让j川川l扣川 4物B脱协3克却通过与何标、叫lfI样1J仙A1hV川Id山tIh1飞1比较较e或与SSR j珩i甘?纹数jj,i;I:1;纠1井刘.)忖l护问A斗jLf行:比1坠对.t(的白方式川,11Jl:ill行验iETI)身份鉴右。兰IfUJ的11:依据SSR位,Zl;:f-数1:1,(,i可以!川平l 3性身份鉴定Wjj,;被检SSR点JG2i:异l原则进
7、行筛盗布l鉴定。6 检测方案6.1 通则x.nJ:tl,鉴定.ql物、价i抽l斗台、样JlttI状况不同.:J-J:检测结果的1ft!印度、稍确j血可能珩所小1,;)0 .!.依tIfi-远I检il!l)H的的原则.统筹考虑检测)i!t快平11检测能力,选定适宜的检测、iLf、样品状况.illl J相j恒的枪il!l)h浆。:(r:i#H;tIJ)条卡|下,合成i韭J萃的:H物,按照确定的检测、Ff?对试验样川校DNAJJurx、PCR扩州、电泳、数品ij分析。也lJ(进行检测。仪)i!.i 1! ,Jdj报检测结巢,检测拟侍应11二Iy)检测Jr来所选择的;,在11向检测绊1)1占的关饱伯也
8、。DN A j,lJjj(、PCR扩增布lll!.泳的技术条例安,1.在适l主检测Flf巾和l不LE时iJ检测股irl:(I lj JJ下,j1i !ff检圳1)乎行的.求.允:Fx.J水标斤UI规定作适当训艳。6 2 检测平台6.2. 1 品种具实何一验iEr采用变nPAGE fUU量也泳或者毛细管电泳.j在1日J-II!.泳板上比较试验样,I,M,币H样,u,.!J)TIJ与标H样lift指纹U:xLli实.tt身份鉴定江采用毛当111,rl!.泳。和JmSSR指纹数据比对平行进行接应。6 2. 2 XOJ J二试验样品数idi较多的,可将m织iVfJ.i仪、DNA向动提坝、IHIJ移液竹
9、,!ili、:jI!i iIT PC R扩增仪、DNA分析仪ill行组合.以提高检测的综什放,在。6. 3号|物6.3. 1韭12X、JSSR可|物作为,f.,1I实U!y.v.f:,fll身份鉴定的引物.H体见,&1。2 NY /1 3756-2020 表1核心寻|物信息扩展引物核心引物编;.J I物么你FM01 旦、11川052FM02 s:飞RJ:l106 FMO:1 气与R1 0911I刑1011SSR12080 FM05 白1117991FM06 1 ;STI81 a FM07 FM08 FM09 引物1 iii.t1行利于检测实施a) 检测1t讯悉J!J侦fll检测技术的知l U启
10、l技能:b) JMJ仪指与Ji!J IJ的技术机1I)1;lc,)j已经过定JUjgfl:护、挑1f1l校fi: c) 攸用适当匀级的试iflJi、;反附处州的耗材:d) 使用校ifI检视rJ生8*评定的适:R参!(!,.rl 0 GB/ T 3543,2的7 仪器设备、试剂和溶液配制7,1 仪器设备7. 1. 1 DNA提取高速F令冻IAI心相L;j(附锅、紫外分);)(;J立计、酸!主i十、移i1.*、主11织rf哥哥仪匀。3 NY 11 3756-2020 7.1.2 PCR扩增PCR书.J竹仪、移HN匀。7. 1. 3 电泳7.1.3.1 变性PAGE垂直板电泳li:.) 11也泳仪、
11、11&11饭111泳袖.&1I11J.除Ilffl1、胶片观察灯、水、|报床、数Jf相机或凝胶j戊像系统、移液*匀。7.1.3.2 毛细管电泳DNA分析仪匀。7.1.4 其他器具微:bt移液aN、IIJ.子天、F、内Jli灭悄俐.r1J.热恒IJIll鼓风r:以在i、JII热磁力搅Ji?N、冰箱匀。7. 2试剂7.2. 1 DNA提取;但纸、发乙烯11比111:皖舰130(Polyvinyl-pyrrolidone,PVl斗、|六炕基一rp.!;l;淡化饺(CctylTricthyl Ammonium I:lromidc. CTAI:l)、化圳、乙二胶州乙般(1二thylenediamine
12、let raaCC1c aCd, ED丁A)、一10111基氨基IJI炕(Trishyclroxymcthyltlminomcthane, Tris)、R生iiJ,乙醉(-mercaptoethonol )、仿、异成部、乙醉、盐险、级斗i化俐。7.2.2 PCR扩增校板DNA、)I物、dN丁Ps.l0X级)1液、丁qfj、ddH,().Ji;.(f 2XTal! Mix反应混合液。7. 2 3电;在7.2.3.1 变性PAGE垂直板电泳f!Ht. ttJrJ (八crylamide)、N.N、1f-1P l击双丙烯股股(Methylcne-his-acrylamidc)、尿素、去t子Ijltt
