十七、艾滋病机会性感染及性病实验室检查.ppt
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1、艾滋病机会性感染艾滋病机会性感染及性病实验室检查及性病实验室检查中国医大一院中国医大一院 检验科检验科 褚云卓褚云卓5/2/20241褚云卓讲授内容讲授内容一、机会性感染病原学检查一、机会性感染病原学检查二、性病实验室检查检查二、性病实验室检查检查5/2/20242褚云卓一、机会性感染病原学检查一、机会性感染病原学检查1 1、病毒感染、病毒感染2 2、细菌感染、细菌感染 3 3、真菌感染、真菌感染 4 4、原虫感染、原虫感染 5/2/20243褚云卓1 1、病毒感染、病毒感染 CMVCMV感染感染 l细胞学检查细胞学检查 从尿液、脑脊液或受感染的肝、从尿液、脑脊液或受感染的肝、肺、胃等组织标本
2、中,用姬姆萨或瑞肺、胃等组织标本中,用姬姆萨或瑞氏染色法进行染色,可见核内和(或)氏染色法进行染色,可见核内和(或)胞质内含包涵体的巨大细胞,其周围胞质内含包涵体的巨大细胞,其周围有一条明亮带。有一条明亮带。5/2/20244褚云卓l病毒分离病毒分离 CMVCMV病毒分离是诊断病毒分离是诊断CMVCMV感染最直接的方法,感染最直接的方法,CMVCMV具有种属特异性。采取新鲜尿液、唾液、子宫具有种属特异性。采取新鲜尿液、唾液、子宫分泌液、肝活检或尸检标本、外周血白细胞等,将分泌液、肝活检或尸检标本、外周血白细胞等,将标本接种于人胚肺二倍体传代细胞株上,培养标本接种于人胚肺二倍体传代细胞株上,培养
3、24h24h后染色可见包涵体,而细胞病变需后染色可见包涵体,而细胞病变需2 26 6周才能查见。周才能查见。虽然病毒的分离能证明有虽然病毒的分离能证明有CMVCMV感染的存在,但并不感染的存在,但并不一定能证明与疾病有病原学联系。一定能证明与疾病有病原学联系。1 1、病毒感染、病毒感染 CMVCMV感染感染 5/2/20245褚云卓l抗体检测抗体检测 补体结合试验(补体结合试验(CFCF)、间接血凝试验)、间接血凝试验(PHAPHA)、免疫荧光试验()、免疫荧光试验(IFIF)、免疫印迹试验)、免疫印迹试验(IBIB)、酶联免疫吸附试验()、酶联免疫吸附试验(ELISAELISA)及放射免及放
4、射免疫试验(疫试验(RIARIA)等。等。全自动快速微粒子酶免疫检测法(全自动快速微粒子酶免疫检测法(MEIAMEIA)可对可对IgGIgG和和IgMIgM作出定量分析。作出定量分析。1 1、病毒感染、病毒感染 CMV CMV感染感染 5/2/20246褚云卓lIgMIgM阳性提示患者为现症感染或处于阳性提示患者为现症感染或处于CMVCMV感染感染活动期。活动期。lIgGIgG阳性提示既往感染或潜伏感染。阳性提示既往感染或潜伏感染。lIgGIgG抗体滴度呈抗体滴度呈4 4倍或倍或4 4倍以上增长时,表示倍以上增长时,表示有近期有近期CMVCMV感染。感染。l严重的艾滋病患者血清抗严重的艾滋病患
5、者血清抗CMVCMV抗体可能阴性,抗体可能阴性,故对艾滋病患者来说,故对艾滋病患者来说,CMVCMV血清学检查阴性血清学检查阴性不能排除不能排除CMVCMV感染。感染。5/2/20247褚云卓l抗原检测抗原检测 早期抗原免疫荧光检查(早期抗原免疫荧光检查(DEAFFDEAFF):将肺泡):将肺泡灌洗液、血液白细胞、尿液沉积物、活检或尸检灌洗液、血液白细胞、尿液沉积物、活检或尸检样本接种于成纤维细胞,培养样本接种于成纤维细胞,培养2424小时后用荧光标小时后用荧光标记的单克隆抗体直接测定记的单克隆抗体直接测定CMVCMV的的和和蛋白,该蛋白,该法不仅快速而且敏感性和特异性均较高。法不仅快速而且敏
