细菌感染的检测方法和防治原则.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,医学微生物学,细菌感染的检测方法和防治原则,第1页,细菌感染检测方法与,防治标准,2,细菌感染的检测方法和防治原则,第2页,本章重点与难点,细菌感染性标本采集标准,细菌感染试验室检验程序,惯用血清学诊疗方法,适应性免疫取得方式,人工免疫概念和惯用免疫制剂,细菌感染治疗标准,3,细菌感染的检测方法和防治原则,第3页,第一节,细菌感染试验诊疗,4,细菌感染的检测方法和防治原则,第4页,细菌感染试验室检验方法,5,细菌感染的检测方法和防治原则,第5页,一,.,临床标本采集与运输标准,早期采集,无菌操作,选感染部位,最正确时间采集,双份血清,标本采集,做好标识,置于密闭容器内,尽快送检,标本运输,6,细菌感染的检测方法和防治原则,第6页,二、细菌检测,7,细菌感染的检测方法和防治原则,第7页,（一）细菌形态学检验,暗视野,显微镜,相差,显微镜,主要用于检验在生活状态下细菌动力及其运动情况,不染色,标本,8,细菌感染的检测方法和防治原则,第8页,细菌染色,革兰,染色,抗酸,染色,荧光金胺,O,染色,其它,特殊染色,9,细菌感染的检测方法和防治原则,第9页,革兰染色,葡萄球菌（革兰染色阳性,）,大肠埃希菌（革兰染色阴性,）,10,细菌感染的检测方法和防治原则,第10页,细菌检验普通程序,标本,脓,/,痰,/,尿,血、脑脊液等,涂片、染色、镜检,分离培养,纯培养,生化反应,血清学判定,药敏试验,动物试验,增菌,(,二,),细菌分离培养与判定,11,细菌感染的检测方法和防治原则,第11页,细菌分离培养,培养基成份,pH,培养时间,温度,气体环境,在血平板上肺炎链球菌菌落,12,细菌感染的检测方法和防治原则,第12页,生化试验,肠道感染细菌在含铁双糖培养基上生化反应,13,细菌感染的检测方法和防治原则,第13页,血清学判定,利用已知特异性抗体检验未知纯培养细菌,对细菌进行种、群、型判定,沙门菌血清学判定,摘自,临床微生物检验,（第五版）人民卫生出版社,14,细菌感染的检测方法和防治原则,第14页,药品敏感试验,纸片扩散法、稀释法、,E-test,法,最低抑菌浓度（,minimum inhibitory concentration,MIC,）,能够完全抑制培养基中细菌生长最低药品浓度,最低杀菌浓度（,minimum bactericidal concentration,MBC,）,能够杀死培养基中细菌最低药品浓度,15,细菌感染的检测方法和防治原则,第15页,纸片扩散法,含有定量抗生素纸片贴在已接种待检病原菌琼脂平板上，纸片上抗生素向周围琼脂中扩散，形成了逐步减小药品浓度梯度。因为致病菌对各种抗生素敏感程度不一样，在药品纸片周围便出现抑制病原菌生长而形成大小不一样抑菌环。依据抑菌环有没有和大小来判定试验菌对该抗菌药品耐药或敏感。,16,细菌感染的检测方法和防治原则,第16页,稀释法,以一定浓度抗菌药品与含有待检细菌培养基进行一系列不一样倍数稀释（通常为双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓度。,稀释法,琼脂稀释法,使用琼脂培养基,肉汤稀释法,使用肉汤培养基,17,细菌感染的检测方法和防治原则,第17页,抗生素连续梯度法（,E-test,法）,将稀释法和扩散法原理相结合，使用预先设定稳定且连续抗菌药品浓度梯度，采取琼脂培养基培养以确定不一样抗菌药品对微生物最低抑菌浓度（,MIC,）。,18,细菌感染的检测方法和防治原则,第18页,将培养基上分离可疑致病菌配制成纯菌液，放入自动微生物判定及药敏分析系统中，经过计算机自动扫描、读数、分析、最终汇报判定及药敏结果。