DB4401T 85 —2020 红掌组培种苗生产技术规程.docx
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1、ICS 65.020.20B 05DB4401广州市地方标准DB4401/T 852020代替 DB440100/T 1692014红掌组培种苗生产技术规程The production regulation of Anthurium andreanum in plantlet vitro2020-06-08 发布2020-07-01 实施广州市市场监督管理局发 布DB4401/T 852020目次前言1 范围12 规范性引用文件13 术语和定义14 设备设施及化学药剂14.1 设备设施14.2 化学药剂25 消毒灭菌35.1 洗涤室消毒灭菌35.2 接种室消毒灭菌35.3 培养室消毒灭菌35.
2、4 超净工作台消毒灭菌35.5 培养基的消毒灭菌35.6 接种器具消毒灭菌35.7 污染瓶苗消毒灭菌36 培养室环境条件控制46.1 温度46.2 湿度46.3 光照47 组培快繁技术47.1 培养基配制47.2 外植体选择47.3 外植体消毒灭菌47.4 接种57.5 愈伤组织诱导培养57.6 愈伤组织增殖培养57.7 芽分化培养57.8 不定芽的继代增殖培养57.9 生根培养57.10 组培苗炼苗68 出瓶移栽技术68.1 组培苗清洗消毒68.2 移植基质6I8.3 移植容器选择68.4 种植68.5 日常管理78.6 病虫害防治99 包装99.1 包装材料109.2 包装方法10附录 A
3、(资料性附录) 红掌组培快繁培养基基本配方11附录 B(资料性附录) 红掌组培快繁常用植物生长调节物质12II前言本标准按GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写进行编写。本标准由DB440100/T 1692014红掌组培种苗生产技术规程确认转化而来,并替代DB440100/T 1692014红掌组培种苗生产技术规程。本标准与DB440100/T 1692014相比,除编辑性修改外主要技术变化如下:修改了设备设施;修改了光照;修改了培养基配制;修改了愈伤组织增殖培养、芽分化培养、生根培养;修改了组培苗清洗消毒;修改了基质要求;删除了线克熏蒸消毒法;修改了移植容器选择
4、;修改了肥分管理;修改了病虫害防治。本标准由广州市农业农村局提出。本标准起草单位:广州花卉研究中心。本标准主要起草人:周晓云、宿庆连、黄明翅、曾伟达、陈一新、李莲。DB440100/T 1692014 于 2014 年 4 月 30 日首次发布。IIIDB4401/T 852020红掌组培种苗生产技术规程1 范围本标准规定了红掌(Anthurium andreanum)组培种苗生产技术的术语和定义、设备设施及化学药剂、消毒灭菌、培养室环境条件控制、组培快繁技术、出瓶移栽技术和包装。本标准适用于红掌组培种苗生产。DB44012 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用
5、文件,仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。LY/T 1589 花卉术语3 术语和定义3.1红掌组培种苗 plantlet vitro of Anthurium以组织培养方法克隆的应用于生产的红掌苗称为红掌组培种苗。3.2培养材料 culture material在无菌培养容器内培养基上生长的植物组织材料称为培养材料。3.3增殖 proliferation培养材料产生出新的具有特定结构和功能的组织、器官或小苗的过程。3.4继代(转接)subculture培养过程中将培养材料周期性地分株、分割、剪切后转接于新鲜培养基上进行增殖的过程。4
