生物制药第二章生物制药技术通论模块01生物药物的制备技术.ppt
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1、第二章第二章 生物制药技术通论生物制药技术通论n n第一节第一节生物药物的制备技术生物药物的制备技术n n第二节第二节发酵工程制药技术发酵工程制药技术n n第三节第三节细胞工程制药技术细胞工程制药技术n n第四节第四节酶工程制药技术酶工程制药技术n n第五节第五节基因工程制药技术基因工程制药技术第一节第一节 生物药物的制备技术生物药物的制备技术一、一、材料选择材料选择二、二、材料的预处理材料的预处理三、三、提取技术提取技术四、四、固液分离技术固液分离技术五、五、纯化、结晶纯化、结晶六、六、浓缩、干燥浓缩、干燥一般工艺程序一般工艺程序一般工艺程序一般工艺程序生物材料生物材料胞内产物胞内产物胞外产
2、物胞外产物细胞碎片细胞碎片提取液提取液浓缩液浓缩液初步分离产物初步分离产物高度纯化产物高度纯化产物产品(原料药)产品(原料药)细胞破碎细胞破碎细胞破碎细胞破碎浓缩浓缩浓缩浓缩提取技术提取技术提取技术提取技术沉淀、膜分离沉淀、膜分离沉淀、膜分离沉淀、膜分离层析、电泳、结晶层析、电泳、结晶层析、电泳、结晶层析、电泳、结晶浓缩、干燥浓缩、干燥浓缩、干燥浓缩、干燥RETURN固液分离技术固液分离技术固液分离技术固液分离技术固液分离技术固液分离技术固液分离技术固液分离技术n n选择原则:选择原则:选择原则:选择原则:1 1、来源丰富、成本低、目的物含量高、易于分离纯化的材料来源丰富、成本低、目的物含量高
3、、易于分离纯化的材料来源丰富、成本低、目的物含量高、易于分离纯化的材料来源丰富、成本低、目的物含量高、易于分离纯化的材料 材料来源丰富,而含量不高;材料来源丰富,而含量不高;材料来源丰富,而含量不高;材料来源丰富,而含量不高;或或或或材材材材料料料料来来来来源源源源丰丰丰丰富富富富、含含含含量量量量高高高高,但但但但材材材材料料料料的的的的杂杂杂杂质质质质含含含含量量量量太太太太多多多多,分分分分离离离离纯纯纯纯化化化化手手手手续续续续繁繁繁繁琐琐琐琐,以以以以致致致致影影影影响响响响质质质质量量量量和和和和收收收收率率率率,反反反反而而而而不不不不如如如如采采采采用用用用低低低低含含含含量量
4、量量易易易易于于于于操操操操作作作作的的的的原原原原料;料;料;料;2 2、种属特异性、发育阶段、生理状态、解剖部位等因素的影响种属特异性、发育阶段、生理状态、解剖部位等因素的影响种属特异性、发育阶段、生理状态、解剖部位等因素的影响种属特异性、发育阶段、生理状态、解剖部位等因素的影响 种种种种属属属属特特特特异异异异性性性性影影影影响响响响到到到到原原原原料料料料中中中中待待待待提提提提取取取取蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质的的的的含含含含量量量量、结结结结构构构构、生生生生物物物物学学学学活活活活性及其抗原性。性及其抗原性。性及其抗原性。性及其抗原性。例如:来源于猪垂体的生长素对人体无效,不能用于
5、人体。例如:来源于猪垂体的生长素对人体无效,不能用于人体。例如:来源于猪垂体的生长素对人体无效,不能用于人体。例如:来源于猪垂体的生长素对人体无效,不能用于人体。被提取蛋白质的原料中的含量还受到原料被提取蛋白质的原料中的含量还受到原料被提取蛋白质的原料中的含量还受到原料被提取蛋白质的原料中的含量还受到原料解剖部位解剖部位解剖部位解剖部位的影响。的影响。的影响。的影响。例例例例如如如如:猪猪猪猪胰胰胰胰脏脏脏脏尾尾尾尾部部部部含含含含激激激激素素素素较较较较多多多多,猪猪猪猪胰胰胰胰脏脏脏脏头头头头部部部部含含含含消消消消化化化化酶酶酶酶较较较较多多多多,单单单单独独独独收集胰头提取消化酶,收集