,摘自,临床微生物检验,（第五版）人民卫生出版社,19,自动微生物判定及药敏分析系统,细菌感染的检测方法和防治原则,第19页,自动微生物判定及药敏分析系统,药敏检测原理,微型化肉汤稀释试验,依据,CLSI,标准得到对应敏感度：敏感、中度敏感和耐药,微生物数码判定原理,计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现频率总和,性能特点,自动化程度较高、检测速度快、可判定细菌种类及药敏试验种类多、数据处理软件功效强大、结果准确可靠,系统组成,测试卡（板）、菌液接种器、培养和监测系统、数据管理系统,自动微生物判定及药敏分析系统,20,细菌感染的检测方法和防治原则,第20页,（三）细菌抗原检测,凝集试验,用已知抗体检测待检标本中未知颗粒性抗原。,IgG,Fc,段与金葡菌,SPA,结合，,Fab,段与细菌抗原结合后，可使金葡菌发生肉眼可见凝集现象。,协同凝集试验,用已知荧光抗体检测待检标本中未知抗原，借助荧光显微镜观察。,免疫荧光技术,对流免疫电泳,利用双向琼脂扩散与电泳技术相结合方法。因为电泳和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动，在百分比适当处形成肉眼可见沉淀线。,用酶标识抗体检测特异性可溶性抗原试验技术。,酶免疫技术,21,细菌感染的检测方法和防治原则,第21页,PCR,（含,RT-PCR,、,real time PCR,等）,核酸杂交,技术,基因芯片技术,16S rRNA,基因序列分析,（四）细菌核酸检测,22,细菌感染的检测方法和防治原则,第22页,（五）生物芯片技术,将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上，在一定条件下进行生化反应。用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果，经过特定仪器读取与搜集数据，并用软件进行数据分析，从而判断样品中靶分子种类和数量。,23,细菌感染的检测方法和防治原则,第23页,生物芯片分类,基因芯片（,gene chips,），又称,DNA,芯片,蛋白质芯片,细胞芯片,组织芯片,糖芯片,24,细菌感染的检测方法和防治原则,第24页,生物芯片用途,微生物感染快速诊疗：对一些病原体，如细菌、真菌和病毒进行多重快速检验与判别；,微生物变异机制和耐药机制研究；,微生物基因分型及分子流行病学调查；,微生物基因组及后基因组研究：可研究病原体基因序列、转录表示、抗原表示及细菌糖键特异性研究；,抗微生物感染药品研制等。,25,细菌感染的检测方法和防治原则,第25页,三、细菌感染血清学诊疗,用已知细菌或其特异性抗原检测病人血清或其它体液中抗体及其效价改变，能够作为感染性疾病辅助诊疗。,因为本试验多采取病人血清检测抗体，故常称为血清学诊疗（,serological diagnosis,）。,普通适合用于抗原性较强细菌，以及病程较长感染性疾病。也可用于调查人群对某病原菌免疫应答水平以及检测疫苗接种后预防效果。,26,细菌感染的检测方法和防治原则,第26页,细菌性感染血清学诊疗,血清学试验,疾病举例,直接凝集反应,肥达试验、外斐试验,乳胶凝集试验,脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌,沉淀试验,梅毒,间接免疫荧光技术,各类微生物感染,补体结合试验,Q,热,中和试验,风湿热（抗,O,试验）,酶联免疫吸附试验,各类微生物感染,27,细菌感染的检测方法和防治原则,第27页,第二节,细菌感染特异性预防,28,细菌感染的检测方法和防治原则,第28页,机体取得特异性免疫力方式,自然免疫,人工免疫,主动免疫：疫苗或类毒素等,被动免疫：抗毒素或丙种球蛋白等,主动免疫：隐性或显性感染,被动免疫：取得母体,Ab(,胎盘,/,初乳,),29,细菌感染的检测方法和防治原则,第29页,一、人工主动免疫,人工主动免疫（,artificial active immunization,）是将疫苗或类毒素接种于人体，刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，机体主动产生取得性免疫力一个防治微生物感染办法，主要用于特异性预防。