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肺结核病原学检查方法及意义.ppt
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1、肺结核病原学检查方法及意义肺结核病原学检查方法及意义肺结核病原学检查方法及意义肺结核病原学检查方法及意义 在我国,肺结核的发病率呈缓慢逐年下在我国,肺结核的发病率呈缓慢逐年下在我国,肺结核的发病率呈缓慢逐年下在我国,肺结核的发病率呈缓慢逐年下降趋势,但仍显著影响着人民的健康,降趋势,但仍显著影响着人民的健康,降趋势,但仍显著影响着人民的健康,降趋势,但仍显著影响着人民的健康,及时、准确的诊断和治疗尤为重要。目及时、准确的诊断和治疗尤为重要。目及时、准确的诊断和治疗尤为重要。目及时、准确的诊断和治疗尤为重要。目前,肺结核的病原学诊断方法多种多样,前,肺结核的病原学诊断方法多种多样,前,肺结核的病
2、原学诊断方法多种多样,前,肺结核的病原学诊断方法多种多样,包括细菌学、分子生物学、血清学及免包括细菌学、分子生物学、血清学及免包括细菌学、分子生物学、血清学及免包括细菌学、分子生物学、血清学及免疫学等等,但并非阳性即可明确诊断,疫学等等,但并非阳性即可明确诊断,疫学等等,但并非阳性即可明确诊断,疫学等等,但并非阳性即可明确诊断,下面让我们一起来复习一下肺结核病原下面让我们一起来复习一下肺结核病原下面让我们一起来复习一下肺结核病原下面让我们一起来复习一下肺结核病原学检查的方法及意义。学检查的方法及意义。学检查的方法及意义。学检查的方法及意义。一、细菌学一、细菌学一、细菌学一、细菌学 痰结核菌检查
3、阳性是结核病诊断的痰结核菌检查阳性是结核病诊断的痰结核菌检查阳性是结核病诊断的痰结核菌检查阳性是结核病诊断的“金金金金标准标准标准标准”,但其检出率低(约,但其检出率低(约,但其检出率低(约,但其检出率低(约30%-50%30%-50%),),),),与肺部病变严重程度相关,病变广泛、与肺部病变严重程度相关,病变广泛、与肺部病变严重程度相关,病变广泛、与肺部病变严重程度相关,病变广泛、有空洞者阳性检出率高。痰菌阳性,对有空洞者阳性检出率高。痰菌阳性,对有空洞者阳性检出率高。痰菌阳性,对有空洞者阳性检出率高。痰菌阳性,对于肺部有病灶者可确诊肺结核且提示结于肺部有病灶者可确诊肺结核且提示结于肺部有
4、病灶者可确诊肺结核且提示结于肺部有病灶者可确诊肺结核且提示结核具有活动性;对于肺部无结核病灶者核具有活动性;对于肺部无结核病灶者核具有活动性;对于肺部无结核病灶者核具有活动性;对于肺部无结核病灶者提示气管支气管结核可能性极大,但尚提示气管支气管结核可能性极大,但尚提示气管支气管结核可能性极大,但尚提示气管支气管结核可能性极大,但尚需进一步检查确诊。痰菌阴性,尤其是需进一步检查确诊。痰菌阴性,尤其是需进一步检查确诊。痰菌阴性,尤其是需进一步检查确诊。痰菌阴性,尤其是伴有结核病典型临床表现者,不能除外伴有结核病典型临床表现者,不能除外伴有结核病典型临床表现者,不能除外伴有结核病典型临床表现者,不能
5、除外肺结核的存在。肺结核的存在。肺结核的存在。肺结核的存在。1.1.直接镜检法直接镜检法直接镜检法直接镜检法 直接镜检法即涂片法,可采用萋直接镜检法即涂片法,可采用萋直接镜检法即涂片法,可采用萋直接镜检法即涂片法,可采用萋-尼抗尼抗尼抗尼抗酸染色和荧光染色两种方法,具有快速、酸染色和荧光染色两种方法,具有快速、酸染色和荧光染色两种方法,具有快速、酸染色和荧光染色两种方法,具有快速、简便等优点,后者不需油镜,视野范围简便等优点,后者不需油镜,视野范围简便等优点,后者不需油镜,视野范围简便等优点,后者不需油镜,视野范围广(可在低倍显微镜下筛选检查,高倍广(可在低倍显微镜下筛选检查,高倍广(可在低倍
6、显微镜下筛选检查,高倍广(可在低倍显微镜下筛选检查,高倍显微镜下确认),敏感性高于前者,但显微镜下确认),敏感性高于前者,但显微镜下确认),敏感性高于前者,但显微镜下确认),敏感性高于前者,但容易出现假阳性,因此,两者结合可避容易出现假阳性,因此,两者结合可避容易出现假阳性,因此,两者结合可避容易出现假阳性,因此,两者结合可避免检查过程中的假阴性和假阳性。我国免检查过程中的假阴性和假阳性。我国免检查过程中的假阴性和假阳性。我国免检查过程中的假阴性和假阳性。我国结核病诊断细菌学检验规程规定不同染结核病诊断细菌学检验规程规定不同染结核病诊断细菌学检验规程规定不同染结核病诊断细菌学检验规程规定不同染