6、感性和特异性均较高。1 1、病毒感染、病毒感染 CMV CMV感染感染 5/2/20248褚云卓lCMVCMV白细胞抗原血症检测:白细胞抗原血症检测:用免疫细胞化学的方法在外周血白细胞核中对用免疫细胞化学的方法在外周血白细胞核中对65kDa65kDa低低基质磷蛋白(基质磷蛋白(65kDalow-matrix 65kDalow-matrix phosphoproteinphosphoprotein,pp65pp65)进行检测,或利用流式细胞仪荧光标记的单克隆抗体测定进行检测,或利用流式细胞仪荧光标记的单克隆抗体测定白细胞中的白细胞中的CMVCMV抗原,计数细胞病毒抗原的百分比,能提供抗原,计数细
7、胞病毒抗原的百分比,能提供定量数据。定量数据。该方法可在症状出现前检测到该方法可在症状出现前检测到CMVCMV病毒,可定量,以预病毒,可定量,以预测和区分测和区分CMVCMV活动期和无症状感染。可评价抗病毒治疗的效活动期和无症状感染。可评价抗病毒治疗的效果以及检测中枢神经系统感染的艾滋病患者的脑脊液白细果以及检测中枢神经系统感染的艾滋病患者的脑脊液白细胞中胞中CMVCMV,其检测结果与用白细胞或血浆中其检测结果与用白细胞或血浆中CMV DNACMV DNA扩增结扩增结果一致。使早期免疫受抑制或艾滋病患者的活动性果一致。使早期免疫受抑制或艾滋病患者的活动性CMVCMV感染感染的诊断成为可能,该方
8、法简便、快速且敏感性高。的诊断成为可能,该方法简便、快速且敏感性高。5/2/20249褚云卓l免疫组化检查免疫组化检查 将外周血白细胞用抗将外周血白细胞用抗CMVCMV单克隆抗体进单克隆抗体进行免疫组化染色也可快速作出诊断。免疫行免疫组化染色也可快速作出诊断。免疫荧光检测标本中的荧光检测标本中的CMVCMV早期抗原,阳性时早期抗原,阳性时提示提示CMVCMV活动性感染。活动性感染。1 1、病毒感染、病毒感染 CMV CMV感染感染 5/2/202410褚云卓lCMVCMV核酸检测核酸检测 检测和定量检测和定量CMV DNACMV DNA以及以及mRNAmRNA 提取外周血白细胞、血浆、血清中提
9、取外周血白细胞、血浆、血清中CMV DNACMV DNA,采用套式采用套式PCRPCR可诊断活动型可诊断活动型MCVMCV感染,利用逆感染,利用逆转录转录PCRPCR技术检测外周血白细胞中技术检测外周血白细胞中MCV mRNAMCV mRNA,能能够测出完整的病毒复制周期,特异性较普通够测出完整的病毒复制周期,特异性较普通PCRPCR检测检测DNADNA高。高。1 1、病毒感染、病毒感染 CMV CMV感染感染 5/2/202411褚云卓 艾滋病患者、器官移植者当处于艾滋病患者、器官移植者当处于CMVCMV感染的活动感染的活动期时,体内含有较高水平的期时,体内含有较高水平的CMV DNACMV
10、 DNA,伴随着临床伴随着临床症状的出现和用药治疗的失败症状的出现和用药治疗的失败CMV DNACMV DNA的拷贝数会的拷贝数会快速升高。快速升高。因此,因此,RasmussenRasmussen等用外周血白细胞中的等用外周血白细胞中的CMV CMV DNADNA含量来确定艾滋病患者的视网膜炎是否由含量来确定艾滋病患者的视网膜炎是否由CMVCMV感感染引起。但是,用染引起。但是,用PCRPCR方法检测方法检测CMV DNACMV DNA还不能判定还不能判定患者是处于活动期、无症状期还是潜伏期,不能精患者是处于活动期、无症状期还是潜伏期,不能精确评估疾病的进程和用药治疗的效果。确评估疾病的进程