,采取人工主动免疫方法通常称为预防接种（,prophylactic inoculation,）或疫苗接种（,vaccination,）。,特异性预防,疫苗,类毒素,30,细菌感染的检测方法和防治原则,第30页,疫苗种类,死疫苗：伤寒疫苗、霍乱疫苗,活疫苗（减毒活疫苗）：卡介苗（,BCG,）,亚单位疫苗：肺炎链球菌荚膜多糖,基因工程疫苗,载体疫苗,核酸疫苗,31,细菌感染的检测方法和防治原则,第31页,死疫苗,死疫苗（,killed vaccine,）：用物理、化学方法杀死病原微生物，但仍保持其免疫原性生物制剂。,惯用有：伤寒、霍乱、流行性脑膜炎、钩端螺旋体病等灭活疫苗。,32,细菌感染的检测方法和防治原则,第32页,活疫苗（减毒活疫苗）,减毒活疫苗（,attenuated vaccine,）是经过毒力变异或人工选择法（如温度敏感株）而取得减毒或无毒株，或从自然界直接选择出来弱毒或无毒株经培养后制成疫苗。,惯用有：,BCG,、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎、麻疹等减毒活疫苗。,33,细菌感染的检测方法和防治原则,第33页,活疫苗与死疫苗比较,区分点,活疫苗,死疫苗,制品特点,减毒或无毒疫苗,死菌，仍保持免疫原性,制备方法,经过非正常培养减毒株,经过物理化学方法使病原体失活,接种次数和接种量,1次，量小,2,3,次，量大,接种反应,可在体内增殖，类似轻型感染或隐性感染,在体内不增殖，可出现发烧、全身或局部肿痛等反应,免疫类型,体液免疫和细胞免疫,体液免疫,免疫效果,1,5年,0.5,1年,毒力回升与安全性,有可能，对免疫缺点者有危险,不可能，安全性好,疫苗稳定性,相对不稳定,相对稳定,保留,不易保留，4存活2周，真空冻干可长久保留,易保留，4可保留1年以上,34,细菌感染的检测方法和防治原则,第34页,新型疫苗,亚单位疫苗,基因工程疫苗,核酸疫苗,重组载体疫苗,35,细菌感染的检测方法和防治原则,第35页,亚单位疫苗,利用微生物保护性抗原制成不含有核酸、能诱发机体产生免疫应答疫苗，称为亚单位疫苗（,subunit vaccine,）。,举例,肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌表面荚膜多糖，钩端螺旋体外膜蛋白等。,36,细菌感染的检测方法和防治原则,第36页,基因工程疫苗,利用基因工程技术把编码病原体保护性抗原表位目标基因，导入原核或真核表示系统后，用表示保护性抗原所制成疫苗称为基因工程疫苗（,gene engineered vaccine,）。,37,细菌感染的检测方法和防治原则,第37页,重组载体疫苗,将编码某一蛋白抗原基因转入减毒病毒或细菌而制成疫苗。转入目标基因可整合到细菌或病毒基因组上或以质粒形式存在。,38,细菌感染的检测方法和防治原则,第38页,核酸疫苗,核酸疫苗（,nucleic acid vaccine,）也称,DNA,疫苗。是将编码保护性抗原基因重组到质粒真核表示载体上，然后将重组质粒,DNA,直接注射到宿主体内，外源基因在体内所表示抗原能刺激机体产生免疫应答。,39,细菌感染的检测方法和防治原则,第39页,类毒素,外毒素经,0.3%,0.4%,甲醛处理后，失去了毒性但仍保持免疫原性生物制品。加入吸附剂（佐剂）氢氧化铝后便制成精制类毒素（,toxoid,）。,吸附剂可延缓类毒素在体内吸收时间，刺激机体产生足量抗毒素。