6、 设备设施及化学药剂4.1 设备设施4.1.1 组培室组培室应选择环境优良、无污染的地方,并保证其生产过程中不对周围环境造成污染。各部分的配置要合理,做到工作方便、使用安全、节省能源。空间布局上包括准备室、接种室、培养室、洗涤室、 实验室、贮存室,根据需要还宜配置风淋室、更衣室、办公室等。4.1.2 生产设备1LY/T 1589 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。4.1.2.1 洗涤设备工厂化生产可选用自动或半自动洗瓶机,实验室或小型车间选用人工洗瓶。普通洗涤用具包括洗涤水槽、塑料盆、塑料桶、塑料箱等,有条件的还可配置干燥箱、晾瓶架等。4.1.2.2 灭菌设备高压蒸汽灭菌锅(大中型卧式、立
7、式及小型手提式)、器械消毒器、紫外灯、烘干箱、微滤孔器等。4.1.2.3 接种设备及工具超净工作台、镊子、剪刀、解剖刀、接种针、钢丝架、酒精灯等。4.1.2.4 培养设备培养容器(果酱瓶、三角瓶、组培专用塑料瓶、试管等)、培养架、振荡或旋转培养器、空调、光 照培养箱及加温设备等。4.1.2.5 实验设备冰箱、纯水器、电子天平、架盘天平、酸度计、温湿度表、照度计、盛装器皿(烧杯、试剂瓶等)、 计量器皿(量筒、容量瓶、移液管等)以及其它实验室常用器具等。4.1.3 生产设施4.1.3.1 温室用于红掌组培种苗炼苗、出瓶移栽、生长和种源保存养护等生产过程,须具有调控光照、温度、湿度等环境条件的功能。
8、4.1.3.2 降温系统宜采用空调、水帘风机降温系统、雾化降温系统或内循环通风扇等。4.1.3.3 加温系统可采用空调、燃油或燃煤加温机,亦可采用水暖等加温设备。如能安装温室内保温系统,减少加温 空间,加温效果更佳。4.1.3.4 遮光系统宜采用双层活动式遮光系统,光照控制在3 000 Lx 20 000 Lx。4.1.3.5 栽培床架宜采用滚动式栽培床架,确保种苗与地面的隔离。4.1.3.6 灌溉系统宜采用喷灌设备、高压动力施肥机等。4.2 化学药剂4.2.1 洗涤剂2选用无污染洗衣粉、洗洁精、去污粉等。4.2.2 消毒灭菌剂选用酒精、氯化汞、次氯酸钠、高锰酸钾、甲醛、过氧乙酸、灭菌净等。4
9、.2.3 无机盐类和有机物类常用培养基如MS、Nitsch等大量元素和微量元素所规定的无机盐类和有机物类;或者根据不同红掌品种组培生产所用培养基种类购置所需化学试剂。常用红掌组培培养基成分参见附录A。4.2.4 植物生长调节物质细胞分裂素类:6-苄基氨基嘌呤(6 - BA)、激动素(KT)、玉米素(ZT)、2 - 异戊烯腺嘌呤(2ip)DB4401等。生长素类:吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、2,4 - 二氯苯氧乙酸(2,4 -D)等。4.2.5 碳水化合物蔗糖。4.2.6 固化剂可选用以下任何一种:卡拉胶、琼脂粉或其他组培专用培养基固化剂。5 消毒灭菌5.1 洗涤室
10、消毒灭菌每天用灭菌净、过氧乙酸等喷洒清洁地面,保持室内干净。5.2 接种室消毒灭菌接种前用紫外灯照射20 min 30 min,并定期用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸。5.3 培养室消毒灭菌定期用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸,或用75%酒精喷雾消毒,也可选用广谱性杀菌烟雾剂薰蒸。5.4 超净工作台消毒灭菌接种前用紫外灯照射20 min 30 min,并用75%酒精喷洒台面,或用灭菌净擦拭台面;定期清洗超净工作台过滤膜以保证过滤膜清洁。5.5 培养基的消毒灭菌高温高压蒸汽消毒(巴氏消毒法),通常在压力1.1 kg/cm2、温度121 条件下保持20 min即可。5.6 接种器具消毒灭菌使用前进行蒸气消毒;接种
