弧菌和弯曲菌ppt课件.ppt
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1、弧菌和弯曲菌弧菌和弯曲菌医学检验系临床微生物及免疫学教研室井申荣第一部分第一部分 弧弧 菌菌概概 述述弧菌科(Vibrionaseae)包括一群氧化酶阳性、具有端极鞭毛、动力阳性的细菌,有4个菌属,其中,弧菌属是一群氧化酶阳性,发酵葡萄糖,对弧菌抑制剂O/129(二氨基二异丙基喋啶)敏感的细菌。弧菌属(Vibrio)广泛分布于自然界,尤以水中为多,有100多种。主要致病菌为霍乱弧菌和副溶血弧菌(致病性嗜盐菌)。前者引起霍乱;后者引起食物中毒。霍霍 乱乱 弧弧 菌菌霍乱弧菌(V.cholera)是人类霍乱的病原体,霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行,主要表现为剧烈
2、的呕吐、腹泻、失水,死亡率甚高。属于国际检疫的烈性传染病。霍乱弧菌包括两个生物型:古典生物型(Classical biotype)和埃尔托生物型(EL-Tor bio-type)。这两种型别除个别生物学性状稍有不同外,形态和免疫学性基本相同,在临床病理及流行病学特征上没有本质的差别。自1817年以来,全球共发生了七次世界性大流行,前六次病原是古典型霍乱弧菌,第七次病原是埃尔托型所致。1992年10月在印度东南部又发现了一个引起霍乱霍乱流行的流行的新血清型菌株(新血清型菌株(01390139),它引起的霍乱在临床表现及传播方式上与古典型霍乱完全相同,但不能被01群霍乱弧菌诊断血清所凝集。该菌株在
3、水中的存活时间较01群霍乱弧菌长,因而有可能成为引起世界性霍乱流行的新菌株。一、生物学性状一、生物学性状(一)形态染色(一)形态染色霍 乱 弧 菌 呈 弧弧 形形 或或 逗逗 点点 形形 态态,大 小 为1.42.60.50.8m。革革兰兰氏氏阴阴性性菌菌,菌菌体体一一端有单根鞭毛和菌毛,无荚膜与芽胞。端有单根鞭毛和菌毛,无荚膜与芽胞。取霍乱病人米泔水样粪便作活菌悬滴观察,可见细菌运动极为活泼,呈流星穿梭运动运动极为活泼,呈流星穿梭运动。图注:霍乱弧菌的鞭毛()和它可溶解的鞘膜()负染,3100图注:分裂中的霍乱弧菌冰冻蚀刻,70000(二)培养特性(二)培养特性霍乱弧菌为需氧或兼性厌氧菌需氧
4、或兼性厌氧菌;营营养养要要求求不不高高,耐耐碱碱不不耐耐酸酸,在pH8.89.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一pH不易生长,故碱碱性性蛋蛋白白胨胨水水可可作作为为选选择性增殖霍乱弧菌的培养基择性增殖霍乱弧菌的培养基;在碱性平板上菌落直径为2mm,圆圆形形,光光滑滑,透明透明。常用的选择培养基选择培养基为硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板(TCBSTCBS),霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落,因发酵蔗糖产酸而使菌落呈黄色菌落呈黄色。(三)生化反应(三)生化反应两个生物型的霍乱弧菌都能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖,产酸不产气。迟缓发酵乳糖,不分解阿拉伯糖。氧化酶、明胶酶试
5、验均阳性。能产生靛基质,霍乱红反应阳性El TorEl Tor型霍乱弧菌与古典型霍乱弧型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同菌生化反应有所不同El Tor型VP试验为阳性,能产生强烈的溶血素,溶解羊红细胞,在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环,古典型试验VP试验为阴性,不溶解羊红细胞。个别EL Tor型霍乱弧菌株亦不溶血。霍乱弧菌的抗原结构特性O抗原H抗原属共同抗原群特异性型特异性耐热性(100 2h)(四)抗原性1抗原结构:2 2分群和分型:分群和分型:根据O抗原的特异性,可将霍乱弧菌分成139139个血清群个血清群。根据是否与O1抗血清凝集分两大群,凡能与O1群抗血清发生凝集的
