JJF 1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范-(高清版).pdf
《JJF 1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范-(高清版).pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《JJF 1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范-(高清版).pdf(20页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、中华人民共和国国家计量技术规范J J F1 5 2 72 0 1 5聚合酶链反应分析仪校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rP o l y m e r a s eC h a i nR e a c t i o nA n a l y z e r s 2 0 1 5-0 6-1 5发布2 0 1 5-0 9-1 5实施国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布聚合酶链反应分析仪校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rP o l y m e r a
2、s eC h a i nR e a c t i o nA n a l y z e r sJ J F1 5 2 72 0 1 5 归 口 单 位:全国生物计量技术委员会 主要起草单位:中国计量科学研究院 参加起草单位:上海市计量测试技术研究院广东省计量科学研究院天津市计量监督检测科学研究院 本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释J J F1 5 2 72 0 1 5本规范主要起草人:高运华(中国计量科学研究院)参加起草人:张丽萍(上海市计量测试技术研究院)尹 强(广东省计量科学研究院)田 昀(天津市计量监督检测科学研究院)保志娟(广东省计量科学研究院)吴建英(上海市计量测试技术研究院)J J
3、F1 5 2 72 0 1 5目 录引言()1 范围(1)2 引用文件(1)3 术语(1)3.1 聚合酶链反应(1)3.2 聚合酶链反应分析仪(1)4 概述(1)5 计量特性(1)6 校准条件(2)6.1 校准设备及标准物质(2)7 校准项目和校准方法(2)7.1 校准条件(2)7.2 温度示值误差、温度均匀性校准(2)7.3 升降温速率校准(4)7.4 定量P C R仪样本示值误差、样本线性的校准(5)8 校准结果表达(6)9 复校时间间隔(6)附录A 标准物质的准备及配制(7)附录B P C R反应体系的配制(9)附录C 温度示值误差校准结果的不确定度评定模型(1 0)附录D 样本示值误差
4、结果的不确定度评定模型(1 2)附录E 校准原始记录参考格式(1 4)附录F 校准证书(内页)参考格式(1 5)J J F1 5 2 72 0 1 5引 言本规范的编制基于聚合酶链反应分析仪主要技术参数实验测试,参考了J J F1 0 3 02 0 1 0 恒温槽校准规范、S N/T2 1 0 2.12 0 0 8/I S O2 2 1 7 4:2 0 0 5 食源性病原体P C R检测技术规范 第1部分:通用要求及定义、S N/T2 1 0 2.22 0 0 8/I S O2 0 8 3 6:2 0 0 5 食源性病原体P C R检测技术规范 第2部分:P C R性能试验要求、Y Y/T1
5、1 7 32 0 1 0 聚合酶链反应分析仪等文件。本规范为首次发布。J J F1 5 2 72 0 1 5聚合酶链反应分析仪校准规范1 范围本规范适用于模块加热的聚合酶链反应(P C R)分析仪计量性能的校准,对于其他类型的P C R仪,可参照本规范执行。2 引用文件本规范引用了下列文件:G B/T6 6 8 22 0 0 8 分析实验室用水国家标准YY/T1 1 7 32 0 1 0 聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3 术语3.1 聚合酶链反应 p o l y m e r a s ec
6、h a i nr e a c t i o n,P C RYY/T1 1 7 32 0 1 03.1一种对特定的D NA或R NA片段在体外进行快速扩增的方法,由变性退火延伸三个基本反应步骤构成。3.2 聚合酶链反应分析仪 p o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o na n a l y z e rY Y/T1 1 7 32 0 1 03.2基于P C R(聚合酶链反应)技术原理,模拟D NA或R NA的复制过程,在模板、引物、聚合酶等存在的条件下,特异扩增已知序列,对其进行检测分析的仪器设备。4 概述聚合酶链反应分析仪是基于P C R技术原理,模拟D
7、NA或R NA的复制过程,在模板、引物、聚合酶等存在的条件下,特异扩增已知序列,对其进行检测分析的仪器设备,包括定性P C R仪和定量P C R仪两类。定性P C R通常由样品载台、热循环部件、控制部件和电源部件等部分组成。定量P C R仪主要由样品载台、热循环部件、控制部件、光学检测部件、电源部件、计算机及应用软件等部分组成。5 计量特性计量特性见表1。表1 聚合酶链反应分析仪计量特性项目定性P C R仪定量P C R仪温度示值误差+温度均匀度+平均升温速率+1J J F1 5 2 72 0 1 5表1(续)项目定性P C R仪定量P C R仪平均降温速率+样本示值误差-+样本线性-+注:+