11、过程中采用小型干热灭菌器或用酒精灯灼烧消毒。5.7 污染瓶苗消毒灭菌3用消毒锅高温高压消毒,然后再清洗培养容器。6 培养室环境条件控制6.1 温度控制在25 2 。6.2 湿度空气相对湿度宜保持在50%左右。6.3 光照根据培养材料的需光特性调整光照强度;一般培养室光照强度宜控制在1 500 Lx 3 000 Lx,工厂化生产,为降低成本可考虑利用自然光照。7 组培快繁技术7.1 培养基配制7.1.1 培养基选择根据不同红掌品种的生长发育特性选择合适的基本培养基种类和激素配比,常用的有MS、改良MS(铵态氮的水平降低1/2)或Nt培养基,pH值在5.8至6.2之间。7.1.2 母液的配制和保存
12、7.1.2.1 母液的配制母液可以配制成单一化合物母液,也可以配制成含几种化合物的混合母液,如大量元素母液与微量 元素母液。大量元素母液配制10倍,微量元素母液配制100倍,激素配制浓度一般为0.2 mg/mL 1.0 mg/mL,激素的配制方法参见附录B。7.1.2.2 母液的保存母液配制好后,存放于4 的冰箱中。7.1.3 培养基配制流程准备好干燥洁净的培养瓶、母液、蒸馏水、蔗糖、固化剂等,按以下流程制作:洁净水(一般采用 经过反渗透或过滤处理的自来水)+母液+糖+固化剂+有机附加物混合pH值调整至 5.8 加热溶解分装封口灭菌冷却凝固。7.2 外植体选择宜在温暖、晴朗天气的早上剪取生长健
13、壮、无病虫害、能保证原品种性状的红掌嫩叶、嫩茎等作为 外植体。剪叶的刀具每使用1次须用75%酒精溶液消毒。剪取的外植体应做好品种名称标记,并尽快在实 验室进行消毒处理。7.3 外植体消毒灭菌4先用自来水冲洗外植体,再用2%的灭菌净溶液加1滴吐温对外植体进行表面消毒12 min 15 min, 其间不断摇动溶液。取出外植体,用纯净水进行冲洗。经表面消毒后的外植体在超净工作台上用0.1% HgCl2溶液浸泡8 min 10 min。取出外植体,用无菌水冲洗5次 6次,再用无菌水浸泡10 min 12 min,后用无菌水冲洗外植体3次 5次。7.4 接种在超净工作台上将已完成消毒处理的外植体置于无菌
14、垫纸或经消毒的不锈钢碟上,用经过灭菌的接 种刀、镊子将外植体切成约1.0 cm 1.0 cm的小块,后接种到诱导培养基中,培养基宜选用:MS或Nt + 6 - BA 2 mg/L + 2,4 - D 0.2 mg/L + 蔗糖30 g/L + 卡拉胶4 g/L 7 g/L等。每瓶接种1块 4块(瓶容积为250 mL,下同)。接种时叶背要平放于培养基表面。DB44017.5 愈伤组织诱导培养接种完成后将其移到培养室进行愈伤组织诱导培养,培养温度为25 2 。前期宜采用暗培养,愈伤组织诱导出来后,宜在200 Lx 500 Lx左右的弱光条件下培养。7.6 愈伤组织增殖培养愈伤组织长大至米粒大小时,
15、选取致密的愈伤组织块转接到增殖培养基进行愈伤组织的增殖培养。 继代时,每30 d转接1次,每瓶放3块 4块。愈伤组织增殖培养基宜选用:MS + 6 - BA 1.0 mg/L + NAA0.05 mg/L + 蔗糖3 g/L + 卡拉胶4 g/L 7 g/L等,培养条件:温度25 2 、光强1 500 Lx 2 000 Lx、光照时间5 h/d。7.7 芽分化培养愈伤组织增殖至适当的数量时,转接到芽分化培养基上进行芽分化培养,每35 d转接1次,每瓶放3 块 4块。芽分化培养基宜选用:MS + 6 - BA 0.3 mg/L 0.7 mg/L + NAA 0.05 mg/L + 蔗糖30 g/
16、L+卡拉胶4 g/L 7 g/L等。培养条件:温度25 2 、光强1 500 Lx 2 000 Lx、光照时间5 h/d。7.8 不定芽的继代增殖培养选择出叶正常、茎直、芽健壮、基部愈伤组织长势旺盛的材料进行继代增殖培养。每40 d 50 d 继代增殖1次。转接种时,用接种刀将丛生芽以4个 5个芽为1个组织块分开,并把褐化的坚硬组织块剔除。每瓶放入(5块 6块)大小约为 0.5 cm 1.0 cm的丛芽组织块。继代培养转接时宜做好继代次数的登记,便于质量跟踪。继代次数宜控制在20代以内。继代增殖培养基宜选用:MS + 6 BA0.3 mg/L 0.7 mg/L + KT 0.2 mg/L +
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