转录水平检测甲胎蛋白.pptx
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1、分子生物学第四次讨论分子生物学第四次讨论LOREM IPSUM DOLOR 甲胎蛋白基因(alpha-fetoprotein,AFP)(GenBank 登录号:NM_001134.1)的异常表达与肝癌、前列腺癌等恶性肿瘤有关,请根据基因表达的检测方法,设计实验方案从转录水平检测AFP的表达情况。实验方案包括:实验目的、实验方法及原理、技术路线、可能的结果分析及应用等。讨论题目讨论题目 甲胎蛋白是人胚胎期血清中的主要蛋白成分。甲胎蛋白是一种糖蛋白,正常情况下,这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞,在胎儿13周AFP含量占血浆蛋白总量的1/3,胎儿出生后约两周甲胎蛋白从血液中消失。在妊娠30周达最高峰,以
2、后逐渐下降,出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右,约40mg/L,在周岁时接近成人水平。正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克/升,如在成人血清中含量过高,则提示有肝癌的可能。甲胎蛋白(甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)1、掌握RTPCR技术、northern印记杂交的原理和方法2、了解实验的操作方法和步骤3、判断基因在转录水平的表达情况实验目的实验目的 使用细胞RNA提取技术,然后通过逆转录合成cDNA,PCR扩增,利用琼脂糖凝胶电泳技术,测定AFPmRNA的表达。逆转录PCR,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先提取组织或细胞
3、中的总RNA,以其中的mRNA作为模板经反转录酶或随机引物的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段检测基因表达。实验方法及原理实验方法及原理 1、提取mRNA 2、反转录DNA链 3、PCR扩增 4、凝胶电泳 5、结果显示实验技术路线实验技术路线1、若有AFP基因表达,则在与其反转录cDNA链分子量平行处应有检测信号。2、若AFP基因未表达,则在与其反转录cDNA链分子量平行处没有检测信号。结果分析结果分析 Northern印迹杂交是指将RNA变性及电泳分离后,将其转移到固相支持物上,然后利用杂交反应来鉴定其中特定mRNA 分子的含量及其大小的过程。RNA印迹技术正好
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