11、和用药治疗的效果。5/2/202412褚云卓l形态学检查形态学检查 取标本涂片,以姬姆萨和瑞氏染色,取标本涂片,以姬姆萨和瑞氏染色,镜检可见多核巨细胞和核内嗜酸性包涵镜检可见多核巨细胞和核内嗜酸性包涵体。体。1 1、病毒感染、病毒感染 HSV-1HSV-1和和HSV-2HSV-2感染感染 5/2/202413褚云卓l病毒分离病毒分离 在感染最初几天取病损处的水泡液或刮片拭子在感染最初几天取病损处的水泡液或刮片拭子或组织标本接种于或组织标本接种于HSVHSV敏感的细胞中,常用的细胞敏感的细胞中,常用的细胞为人胚肾、兔肾细胞、为人胚肾、兔肾细胞、HelaHela细胞等。接种细胞等。接种484896
12、96小小时后,如发现有细胞肿胀、变圆、细胞融合等细胞时后,如发现有细胞肿胀、变圆、细胞融合等细胞病变现象和特征性的核内包涵体便可作出诊断。病变现象和特征性的核内包涵体便可作出诊断。1 1、病毒感染、病毒感染 HSV-1 HSV-1和和HSV-2HSV-2感染感染 5/2/202414褚云卓l免疫学检测免疫学检测 HSVHSV抗原检测主要是用抗原检测主要是用HSVHSV特异性单克隆抗体,特异性单克隆抗体,以免疫荧光或以免疫荧光或ELISAELISA方法直接检测病人组织或分方法直接检测病人组织或分泌物细胞中的泌物细胞中的HSVHSV抗原,若为阳性则诊断为近期抗原,若为阳性则诊断为近期感染感染HSV
13、HSV。HSVHSV抗体检测虽然是临床上最常用检测抗体检测虽然是临床上最常用检测HSVHSV感染的一种手段,但艾滋病患者通常会出现感染的一种手段,但艾滋病患者通常会出现假阴性反应。假阴性反应。1 1、病毒感染、病毒感染 HSV-1 HSV-1和和HSV-2HSV-2感染感染 5/2/202415褚云卓l核酸检测核酸检测 采用采用PCRPCR技术,扩增技术,扩增HSVHSV基因组中一段特异性的基因组中一段特异性的基因序列,是目前检测速度最快且敏感性最高的方基因序列,是目前检测速度最快且敏感性最高的方法,但是阴性不能排除含有法,但是阴性不能排除含有HSVHSV的可能,因为临床的可能,因为临床早期获
14、得的某些样本用早期获得的某些样本用PCRPCR检测是阴性的,另外在检测是阴性的,另外在样本中也可能存在样本中也可能存在PCRPCR反应的抑制剂。在临床诊断反应的抑制剂。在临床诊断较困难时,较困难时,HSVPCRHSVPCR仍将发挥作用,例如可通过仍将发挥作用,例如可通过PCRPCR在艾滋病患者的玻璃体液和皮肤黏膜病损中检测到在艾滋病患者的玻璃体液和皮肤黏膜病损中检测到HSVDNAHSVDNA。1 1、病毒感染、病毒感染 HSV-1 HSV-1和和HSV-2HSV-2感染感染 5/2/202416褚云卓诊断诊断HHV-6HHV-6和和HHV-7HHV-7感染感染l培养:可采取病人血液、唾液、体腔
15、液或疱疹液。培养:可采取病人血液、唾液、体腔液或疱疹液。l特异性病毒抗体:间接免疫荧光法或特异性病毒抗体:间接免疫荧光法或ELISAELISA法检测。法检测。但是由于健康人群中血清抗但是由于健康人群中血清抗HHV-6HHV-6和抗和抗HHV-7HHV-7抗体阳性抗体阳性率均超过率均超过85%85%,因此血清学检测的临床意义不大。,因此血清学检测的临床意义不大。l分子生物学方法:分子杂交或分子生物学方法:分子杂交或PCRPCR方法直接检测标本方法直接检测标本中的病毒核酸。中的病毒核酸。1 1、病毒感染、病毒感染 HHV-6 HHV-6、HHV-7HHV-7和和HHV-8HHV-8感染感染 5/2