7、色法的定量标准不同,见表色法的定量标准不同,见表色法的定量标准不同,见表色法的定量标准不同,见表1 1。涂片阳性并非一定为结核分枝杆菌,也可以是非结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌,奴卡菌、放线菌抗酸染色可呈弱阳性。涂片阴性亦不能排除肺结核,连续检查3次及以上,可提高检出率。2.2.分离培养法分离培养法分离培养法分离培养法 敏感性和特异性均高于直接镜检法,因敏感性和特异性均高于直接镜检法,因敏感性和特异性均高于直接镜检法,因敏感性和特异性均高于直接镜检法,因可直接获得菌落,便于与非结核分枝杆可直接获得菌落,便于与非结核分枝杆可直接获得菌落,便于与非结核分枝杆可直接获得菌落,便于与非结核分枝杆菌鉴别,亦
8、可进一步测定药物敏感性。菌鉴别,亦可进一步测定药物敏感性。菌鉴别,亦可进一步测定药物敏感性。菌鉴别,亦可进一步测定药物敏感性。分离培养法可采用改良罗氏和分离培养法可采用改良罗氏和分离培养法可采用改良罗氏和分离培养法可采用改良罗氏和BACTECBACTEC法,前者为国内最常用方法,但耗时长,法,前者为国内最常用方法,但耗时长,法,前者为国内最常用方法,但耗时长,法,前者为国内最常用方法,但耗时长,一般需培养一般需培养一般需培养一般需培养4-64-6周;后者可将时间缩短至周;后者可将时间缩短至周;后者可将时间缩短至周;后者可将时间缩短至2 2周左右,培养阳性后周左右,培养阳性后周左右,培养阳性后周
9、左右,培养阳性后4-64-6天即可完成药物天即可完成药物天即可完成药物天即可完成药物敏感性测定。敏感性测定。敏感性测定。敏感性测定。二、分子生物学二、分子生物学二、分子生物学二、分子生物学 1.1.聚合酶链反应(聚合酶链反应(聚合酶链反应(聚合酶链反应(PCRPCR)技术)技术)技术)技术 PCR PCR可以将标本中微量的结核菌可以将标本中微量的结核菌可以将标本中微量的结核菌可以将标本中微量的结核菌DNADNA扩增,短时间内扩增,短时间内扩增,短时间内扩增,短时间内DNADNA片段的拷贝数可扩片段的拷贝数可扩片段的拷贝数可扩片段的拷贝数可扩增增增增105105倍以上,是一种快速、敏感、特异倍以
10、上,是一种快速、敏感、特异倍以上,是一种快速、敏感、特异倍以上,是一种快速、敏感、特异的检查方法,但仍存在假阴性和技术性的检查方法,但仍存在假阴性和技术性的检查方法,但仍存在假阴性和技术性的检查方法,但仍存在假阴性和技术性问题。其优势表现为可快速区分结核分问题。其优势表现为可快速区分结核分问题。其优势表现为可快速区分结核分问题。其优势表现为可快速区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌,提高菌阳性枝杆菌和非结核分枝杆菌,提高菌阳性枝杆菌和非结核分枝杆菌,提高菌阳性枝杆菌和非结核分枝杆菌,提高菌阳性和菌阴性肺结核的检出率;劣势表现为和菌阴性肺结核的检出率;劣势表现为和菌阴性肺结核的检出率;劣势表现为和菌
11、阴性肺结核的检出率;劣势表现为不能区分死菌、活菌,不能判定临床疗不能区分死菌、活菌,不能判定临床疗不能区分死菌、活菌,不能判定临床疗不能区分死菌、活菌,不能判定临床疗效。效。效。效。2.Xper MTB/RIF2.Xper MTB/RIF试验试验试验试验 Xper MTB/RIF Xper MTB/RIF快速核酸检测试剂盒依快速核酸检测试剂盒依快速核酸检测试剂盒依快速核酸检测试剂盒依据自动实时荧光定量据自动实时荧光定量据自动实时荧光定量据自动实时荧光定量PCRPCR原理,在原理,在原理,在原理,在2 2小时小时小时小时内直接从患者新鲜痰液或冻存痰液中同内直接从患者新鲜痰液或冻存痰液中同内直接从
12、患者新鲜痰液或冻存痰液中同内直接从患者新鲜痰液或冻存痰液中同时检测结核分枝杆菌及对利福平的耐药时检测结核分枝杆菌及对利福平的耐药时检测结核分枝杆菌及对利福平的耐药时检测结核分枝杆菌及对利福平的耐药性,整个过程均在密闭环境中进行,对性,整个过程均在密闭环境中进行,对性,整个过程均在密闭环境中进行,对性,整个过程均在密闭环境中进行,对操作者和周围环境安全。操作者和周围环境安全。操作者和周围环境安全。操作者和周围环境安全。20102010年年年年1212月,月,月,月,WHOWHO认可认可认可认可Xper MTB/RIFXper MTB/RIF检测技术可作为一种快速而灵敏的诊断结核检测技术可作为一种
13、快速而灵敏的诊断结核检测技术可作为一种快速而灵敏的诊断结核检测技术可作为一种快速而灵敏的诊断结核病工具,建议:对疑似多耐药结核或病工具,建议:对疑似多耐药结核或病工具,建议:对疑似多耐药结核或病工具,建议:对疑似多耐药结核或HIVHIV相相相相关结核患者的最初诊断采用关结核患者的最初诊断采用关结核患者的最初诊断采用关结核患者的最初诊断采用Xper MTB/RIFXper MTB/RIF试试试试验替代传统涂片镜检、培养和药敏试验;可验替代传统涂片镜检、培养和药敏试验;可验替代传统涂片镜检、培养和药敏试验;可验替代传统涂片镜检、培养和药敏试验;可作为多耐药结核和作为多耐药结核和作为多耐药结核和作为
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