8、为校准项目;-为非校准项目。6 校准条件仪器使用允许的环境条件,测量过程中应测量和记录环境的温度、相对湿度。6.1 校准设备及标准物质6.1.1 温度校准装置由若干个(通常为1 5个)精密温度传感器、数据采集分析模块组成,测温范围(01 2 0),温度校准装置测量不确定度0.1,且需要通过计量检定。6.1.2 标准物质校准时应采用国内外有证标准物质,包括:质粒D NA标准物质、核糖核酸标准物质,其特性量值(拷贝数1 09c o p i e s/L,相对扩展不确定度5%)。6.1.3 电子天平精度0.0 1m g,且需要通过计量检定。6.1.4 移液器规格:2L、1 0L、1 0 0L、2 0
9、0L、10 0 0L,且需要通过计量检定。校准前按照附录A配制校准时使用的溶液。7 校准项目和校准方法7.1 校准条件校准前需将P C R仪开机预热3 0m i n。7.2 温度示值误差、温度均匀性校准7.2.1 将P C R仪及温度校准装置各部件连接完好,在温度传感器表面上涂抹适量的导热油,按图1所示将温度传感器置于P C R仪(9 6孔)加热模块设定孔中,其他型号的P C R仪可参照图1进行测试。2J J F1 5 2 72 0 1 5图1 温度传感器布点示意图7.2.2 参照送校单位提供的P C R仪说明书设定温度控制程序,如表2所示,不能设定3 0为温控程序起点的P C R仪,温控程序
10、参照表2进行设定。表2 P C R仪温度控制程序标准程序表步骤设定温度点设定温度持续时间13 01m i n29 53m i n33 02m i n49 03m i n55 03m i n67 03m i n76 03m i n83 01m i n7.2.3 启动温度校准装置,记录整个数据采集过程并保存。7.2.4 温度示值误差校准结果按公式(1)和公式(2)计算:Td=Ts-Tc(1)Tc=1nni=1Ti(2)式中:Td 温控装置工作区域内温度示值误差,;Ts 温控装置工作区域内设定温度值,;Tc 所有测温传感器测量值的平均值,;Ti 第i个温度传感器测定值,。7.2.5 温度均匀度校准结
11、果按公式(3)计算:Tu=Tm a x-Tm i n(3)3J J F1 5 2 72 0 1 5 式中:Tu 温度均匀度,;Tm a x 所有测温传感器测定值的最大值,;Tm i n 所有测温传感器测定值的最小值,。7.3 升降温速率校准7.3.1 参照送校单位提供的P C R仪说明书设定该P C R仪的温度控制程序,如表3所示。启动温度校准装置,记录整个数据采集过程并保存。表3 P C R仪温度控制程序标准程序表步骤设定温度点设定温度持续时间14 53m i n29 53m i n34 53m i n7.3.2 记录仪器显示温度达到设定温度恒温1 0s后,取5 0 温度点,温度记为TA,取
12、9 0温度点,温度记为TB,从TA到达TB的时间记为t,按图2所示模式取点计算平均升温速率。图2 升降温速率计算模式按公式(4)计算平均升温速率:VUT=TB-TAt(4)式中:VUT 平均升温速率,/s;TA 5 0温度点测量值,;TB 9 0温度点测量值,;t 从TA到达TB的时间,s。7.3.3 平均降温速率校准结果按公式(5)计算:4J J F1 5 2 72 0 1 5取9 0温度点,温度记为TA,取5 0温度点,温度记为TB,从TA到达TB的时间记为t,按图2所示模式取点计算平均降温速率。按公式(5)计算平均降温速率:VD T=TB-TAt(5)式中:VD T 平均降温速率,/s;
13、TA 5 0温度点测量值,;TB 9 0温度点测量值,;t 从TA到达TB的时间,s。7.4 定量P C R仪样本示值误差、样本线性的校准7.4.1 标准物质的配制标准物质配制方法见附录A。7.4.2 校准板的制备用经过计量校准的移液器,将配制好的P C R反应体系加入到反应板中,按图3所示准备9 6孔校准板,其他型号的仪器可参照本示例准备。P C R反应体系的配制方法见附录B。图3 P C R仪样本示值误差、样本线性误差和检测限校准用9 6孔反应板7.4.3 参照送校单位提供的P C R仪说明书设定该P C R仪的温度控制程序,如表4所示。5J J F1 5 2 72 0 1 5表4 定量P
14、 C R仪校准温度控制程序步骤设定温度点设定温度持续时间循环数15 02m i n129 51 0m i n139 53 0s46 01m i n4 57.4.4 分析参数的设置参照送校单位提供的P C R仪说明书设定P C R仪的数据分析参数。7.4.5 样本示值误差按公式(6)计算样本示值误差c=cc-cs(6)式中:c 样本示值误差,c o p i e s/L;cc 仪器测量平均值,c o p i e s/L;cs 标准物质标称值,c o p i e s/L。7.4.6 样本线性以系列稀释的标准物质(至少5个)扩增C t值与浓度对数值进行线性回归,计算其线性回归系数r。8 校准结果表达经
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- JJF 1527-2015 聚合酶链反应分析仪校准规范-高清版 1527 2015 聚合 反应 分析 校准 规范 高清版
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【Fis****915】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【Fis****915】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。