16、/202417褚云卓l血清血清HHV-8HHV-8潜伏蛋白潜伏蛋白(latent protein)(latent protein)抗体:抗体:KaposisKaposis肉瘤和肉瘤和B B淋巴细胞瘤患者阳性,艾滋病患者淋巴细胞瘤患者阳性,艾滋病患者血清抗血清抗HHV-8HHV-8潜伏蛋白抗体阳性常预示病人即将发生潜伏蛋白抗体阳性常预示病人即将发生KaposisKaposis肉瘤。肉瘤。l血清抗血清抗HHV-8HHV-8可溶性抗原(可溶性抗原(lyticlytic antigen antigen)的抗体:的抗体:几乎所有几乎所有KaposisKaposis肉瘤病人肉瘤病人和和90%90%男性同性
17、恋男性同性恋HIVHIV感染感染者为阳性,而正常人群阳性率为者为阳性,而正常人群阳性率为25%25%。1 1、病毒感染、病毒感染 HHV-6 HHV-6、HHV-7HHV-7和和HHV-8HHV-8感染感染 5/2/202418褚云卓l疱疹基底部的组织碎片进行涂片及瑞氏或姬姆萨染疱疹基底部的组织碎片进行涂片及瑞氏或姬姆萨染色,查找嗜酸性核内包涵体,或用电子显微镜直接色,查找嗜酸性核内包涵体,或用电子显微镜直接检查水疱液中的典型疱疹病毒。检查水疱液中的典型疱疹病毒。l采用采用PCRPCR方法检测标本中病毒核酸,方法灵敏、准方法检测标本中病毒核酸,方法灵敏、准确。确。l血清学检查多应用血清学检查多
18、应用ELISAELISA法,于发病法,于发病2 2个月内查特异个月内查特异性性IgGIgG和和IgMIgM抗体,有诊断价值。抗体,有诊断价值。1 1、病毒感染、病毒感染 V-Z V-Z感染感染 5/2/202419褚云卓l间接荧光抗体试验(间接荧光抗体试验(IFAIFA)和酶联免疫试验(和酶联免疫试验(EIAEIA)最理想的最理想的EBEB病毒血清学检测组分是病毒血清学检测组分是VCA-VCA-IgGIgG、EA-EA-IgGIgG和和EBNAEBNA,这种组合,单份血清即可给这种组合,单份血清即可给90%95%90%95%的患者进行精确诊断分类。的患者进行精确诊断分类。l嗜异性抗体和嗜异性抗
19、体和EBEB病毒特异性抗体病毒特异性抗体IgGIgG 嗜异性凝集效价从嗜异性凝集效价从1 1:501501:224224均具有临床价值,均具有临床价值,EBEB病毒特异病毒特异性抗体性抗体IgGIgG滴度滴度1 1:8080即有诊断价值。即有诊断价值。l检测检测EBEB病毒的核酸病毒的核酸 常用的方法有:冷冻切片和石蜡切片的原位杂交试验、细常用的方法有:冷冻切片和石蜡切片的原位杂交试验、细胞悬液的杂交、点杂交和胞悬液的杂交、点杂交和SouthernSouthern印迹杂交等印迹杂交等 1 1、病毒感染、病毒感染 V-Z V-Z感染感染 5/2/202420褚云卓2 2、细菌感染、细菌感染 机会
20、性细菌感染是艾滋病的主要致死因素,机会性细菌感染是艾滋病的主要致死因素,艾滋病患者因反复发生细菌感染而多次住院治疗。艾滋病患者因反复发生细菌感染而多次住院治疗。凡是医院及社区人群感染的细菌均可引起艾滋病患凡是医院及社区人群感染的细菌均可引起艾滋病患者感染,常见的细菌有者感染,常见的细菌有金黄色葡萄球菌、凝固酶阴金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、假单胞菌、肠性葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、假单胞菌、肠杆菌、流感嗜血杆菌和分枝杆菌杆菌、流感嗜血杆菌和分枝杆菌等。尤其是正常免等。尤其是正常免疫人群很少感染的细菌如非结核分枝杆菌等,常引疫人群很少感染的细菌如非结核分枝杆菌等,常引