6、胰尾提取激素,有利于提高产率。收集胰头提取消化酶,收集胰尾提取激素,有利于提高产率。收集胰头提取消化酶,收集胰尾提取激素,有利于提高产率。收集胰头提取消化酶,收集胰尾提取激素,有利于提高产率。RETURN二、生物材料的预处理二、生物材料的预处理 组织与细胞的破碎方法组织与细胞的破碎方法1 1、机械法、机械法、机械法、机械法常用器械:常用器械:常用器械:常用器械:机械捣碎机机械捣碎机机械捣碎机机械捣碎机、匀浆器、研钵匀浆器、研钵匀浆器、研钵匀浆器、研钵等。等。等。等。n n机械捣碎机机械捣碎机机械捣碎机机械捣碎机适用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶和适用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶和适用
7、于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶和适用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶和芽等材料破碎,但不适用于大分子的提取产物。芽等材料破碎,但不适用于大分子的提取产物。芽等材料破碎,但不适用于大分子的提取产物。芽等材料破碎,但不适用于大分子的提取产物。n n匀浆器匀浆器匀浆器匀浆器破碎细胞的程度比机械捣碎机高,主要用于少量样破碎细胞的程度比机械捣碎机高,主要用于少量样破碎细胞的程度比机械捣碎机高,主要用于少量样破碎细胞的程度比机械捣碎机高,主要用于少量样品的制备。品的制备。品的制备。品的制备。n n研钵研钵研钵研钵多用于细菌或其他坚硬植物材料,研磨时加入少量石多用于细菌或其他坚硬植物材料,研磨时加入少
8、量石多用于细菌或其他坚硬植物材料,研磨时加入少量石多用于细菌或其他坚硬植物材料,研磨时加入少量石英砂、玻璃粉等研磨剂,有利于提高研磨效率。英砂、玻璃粉等研磨剂,有利于提高研磨效率。英砂、玻璃粉等研磨剂,有利于提高研磨效率。英砂、玻璃粉等研磨剂,有利于提高研磨效率。2 2、物理法、物理法、物理法、物理法 常常常常用用用用方方方方法法法法:反反反反复复复复冻冻冻冻融融融融法法法法、急急急急热热热热骤骤骤骤冷冷冷冷法法法法、超超超超声声声声波波波波处处处处理理理理、加加加加压压压压破破破破碎法。碎法。碎法。碎法。n n反反反反复复复复冻冻冻冻融融融融法法法法是是是是先先先先将将将将样样样样品品品品深
9、深深深冷冷冷冷至至至至20201515使使使使之之之之凝凝凝凝固固固固,再再再再缓缓缓缓慢慢慢慢地地地地融融融融化化化化,反反反反复复复复多多多多次次次次可可可可使使使使大大大大部部部部分分分分细细细细胞胞胞胞及及及及细细细细胞胞胞胞内内内内颗颗颗颗粒粒粒粒破破破破坏坏坏坏,常用于处理动物性材料,但脂蛋白会变性失活。常用于处理动物性材料,但脂蛋白会变性失活。常用于处理动物性材料,但脂蛋白会变性失活。常用于处理动物性材料,但脂蛋白会变性失活。n n急急急急热热热热骤骤骤骤冷冷冷冷法法法法是是是是将将将将样样样样品品品品投投投投入入入入沸沸沸沸水水水水中中中中,于于于于9090左左左左右右右右加加
10、加加热热热热数数数数分分分分钟钟钟钟,立即置冰水浴中使其迅速冷却,则绝大多数细胞被破坏。立即置冰水浴中使其迅速冷却,则绝大多数细胞被破坏。立即置冰水浴中使其迅速冷却,则绝大多数细胞被破坏。立即置冰水浴中使其迅速冷却,则绝大多数细胞被破坏。n n超超超超声声声声波波波波处处处处理理理理是是是是利利利利用用用用超超超超声声声声波波波波产产产产生生生生的的的的机机机机械械械械振振振振动动动动使使使使细细细细胞胞胞胞破破破破碎碎碎碎,适适适适用用用用于于于于微微微微生生生生物物物物材材材材料料料料。其其其其缺缺缺缺点点点点是是是是可可可可导导导导致致致致对对对对超超超超声声声声波波波波敏敏敏敏感感感感