6、称为O1O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌;凡不被O1群抗血清凝集的其它血清群统称为非非O1O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌。O1群霍乱弧菌的血清分型型别别名O抗原成份原型稻叶型(Inaba)A、C异型小川型(Ogawa)A、B中间型彦岛型(Hikojima)A、B、C血清型:O1群霍乱弧菌的菌体抗原由A、B、C三个抗原成份三个抗原成份组成生生物物型型:O1群霍乱弧菌有古古典典生生物物型型和和E1 E1 Tor Tor 生生物物型型之分,两个生物型具有相同的血清型。我国流行以El Tor、小川型霍乱弧菌为主。噬噬菌菌体体分分型型:对噬菌体的敏感性进行分型,其中较为实用的是第组和第组噬菌体。霍乱弧菌两个生物型的鉴
7、别性状古典型E1Tor型溶血(1%绵羊红细胞)d血凝(2.5%鸡红细胞)V-P试验多 粘 菌 素 B敏 感 试 验(50U/片)噬 菌 体 组 裂 解(106/ml)噬 菌 体 组 裂 解(106/ml)以上为阳性;以上为阴性;阳性霍乱弧菌的变异性形态变异弧型直杆状 多形 菌落变异S RL 溶血性变异(El Tor型)溶血性 非溶血性 传代 毒力变异强毒株 弱毒株 无毒株 血清型别变异小川型 稻叶型(五)变异性:(五)变异性:(六)抵抗力(六)抵抗力霍乱弧菌古古典典生生物物型型对对外外环环境境抵抵抗抗力力较较弱弱,EL-TorEL-Tor生物型抵抗力较强。生物型抵抗力较强。霍霍乱乱弧弧菌菌对对
8、热热、干干燥燥、日日光光、化化学学消消毒毒剂剂和和酸酸均很敏感,耐低温,耐碱而不耐酸均很敏感,耐低温,耐碱而不耐酸。霍乱弧菌对链霉素、氯霉素和四环素敏感,但El Tor生物型对一定浓度的多粘菌素B及庆大霉素有耐药性。二、致病性和免疫性二、致病性和免疫性1 1 1 1致病物质致病物质致病物质致病物质(1)鞭毛、菌毛、粘液素酶鞭毛、菌毛、粘液素酶(2)霍乱肠毒素霍乱肠毒素(cholera enterotoxin)霍乱肠毒素本质是蛋白质,不耐热。对蛋白酶敏感而对胰蛋白酶抵抗。该毒素属外毒素,具有很强的抗原性。霍霍乱乱肠肠毒毒素素1个A亚单位毒性单位A1肽链具有激活腺苷酸环化酶的酶活性A2肽链结合B亚
9、单位;参与转位5个B亚单位(46)结合单位特异地识别肠上皮细胞膜上的神经节苷脂受体致病机理致病机理霍乱弧菌胃对酸敏感,很快被杀死肠胃酸降低或缺乏,菌体增多鞭毛、菌毛、粘液素酶绒毛上大量繁殖CT的B亚单位结合神经节苷脂受体形成膜通道A1肽链进入细胞ATP cAMP肠粘膜上皮细胞分泌亢进肠液大量分泌大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻大量脱水和失盐发生代谢性酸中毒,血循环衰竭,甚至休克或死亡激活腺苷酸环化酶系统2 2所致疾病所致疾病引起烈性肠道传染病的霍乱,为我国的法定传染病(甲类),表表现现为为剧剧烈烈的的上上吐吐下下泻泻,导导致致严严重重的的脱脱水水、酸酸中中毒毒、痉痉挛挛、尿尿闭闭、休克和
10、死亡。休克和死亡。人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者,主要通过污染的水源或饮食物经口传染(粪口途径粪口途径)。患者出现上吐下泻,泻出物出现上吐下泻,泻出物呈呈“米泔水样米泔水样”,并含大量弧菌,此为本病典型的特征,并含大量弧菌,此为本病典型的特征。3 3免疫性免疫性患过霍乱的人可获得获得牢固的免疫力牢固的免疫力,再感染者少见。病后小肠内可出现分泌型分泌型lgAlgA。三、微生物学诊断三、微生物学诊断由于霍乱流行迅速,且在流行期间发病率及死亡率均高,危害极大,因此早期迅速和正确的诊断,对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。(一)标本采集:标本以粪便为主标本以粪便为主,一般米泔水样便米泔水样便采取
11、13ml,成形便采取蚕豆大小。在某些情况下,亦可采取呕吐物和尸体肠内容呕吐物和尸体肠内容物物作检材。检验程序检验程序(三)检验方法及鉴定(三)检验方法及鉴定1 1直接镜检:直接镜检:1)动动力力观观察察:采取病人“米泔水样”大便或呕吐物制成悬滴片,观察细菌动力观察细菌动力,可见可见流星或穿梭状动力的细菌流星或穿梭状动力的细菌。2)制动试验:制动试验:标标本本,霍霍乱乱多多价价诊诊断断血血清清(效价1:64),用暗视野镜观察,3 3分钟内分钟内运动被抑制运动被抑制的即为阳性的即为阳性,此法优点是快快速速而而特特异异操操作作简简便便,但必须有数量较多的弧菌才检出。3)涂片染色涂片染色:革兰氏染色阴
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