21、起艾滋病患者机会性感染。起艾滋病患者机会性感染。5/2/202421褚云卓铜绿假单胞菌(铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)革兰阴性,长短不一,革兰阴性,长短不一,单鞭毛。单鞭毛。生长温度生长温度25254242。氧化酶阳性。氧化酶阳性。还原硝酸盐、分解尿素、还原硝酸盐、分解尿素、精氨酸酶阳性。精氨酸酶阳性。5/2/202422褚云卓铜绿假单胞菌(铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)5/2/202423褚云卓l标本直接检查标本直接检查 涂片染色镜检:抗酸染色和荧光染色涂片染色镜检:抗酸染色和荧光染色 核酸检测核酸检测 :MTDMTD试验试验 AMPLICOR MTBAMPLICOR M
22、TB方法方法 l分离培养分离培养 :体培养法和液体培养法:体培养法和液体培养法 2 2、细菌感染、细菌感染 结核分枝杆菌结核分枝杆菌 5/2/202424褚云卓l鸟分枝杆菌鸟分枝杆菌 菌体呈杆状,有时亦呈球杆状或丝状。卵黄培菌体呈杆状,有时亦呈球杆状或丝状。卵黄培养基表现为淡黄色,在油酸卵蛋白琼脂培养基上菌养基表现为淡黄色,在油酸卵蛋白琼脂培养基上菌落呈光滑无色素透明样的菌落,菌落中心较厚。落呈光滑无色素透明样的菌落,菌落中心较厚。鸟型分枝杆菌特异性抗原检测,或用频率脉冲鸟型分枝杆菌特异性抗原检测,或用频率脉冲电子捕获气液色谱法检测细菌中的电子捕获气液色谱法检测细菌中的“结核硬脂酸结核硬脂酸”
23、,或用特异性,或用特异性RNARNA或或DNADNA探针进行杂交试验,或用探针进行杂交试验,或用PCRPCR等方法鉴定标本中的鸟型分枝杆菌。等方法鉴定标本中的鸟型分枝杆菌。2 2、细菌感染、细菌感染 非非结核分枝杆菌结核分枝杆菌 5/2/202425褚云卓l龟分枝杆菌龟分枝杆菌 菌体呈多态性,可表现为细而长或短而粗的菌体呈多态性,可表现为细而长或短而粗的菌体,幼龄菌呈强酸性,陈旧培养物可渐渐失去抗菌体,幼龄菌呈强酸性,陈旧培养物可渐渐失去抗酸性。此菌为快速生长菌,培养要求不高,在血琼酸性。此菌为快速生长菌,培养要求不高,在血琼脂培养基及麦康凯培养基上均生长良好,通常脂培养基及麦康凯培养基上均生
24、长良好,通常1 13 3天即可长出天即可长出1 12mm2mm直径的菌落,菌落表面光滑、湿直径的菌落,菌落表面光滑、湿润、有光泽、乳白色或淡黄色。润、有光泽、乳白色或淡黄色。2 2、细菌感染、细菌感染 非非结核分枝杆菌结核分枝杆菌 5/2/202426褚云卓l偶发分枝杆菌偶发分枝杆菌 菌体呈棒状、球状或细丝状,偶尔菌体亦可呈念珠状或表现菌体呈棒状、球状或细丝状,偶尔菌体亦可呈念珠状或表现为膨胀的菌体。在液体培养基中菌体分叉状。此菌为快速生长型为膨胀的菌体。在液体培养基中菌体分叉状。此菌为快速生长型菌,菌,5 5天即可长出肉眼可见的菌落,菌落呈平滑、柔软、奶油状,天即可长出肉眼可见的菌落,菌落呈
25、平滑、柔软、奶油状,菌落亦可呈半球状、蜡样分裂叶状,亦常出现暗淡、粗糙、中心菌落亦可呈半球状、蜡样分裂叶状,亦常出现暗淡、粗糙、中心呈堆叠的菌落。在孔雀绿培养基上菌落可呈绿色,在玉米粉琼脂呈堆叠的菌落。在孔雀绿培养基上菌落可呈绿色,在玉米粉琼脂培养基上,菌落粗糙呈致密索状。光滑型菌落其周围有宽阔的网培养基上,菌落粗糙呈致密索状。光滑型菌落其周围有宽阔的网状物。状物。2 2、细菌感染、细菌感染 非非结核分枝杆菌结核分枝杆菌 5/2/202427褚云卓真菌感染真菌感染 卡氏肺孢子虫感染卡氏肺孢子虫感染 l病原学检查病原学检查 可从患者的痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中查可从患者的痰液、支气管肺
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