WS∕T 677—2020 人群维生素D缺乏筛查方法(卫生).pdf
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1、ICS 11.020 C 55 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准 WS/T 6772020 人群维生素 D 缺乏筛查方法 Method for vitamin D deficiency screening 2020-05-06 发布 2020-11-01 实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发 布 WS/T 6772020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准起草单位:中国疾病预防控制中心营养与健康所、宁波市疾病预防控制中心、深圳市慢性病防治中心、深圳市计量质量检测研究院、南京医科大学、中粮营养健康研究院。 本标准主要起草人:杨
2、丽琛、杨晓光、胡贻椿、金米聪、杨国武、周继昌、汪之顼、贾健斌、王俊、陈晓红、张协光、莫俊銮、毛德倩、付志成、王睿、丁叶、周明、陈竞、张森。 WS/T 6772020 1 人群维生素 D 缺乏筛查方法 1 范围 本标准规定了人群维生素D缺乏和不足筛查的指标、参考判定值和检测方法。 本标准适用于人群维生素D营养状况的判定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规
3、格和试验方法 WS/T 225 临床化学检验血液标本的收集与处理 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 25-羟基维生素 D 25-hydroxyvitamin D;25(OH)D 血液中维生素 D 的主要循环形式,稳定性好,是公认的评价人体维生素 D 营养状况的可靠指标,主要包括两种形式:25(OH)D2、25(OH)D3,其中 25(OH)D3是血液中维生素 D 的主要存在形式。 3.2 维生素 D 缺乏 vitamin D deficiency 当人体血清(或血浆)25-羟基维生素 D 含量低于缺乏的参考判定值时,可判定为维生素 D 缺乏。 3.3 维生素 D 不足 vi
4、tamin D insufficiency 当人体血清(或血浆)25-羟基维生素 D 含量低于正常人群的参考判定值,但高于缺乏参考判定值时,可判定为维生素 D 不足。 4 人群维生素 D 营养状况判定指标及参考判定值 人群维生素D营养状况判定指标及参考判定值见表1。 WS/T 6772020 2 表1 人群维生素 D 营养状况判定指标及参考判定值 判定指标 正常 不足 缺乏 血清(或血浆) 25-羟基维生素D含量 ng/mL nmol/L ng/mL nmol/L ng/mL nmol/L 20 50 1220 3050 12 30 5 测定方法 5.1 血液标本的采集与保存 按附录A规定的方
5、法进行。 5.2 第一法:液相色谱串联质谱法 按附录B规定的方法进行。 5.3 第二法:化学发光免疫法 按附录C规定的方法进行。 5.4 第三法:酶联免疫法 按附录D规定的方法进行。 WS/T 6772020 3 A A 附 录 A (规范性附录) 血液标本的采集与保存 A.1 标本采集 A.1.1 血液标本的采集:空腹静脉血,取血方法依据 WS/T 225 以及检测方法的要求采集空腹静脉血 1mL。 A.1.2 采血管:根据所需血清或血浆,使用不同采血管分装。 A.2 血清、血浆保存 标本于2 8 可稳定7 d,-20 可稳定12个月。若标本不能及时检测,建议适量分装后于-70 以下存放标本
6、,仅一次冻融。 WS/T 6772020 4 B B 附 录 B (规范性附录) 液相色谱串联质谱法 B.1 原理 血清(血浆)中的25(OH)D2和25(OH)D3经甲醇/乙腈沉淀蛋白,采用正己烷萃取,氮气吹干,用初始流动相复溶,使用液相色谱法分离,串联质谱多反应监测模式(MRM)检测,同位素内标法定量,该方法可以分别测定25(OH)D2和25(OH)D3。 B.2 试剂和溶液 除非另有说明,本方法所有试剂均为分析纯,水符合GB/T 6682中一级用水规定,溶液按照GB/T 603配制。 B.2.1 试剂 B.2.1.1 25(OH)D2标准品(C28H44O2,CAS:21343-40-8
7、):纯度98%或有证标准物质。 B.2.1.2 25(OH)D3标准品(C27H44O2,CAS:19356-17-3):纯度98%或有证标准物质。 B.2.1.3 同位素内标2H3-25(OH)D2标准品(C28H412H3O2,CAS:1217467-39-4):纯度98%。 B.2.1.4 同位素内标2H3-25(OH)D3标准品(C27H412H3O2,CAS:140710-94-7):纯度98%。 B.2.1.5 甲醇(CH3OH):色谱纯。 B.2.1.6 正己烷(C6H14):色谱纯。 B.2.1.7 甲酸(HCOOH):色谱纯。 B.2.1.8 牛血清白蛋白(BSA):纯度98
8、%。 B.2.1.9 氮气(N2):纯度99.9%。 B.2.1.10 甲酸-水溶液:0.1%。 B.2.1.11 甲酸-甲醇溶液:0.1%。 B.2.1.12 乙腈(CH3CN):色谱纯。 B.2.1.13 BSA牛血清白蛋白水溶液:1%。 B.2.1.14 沉淀剂:甲醇+乙腈(1+1)。 B.2.1.15 标准储备溶液(10 g/mL):分别称取25(OH)D2和25(OH)D3标准品1 mg(精确至0.01 mg)于2个100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。此溶液中25(OH)D2和25(OH)D3的浓度为10 g/mL。溶液转移至试剂瓶中后,-20 下避光保存,备用。 B.2.
9、1.16 同位素内标标准储备溶液(10 g/mL):分别称取同位素内标2H3-25(OH)D2和2H3-25(OH)D3 1 mg(精确至0.01 mg)于2个100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。此溶液中2H3-25(OH)D2和2H3-25(OH)D3的浓度为10 g/mL。溶液转移至试剂瓶中后,-20 下避光保存,备用。 B.2.1.17 标准系列溶液:分别准确移取25(OH)D2(10 g/mL)和25(OH)D3(10 g/mL)5 L、10 L、25 L、50L、125 L、250 L和500 L于7个10 mL容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度。此系列溶液的25(OH)D2
10、和25(OH)D3的浓度为5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、125 ng/mL、250 ng/mL和500 ng/mL。 B.2.1.18 混合同位素内标溶液(100 ng/mL):分别准确吸取同位素内标2H3-25(OH)D2储备溶液(10 WS/T 6772020 5 g/mL)和2H3-25(OH)D3储备溶液(10 g/mL)各100 L于10 mL容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度。此溶液的同位素内标2H3-25(OH)D2和2H3-25(OH)D3的浓度均为100 ng/mL。溶液转移至试剂瓶中后,-20下避光保存,备用。 B.2.2 仪器和设备
11、B.2.2.1 分析天平,感量:0.0001 g。 B.2.2.2 分析天平,感量:0.00001 g。 B.2.2.3 液相色谱-串联质谱联用仪。 B.2.2.4 氮吹仪或真空离心干燥仪。 B.2.2.5 离心机:离心力12000g。 B.2.2.6 旋涡混合器。 B.2.2.7 移液枪或移液器。 B.3 分析步骤 B.3.1 样品制备 取血清(血浆)样品200 L至2 mL离心管中,加入20L混合同位素内标溶液,涡旋振荡30 s。加入400 L沉淀剂(甲醇+乙腈,1+1),室温下涡旋振荡混匀30 s;加入1.2 mL正己烷,室温下涡旋振荡5 min,然后在4 和离心力大于12000 g下离
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