11、蛋蛋蛋蛋白白白白失失失失活活活活,另另另另外超声波产生的热量亦可能使热敏蛋白质失活。外超声波产生的热量亦可能使热敏蛋白质失活。外超声波产生的热量亦可能使热敏蛋白质失活。外超声波产生的热量亦可能使热敏蛋白质失活。n n加加加加压压压压破破破破碎碎碎碎法法法法是是是是利利利利用用用用气气气气压压压压或或或或水水水水压压压压破破破破碎碎碎碎细细细细胞胞胞胞,每每每每小小小小时时时时可可可可以以以以处处处处理理理理数数数数十乃至数千升的样品,适用于微生物发酵工业的生产。十乃至数千升的样品,适用于微生物发酵工业的生产。十乃至数千升的样品,适用于微生物发酵工业的生产。十乃至数千升的样品,适用于微生物发酵工
12、业的生产。二、生物材料的预处理二、生物材料的预处理 组织与细胞的破碎方法组织与细胞的破碎方法3 3、化学法和酶法、化学法和酶法、化学法和酶法、化学法和酶法方法:有机溶剂法、自溶法、酶解法、表面活性剂处理法。方法:有机溶剂法、自溶法、酶解法、表面活性剂处理法。方法:有机溶剂法、自溶法、酶解法、表面活性剂处理法。方法:有机溶剂法、自溶法、酶解法、表面活性剂处理法。n n有有有有机机机机溶溶溶溶剂剂剂剂法法法法是是是是于于于于0 0以以以以下下下下在在在在粉粉粉粉碎碎碎碎后后后后的的的的新新新新鲜鲜鲜鲜材材材材料料料料中中中中加加加加入入入入5 51010倍倍倍倍量量量量的的的的丙丙丙丙酮酮酮酮,迅
13、迅迅迅速速速速搅搅搅搅拌拌拌拌,可可可可破破破破碎碎碎碎细细细细胞胞胞胞,亦亦亦亦使使使使蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质与与与与脂脂脂脂质质质质分分分分开,有利于进一步的纯化。开,有利于进一步的纯化。开,有利于进一步的纯化。开,有利于进一步的纯化。n n表表表表面面面面活活活活性性性性剂剂剂剂处处处处理理理理法法法法是是是是利利利利用用用用细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜对对对对表表表表面面面面活活活活性性性性剂剂剂剂不不不不稳稳稳稳定定定定的的的的原原原原理理理理来来来来破破破破碎碎碎碎细细细细胞胞胞胞。如如如如:十十十十二二二二烷烷烷烷基基基基硫硫硫硫酸酸酸酸钠钠钠钠(SDSSDS)、氯氯氯氯化化化化十
14、十十十二二二二烷烷烷烷吡吡吡吡啶、去氧胆酸钠。啶、去氧胆酸钠。啶、去氧胆酸钠。啶、去氧胆酸钠。n n自自自自溶溶溶溶法法法法是是是是利利利利用用用用细细细细胞胞胞胞自自自自身身身身的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白酶酶酶酶将将将将细细细细胞胞胞胞破破破破坏坏坏坏,使使使使细细细细胞胞胞胞内内内内含含含含物物物物释释释释放放放放出出出出来来来来。自自自自溶溶溶溶法法法法所所所所需需需需的的的的时时时时间间间间长长长长,不不不不易易易易控控控控制制制制,难难难难以以以以在在在在工工工工业业业业上上上上使用。使用。使用。使用。n n酶酶酶酶解解解解法法法法适适适适用用用用于于于于细细细细菌菌菌菌、植植植植物物
15、物物等等等等含含含含细细细细胞胞胞胞壁壁壁壁的的的的材材材材料料料料,如如如如:利利利利用用用用溶溶溶溶菌菌菌菌酶酶酶酶、纤纤纤纤维维维维素素素素酶酶酶酶、半半半半纤纤纤纤维维维维素素素素酶酶酶酶、蜗蜗蜗蜗牛牛牛牛酶酶酶酶、酯酯酯酯酶酶酶酶等等等等专专专专一一一一性性性性的的的的酶酶酶酶水水水水解细胞壁,得到细胞的内含物。解细胞壁,得到细胞的内含物。解细胞壁,得到细胞的内含物。解细胞壁,得到细胞的内含物。二、生物材料的预处理二、生物材料的预处理 组织与细胞的破碎方法组织与细胞的破碎方法RETURN(一)提取类型与影响因素(一)提取类型与影响因素1 1、提取类型、提取类型、提取类型、提取类型(1