13、tJ恢( Formamidc)、乙二j以I!I乙阪(EDTA).11汪阶LW主romophcnolbluc)、二月1;在山、-:1?基组桂IJI炕门口约)、削111堂、乙醉(95 % ) ;fi1I1i1:烧(Binclingsilane)、剥liJ炕(Rcpelsilane)、过W:UI主饭、冰f.酸、四IJIJ,乙二版(Tctramct hylct hylcnccliaminc. TEMI:D)、旅i11i水、元/C乙ni;!、未离子水、!inJi恨、吉亚氧化倒、乙一股川乙恨一俐(1:1)丁ANat引力。)、可IA、DNA分子垃标削。7.2.3.2 毛细管电泳, j.f业川的DN八分析仪型
14、号相1肌肉己的分Tz.胶、分子;,t:内斗小、去Fi子IP/lII:J段、IIJ.jj(级11rj1M :1; 0 7. 3 溶液配和lDNI挺lf、PCRJJ州、也泳、银染的浴液参!ft附法A规定的要求ill1nlc;俐,J9i川试剂均为分析纯。JI:剂配H川IJi川水JH合(;1当11、6682规定的级水的安求J-t,l似染浴浓的配制可以1!lfII符介7级;Jdlg;)1 JI至液体呈孔白色.12000r/ min Tt心15mino 11)( U,il移至新的121心毡巾,JII人忡体积I冷的95%X;水乙醉.jw!倒括:匀J;丁h立于一200C冰箱静引:10min.loC、12000
15、 r/ min :心10mino 飞U,i?他.70%乙阿1;( i 7.凡2次转人1.5 m 1. t.i心价中,臼然F蚁。将l 燥的I)NA醉于10011. O . 1 X TI:级IIf液中.检由!IJ浓!立)1稀料到10ng/L50 ng/,L,Zn. 4C衍JlJo注利JH利7-,tJJIW、H株rJJ撒IIt.)t归lt;b&:?目jwrDN 均可.8.12 试剂盒法4 NY /1 3756-2020 边m白SSR标lLI!(I(j商业试如11.;:,)1经扮11合格后使j门。DNA捉llj(jJ讼,按照却J:ftt旺供的使川1说191ill钉操作.注DN挺lfx可选8.1. 1
16、、且1.2或其他i占)11叮RjtJ竹质tlt.术的方法.8. 2 号|物合成i主JH变性PAGt:垂1板也泳儿;Ai介成j;)l!.,; I物。i在HI荧光毛细管,1,泳,lr;:.I:仁由于或下游JI物的5剧iI!x3y指标1己与毛当11竹也泳仪且;:M;fjJ I! 110庄l相肌肉E的荧光染料。具体jl物分m1fi息参.il.11J.tK B。8.3 PCR扩增8.3. 1 反应体系PCR扩用反应体系的总体积和封l分的终浓j主参J!(! 2进行jl,1,各m分!可以依括:试扮条11不1,;1作剧11 M i)Ijl煌。如l呆炭1lOX如l液中们i圈圈E回E画也1,酬,丹1nt;fjHI
17、);凶水桥代;如I)lH!l!JH2 X 叫Mix反应混合jb) c) 终延11/J).Wi产物:F 8.4 扩增产物分离8.4. 1 变性lAGE垂直板8.4. 1. 1 制胶能洗涤灵!TWi71.仔细l反复将h j七35个干。将丑kJli.i扳水、11.i次丘.JTJ95%乙).;(纵向榄IJ各擦拭板而3汰。5m咽1归来拭饭而3次(擦拭方式向L),I惊忧5 tnit甘百备)IJ0 ll fHl1 Jt背板,乎放回(干,)刊95%乙部纵向横向各擦拭背板;JIll)不超过10问将凝l除饭放主,:f !lJ. )i 袱11,仍轩,指韵,111至LHJ;m:纹。衍;rW纹r!1I忻们l民IU.迅边
18、iIrliC;J;主液1:1;.E)吕2min.然后在双茶水巾1队:2 min;lUIl凝j快板空ji下1,1然IU;(1:.放在胶片观察J上观然i及生占WA内!(保符。注,I.j定械、染已椒、双,水扁1!il.W i/ (IJ HlI此,可依也ilJll阪数hl.fll火小部n自.以设过胶I/liJJL 84.2 毛细管电泳8.4.2. 1 将按照市IJttif(1定的主Il介)I物(1!lI也茨光)I物分组包、参!tll竹马k13) .匀体积i仅|口J-gr合引物的小同lk.Y:.标iL(fJ扩附产物,充分iI.e匀。从l.e合i在1吸取lL.)JII入到DNA分析仪专用96孔|样板Loj
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 农业 NYT 3756-2020 蚕豆品种真实性鉴定 SSR分子标记法农业 NY 3756 2020 蚕豆 品种 真实性 鉴定 SSR 分子 标记
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【曲****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【曲****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。