,举例：白喉类毒素、破伤风类毒素,40,细菌感染的检测方法和防治原则,第40页,二、人工被动免疫,人工被动免疫（,artificial passive immunization,）是输入含有特异性抗体免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体马上取得特异性免疫力过程，可用于一些急性传染病紧急预防和治疗。,41,细菌感染的检测方法和防治原则,第41页,抗毒素,(antitoxin),将类毒素或外毒素给马进行屡次免疫后，待马匹产生高效价抗体后采血，分离血清，提取其免疫球蛋白精制成抗毒素制剂。,主要用于外毒素所致疾病治疗和紧急预防。临床惯用有破伤风、白喉精制抗毒素、肉毒抗毒素以及气性坏疽多价抗毒素等。,使用这种异种抗毒素时应注意防止,型超敏反应发生。,42,细菌感染的检测方法和防治原则,第42页,丙种球蛋白,血清丙种球蛋白是从正常人血浆中提取丙种球蛋白制剂。,胎盘丙种球蛋白是从健康产妇胎盘或婴儿脐带血液中提制而成，主要含有丙种球蛋白。,主要用于对一些疾病应急预防及烧伤患者预防细菌感染。,43,细菌感染的检测方法和防治原则,第43页,两种人工免疫方法比较,区分点,人工主动免疫,人工被动免疫,免疫物质,抗原,抗体或细胞因子等,接种次数,13次,1次,免疫出现时间,慢（注射后,24w）,快（注射后马上出现）,免疫维持时间,长（数月多年）,短（,23w）,用途,多用于预防,多用于治疗或,紧急,预防,44,细菌感染的检测方法和防治原则,第44页,第三节,细菌感染治疗标准,45,细菌感染的检测方法和防治原则,第45页,主要采取抗菌药品来治疗细菌感染。,抗菌药品普通是指含有杀菌或抑菌活性药品以及由微生物合成抗生素类药品。,正确合理应用抗菌药品是提升疗效、降低不良反应发生率以及降低或减缓细菌耐药性发生关键。,46,细菌感染的检测方法和防治原则,第46页,抗菌药品治疗性应用基本标准,诊疗为细菌性感染者，方有指征应用抗菌药品；,尽早查明感染病原，依据病原种类及细菌药品敏感试验结果选取抗菌药品；,按照药品抗菌作用特点及其体内过程特点选择用药；,抗菌药品治疗方案应综合患者病情、病原菌种类及抗菌药品特点制订。,47,细菌感染的检测方法和防治原则,第47页,复习思索题,取脑脊液进行细菌感染检验，用什么免疫学方法能够进行快速诊疗？,检验病原菌抗原和血清中特异性抗体选取免疫学方法相同吗？为何？,自动微生物判定和药敏分析系统原理和特点是什么？,若检测细菌核酸，可选择试验方法有哪些？其原理与特点是什么？,紧急预防细菌感染时应采取方法是什么？为何？,48,细菌感染的检测方法和防治原则,第48页,课外阅读资料目录,微生物学史,，宋大康著，中国农业大学出版社，,临床微生物学检验（第五版），倪语星、尚红主编，人民卫生出版社，,49,细菌感染的检测方法和防治原则,第49页,中英文关键词,血清学诊疗,serological diagnosis,最低抑菌浓度,minimum inhibitory concentration,MIC,最低杀菌浓度,minimum bactericidal concentration,MBC,基因芯片技术,gene chips,人工主动免疫,artificial active immunization,人工被动免疫,artificial passive immunization,预防接种,prophylactic inoculation,疫苗接种,vaccination,死疫苗,killed vaccine,减毒活疫苗,attenuated vaccine,亚单位疫苗,subunit vaccine,基因工程疫苗,gene engineered vaccine,核酸疫苗,nucleic acid vaccine,类毒素,toxoid,50,细菌感染的检测方法和防治原则,第50页,本课件中没有特殊注明图片，均为首都医科大学张力平教授提供。,51,细菌感染的检测方法和防治原则,第51页,