16、 1)固液提取(又称浸取、浸提、抽提):固液提取(又称浸取、浸提、抽提):固液提取(又称浸取、浸提、抽提):固液提取(又称浸取、浸提、抽提):目标物在细胞目标物在细胞目标物在细胞目标物在细胞中呈固相或与固体结合存在,提取时由固相转入液相,称为中呈固相或与固体结合存在,提取时由固相转入液相,称为中呈固相或与固体结合存在,提取时由固相转入液相,称为中呈固相或与固体结合存在,提取时由固相转入液相,称为固固固固液萃取,常用萃取剂为水。液萃取,常用萃取剂为水。液萃取,常用萃取剂为水。液萃取,常用萃取剂为水。(2 2)液液提取(又称萃取):液液提取(又称萃取):液液提取(又称萃取):液液提取(又称萃取):
17、目标物已呈液相存在,萃取目标物已呈液相存在,萃取目标物已呈液相存在,萃取目标物已呈液相存在,萃取时由液相转入另一液相,称为液时由液相转入另一液相,称为液时由液相转入另一液相,称为液时由液相转入另一液相,称为液液萃取,因常用有机溶剂液萃取,因常用有机溶剂液萃取,因常用有机溶剂液萃取,因常用有机溶剂作为萃取剂,所以也叫溶剂萃取。作为萃取剂,所以也叫溶剂萃取。作为萃取剂,所以也叫溶剂萃取。作为萃取剂,所以也叫溶剂萃取。2 2、影响因素、影响因素、影响因素、影响因素(1 1)溶解度的大小)溶解度的大小)溶解度的大小)溶解度的大小:选择合适溶剂,一般遵守:选择合适溶剂,一般遵守:选择合适溶剂,一般遵守:
18、选择合适溶剂,一般遵守“相似相溶相似相溶相似相溶相似相溶”的原则。的原则。的原则。的原则。(2 2)扩散速度:)扩散速度:)扩散速度:)扩散速度:增加温度、降低溶液的黏度、增加扩散面增加温度、降低溶液的黏度、增加扩散面增加温度、降低溶液的黏度、增加扩散面增加温度、降低溶液的黏度、增加扩散面积、减少扩散距离、搅拌和延长时间等。积、减少扩散距离、搅拌和延长时间等。积、减少扩散距离、搅拌和延长时间等。积、减少扩散距离、搅拌和延长时间等。n n提取原则:提取原则:提取原则:提取原则:“少量多次少量多次少量多次少量多次”,对于等量的提取溶液,分多,对于等量的提取溶液,分多,对于等量的提取溶液,分多,对于
19、等量的提取溶液,分多次提取比一次提取的效果好。次提取比一次提取的效果好。次提取比一次提取的效果好。次提取比一次提取的效果好。(二)提取方法(二)提取方法1 1、水溶液提取、水溶液提取、水溶液提取、水溶液提取2 2、表面活性剂提取、表面活性剂提取、表面活性剂提取、表面活性剂提取3 3、有机溶剂萃取、有机溶剂萃取、有机溶剂萃取、有机溶剂萃取1、水溶液提取、水溶液提取n n水溶液(一般为缓冲液)是生物药物提取中最常用的溶剂,水溶液(一般为缓冲液)是生物药物提取中最常用的溶剂,水溶液(一般为缓冲液)是生物药物提取中最常用的溶剂,水溶液(一般为缓冲液)是生物药物提取中最常用的溶剂,可以利用可以利用可以利
20、用可以利用水或稀酸、稀碱、稀盐溶液水或稀酸、稀碱、稀盐溶液水或稀酸、稀碱、稀盐溶液水或稀酸、稀碱、稀盐溶液进行提取。进行提取。进行提取。进行提取。n n“盐溶盐溶盐溶盐溶”作用作用作用作用:盐离子的存在能减弱生物分子间离子键及:盐离子的存在能减弱生物分子间离子键及:盐离子的存在能减弱生物分子间离子键及:盐离子的存在能减弱生物分子间离子键及氢键的作用力,氢键的作用力,氢键的作用力,氢键的作用力,稀盐溶液稀盐溶液稀盐溶液稀盐溶液可促进蛋白质等生物大分子的溶可促进蛋白质等生物大分子的溶可促进蛋白质等生物大分子的溶可促进蛋白质等生物大分子的溶解。解。解。解。n n“盐解盐解盐解盐解”作用作用作用作用:
21、某些与细胞结构结合牢固的生物活性物质,:某些与细胞结构结合牢固的生物活性物质,:某些与细胞结构结合牢固的生物活性物质,:某些与细胞结构结合牢固的生物活性物质,在提取时采用在提取时采用在提取时采用在提取时采用高浓度盐溶液高浓度盐溶液高浓度盐溶液高浓度盐溶液(如(如(如(如4mol/L4mol/L盐酸胍,盐酸胍,盐酸胍,盐酸胍,8mol/L8mol/L脲或其他变性剂)。脲或其他变性剂)。脲或其他变性剂)。脲或其他变性剂)。2、表面活性剂提取、表面活性剂提取n n一些采用水盐系统难于提取的一些采用水盐系统难于提取的一些采用水盐系统难于提取的一些采用水盐系统难于提取的蛋白质、酶、核酸蛋白质、酶、核酸蛋
22、白质、酶、核酸蛋白质、酶、核酸,可采用,可采用,可采用,可采用表面活性剂提取。表面活性剂提取。表面活性剂提取。表面活性剂提取。n n离子表面活性剂离子表面活性剂离子表面活性剂离子表面活性剂(如胆酸盐、十二烷基磺酸钠)(如胆酸盐、十二烷基磺酸钠)(如胆酸盐、十二烷基磺酸钠)(如胆酸盐、十二烷基磺酸钠)如:十二烷基磺酸钠(如:十二烷基磺酸钠(如:十二烷基磺酸钠(如:十二烷基磺酸钠(SDSSDS),利于破坏核酸与蛋白质),利于破坏核酸与蛋白质),利于破坏核酸与蛋白质),利于破坏核酸与蛋白质的离子键合,对核酸酶又有一定抑制作用,因此常用于核的离子键合,对核酸酶又有一定抑制作用,因此常用于核的离子键合,
23、对核酸酶又有一定抑制作用,因此常用于核的离子键合,对核酸酶又有一定抑制作用,因此常用于核酸的提取。酸的提取。酸的提取。酸的提取。n n非离子表面活性剂(非离子表面活性剂(非离子表面活性剂(非离子表面活性剂(如吐温如吐温如吐温如吐温6060、吐温、吐温、吐温、吐温8080等)。等)。等)。等)。3、有机溶剂萃取、有机溶剂萃取n n对于水不溶性的对于水不溶性的对于水不溶性的对于水不溶性的脂类、脂蛋白、膜蛋白结合酶脂类、脂蛋白、膜蛋白结合酶脂类、脂蛋白、膜蛋白结合酶脂类、脂蛋白、膜蛋白结合酶等,可采用等,可采用等,可采用等,可采用有机溶剂进行提取。有机溶剂进行提取。有机溶剂进行提取。有机溶剂进行提取
24、。n n常见的有机提取溶剂有常见的有机提取溶剂有常见的有机提取溶剂有常见的有机提取溶剂有乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、丙酮丙酮丙酮丙酮、丁醇、丁醇、丁醇、丁醇。n n单一溶剂分离法单一溶剂分离法单一溶剂分离法单一溶剂分离法n n多种溶剂组合分离法多种溶剂组合分离法多种溶剂组合分离法多种溶剂组合分离法如先用如先用如先用如先用丙酮丙酮丙酮丙酮,再用,再用,再用,再用乙醇乙醇乙醇乙醇,最后用,最后用,最后用,最后用乙醚乙醚乙醚乙醚提取,可以从提取,可以从提取,可以从提取,可以从动物脑动物脑动物脑动物脑中依次分离出中依次分离出中依次分离出中依次分离出胆固醇胆固醇胆固醇胆固醇、卵磷脂和、卵磷脂和、卵磷脂和、卵
25、磷脂和脑磷脂脑磷脂脑磷脂脑磷脂。3、有机溶剂萃取、有机溶剂萃取n n常用丙酮处理某些生化原材料,制成常用丙酮处理某些生化原材料,制成常用丙酮处理某些生化原材料,制成常用丙酮处理某些生化原材料,制成“丙酮粉丙酮粉丙酮粉丙酮粉”。作用:作用:作用:作用:n n使材料脱水、脱脂;使材料脱水、脱脂;使材料脱水、脱脂;使材料脱水、脱脂;n n细胞结构松散,增加稳定性,有利于活性成分的提取;细胞结构松散,增加稳定性,有利于活性成分的提取;细胞结构松散,增加稳定性,有利于活性成分的提取;细胞结构松散,增加稳定性,有利于活性成分的提取;n n同时又减少了体积,便于贮存和运输。同时又减少了体积,便于贮存和运输。
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- 生物制药 第二 技术 通论 模块 01 生物 药物 制备
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