DB 14∕ T 1789-2019 禽流感病毒H7亚型抗体竞争ELISA检测方法.pdf
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1、 ICS 11.220 B 41 DB14 山西省地方标准 DB 14/ T 17892019 禽流感病毒 H7 亚型抗体竞争 ELISA 检测方法 2019 - 06 - 25 发布 2019 - 08 - 25 实施 山西省市场监督管理局 发 布 DB14/ T 17892019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 缩略语 . 1 3 实验原理 . 1 4 实验条件 . 1 5 实验方法 . 1 6 结果判定 . 2 7 注意事项 . 3 附录 A(规范性附录) 试剂配制方法 . 4 DB14/ T 17892019 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出
2、的规则起草。 本标准由山西省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山西省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:山西省动物疫病预防控制中心、武汉科前生物股份有限公司、华中农业大学。 本标准主要起草人:雷宇平、王仲兵、郎小兵、金梅林、董晓辉、但汉并、卢月、胡明明、王治维、芦俊彦、樊慧锦、宁艳、雷冲、王锦、刘田勇。 DB14/ T 17892019 1 禽流感病毒 H7 亚型抗体竞争 ELISA 检测方法 1 范围 本标准规定了应用竞争酶联免疫吸附法检测血清中禽流感病毒H7亚型抗体方法的缩略语、实验原理、实验条件、实验方法、结果判定和注意事项。 本标准适用于禽流感病毒H7亚型抗体的检测。 2 缩
3、略语 下列缩略语适用于本文件。 ELISA:酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay) OD:光密度值(optical density) HRP:辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase) 3 实验原理 本标准采用竞争酶联免疫吸附法, 该方法利用抗原抗体反应具有特异性的特点, 将特异性的H7亚型禽流感病毒血凝抑制试验抗原吸附到固相载体的表面,将待检血清和特异性酶标单抗同时加入包被板孔。由待检血清中的抗体和酶标单抗竞争与包被抗原结合,待检血清中抗体越多,结合在包被抗原上的酶标单抗就越少,阳性血清反应呈色浅于阴性血清。 4 实验条件
4、4.1 实验室环境 实验操作在15 25 下进行。未灭活的感染性材料的实验活动,应在级生物安全柜内进行。 4.2 仪器 级生物安全柜、离心机、酶标仪、洗板机(或手洗)、微量移液器、冰箱、恒温箱。 5 实验方法 5.1 实验材料 禽流感病毒H7亚型包被抗原、HRP标记的禽流感病毒H7亚型HA蛋白的单克隆抗体(酶标记物)、底物液、终止液、样品稀释液、洗涤液、包被液、封闭液。 试剂配制方法见附录A。 5.2 样品准备 DB14/ T 17892019 2 取动物全血,待血液充分凝固后,4 000 r/min离心10 min,收集血清。也可等凝固后自然析出血清。血清应清亮,无溶血。 样品处理过程中应防
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