疫苗专题知识讲座课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,疫苗专题知识讲座,*,疫苗专题知识讲座,疫苗,疫苗简介,疫苗的作用,疫苗种类,疫苗标准,不同种类疫苗的特点,2,疫苗专题知识讲座,疫苗简介,疫苗的最初概念追溯到罗马时代，Primo认为疯狗的肝可以具有防治狂犬病的功能。,人们用,天花的干痂,来,预防天花,。,直到1796年爱德化.杰纳大夫在实验室中，用一种比较温和的奶牛的疾病牛痘感染人类，发现牛痘感染过的人不会再为天花所感染，从而获得了第一次真正意义上的疫苗。,天花是一种致死率很高的烈性疾病，即使幸存下来，也经常产生永久性的毁容、神志错乱、失眠等后遗症。,杰纳医生把,牛痘脓疮,中得到的,渗出液注射,到,8岁,的,男孩,身上，经过,3次注射,，这个男孩对天花有了,完全的抵抗力,。终于发现了疫苗的基本原则。,3,疫苗专题知识讲座,疫苗,19世纪研制了狂犬病疫苗,白喉疫苗,破伤风疫苗,20世纪疫苗得到了广泛的应用。,疫苗,是医学上最潜力的用于疾病预防和治疗的,防御物质,它可以使其接受者在体内,建立,起对入侵物质感染的,免疫抗性,，,诱导,接受者在体内产生其与诱导物发生反应的,抗体,并诱发产生专一性的,免疫反应,从而,保护,接受者免受疾病的侵染。,4,疫苗专题知识讲座,疫苗的作用,注射疫苗可以,激活免疫系统，,使接受者诱导产生致病物质的抗体。,人类免疫系统分为体液免疫和细胞免疫。,5,疫苗专题知识讲座,体液免疫,体液免疫是由血液和体液中的,B淋巴细胞,产生形成,抗体,与抗原专一性结合使其失活而表现出的免疫能力,主要存在于体液中。,6,疫苗专题知识讲座,细胞免疫,细胞免疫是指主要由各种淋巴细胞来执行的免疫功能。,分类:,MHC型,MHC型,7,疫苗专题知识讲座,MHC,MHC是指抗原经过一系列复杂的传递过程有MHC型分子（,主要是组织相容性抗原I型,）加工后，产生一些,传递信号,的,小肽,激活,CD8T细胞,，而CD8T细胞可以通过释放,水解酶和其他化合物,把受病原物质感染或变异的细胞杀死。,8,疫苗专题知识讲座,MHC,MHC型是指,外源抗原,通过细胞,内吞,噬，经过MHC型分子（,主要组织相容性抗原II型,）加工后，,激活,CD4T,细胞。激活的CD4T细胞可,辅助激活,抗原专一性的B细胞，,它能,产生杀伤性T细胞,，并进一步激活更多种类的T细胞，从而杀死外来病原物。,9,疫苗专题知识讲座,免疫机制,MHC,MHC,MHC,水解酶,CD8,CD4,体液免役,细胞免役,10,疫苗专题知识讲座,疫苗种类,减毒疫苗：,降低致病物的毒性的疫苗，例如小儿麻痹糖丸。效果较好，因致病物具有一定的活性，有少量的人具有副作用，不能令人很满意。,灭活疫苗：,致病物灭活，安全性很好，效果较差，需要多次强化免疫的疫苗,基因工程疫苗：,使用活体非致病性载体系统，删除致病基因，保留病原物质引起的免疫反应的能力的片段，这些片段能够携带一些与它本身完全无关的致病物质的抗原决定簇，生产基因工程活体疫苗，该方法可以针对特定的致病物质产生更强的免疫反应。,DNA疫苗：,1993年将DNA直接注射入小鼠骨骼肌肉细胞后可引起特异性的免疫反应，1994在日内瓦召开专题会议将这种由核酸引起的免疫反应的疫苗定义为核酸疫苗或DNA疫苗。,11,疫苗专题知识讲座,疫苗标准,一是安全性,二是有效性,12,疫苗专题知识讲座,传统疫苗,减毒疫苗,灭活疫苗,传统疫苗的作用是,灭活,或,降低,致病物质的毒性。,13,疫苗专题知识讲座,传统疫苗的不足,局限性表现在：,1）、有些致病物质无法在培养基上生长，所以很很多疾病没有方法获得疫苗,2）、动物和人类的病毒需要在动物细胞中培养，其操作成本高,3）、培养的动物和人类病毒其生长速度和产量一般都很低，这使得疫苗的生产成本很高,4）、需要对实验室以及参加试验的操作人员采取保护措施，以保证他们不会被致病物质污染；,5）疫苗中的致病物质在疫苗生产过程中有可能没有完全杀死或充分减毒，这会导致疫苗中含有高毒性致病物质，进而使得疾病在更大的范围内传播；,6）、监督菌株有可能发生突变，因此必须要连续不断地对减毒菌株进行毒性检测，以保证该菌株不变成强致病性菌株,7）、有些疾病（例如艾滋病）用传统的疫苗防治收效甚微；,8）、绝大多数的现行疫苗的有效期都很短，并且常常需要冷冻保存，这就增大了在广大的、尚未电气化的农村推广使用疫苗的难度。,14,疫苗专题知识讲座,基因工程疫苗,基因工程疫苗：将不同的外源基因导入肿瘤细胞（杂交瘤）后，再将其制成疫苗。,乙肝疫苗（无毒性、无感染能力、但具有较强的免疫原性）,15,疫苗专题知识讲座,重组疫苗的常见种类,病 原 物 质,疾病（主要医学特征）,病毒类,巨细胞病毒,登革病毒,甲肝病毒A,乙肝病毒B,单纯疱疹病毒ll,人类免疫缺陷性病毒,流感病毒A、B,日本脑炎病毒,副流感病毒,狂犬病毒,呼吸道合胞病毒,轮状病毒,水痘-带壮疱疹病毒,黄热病毒,感染婴幼儿和免疫能力低下的人,出血热,高烧、肝损坏、低死亡率,长期肝损坏、高死亡率,生殖器官溃疡,获得性免疫缺陷综合症,急性呼吸系统病毒,脑炎,上呼吸道感染,脑炎,出现上下呼吸道病斑,急性婴幼儿肠胃炎,水痘（出现轻微的内部及外部病斑）,心脏、肾和肝脏病斑,细菌类,百日咳杆菌,破伤风杆菌,致腹泻大肠杆菌,流感嗜血杆菌,麻风分枝杆菌,结核杆菌,淋病奈瑟球菌,脑膜炎奈瑟球菌,伤寒杆菌,志货菌属,A组链球菌,B组链球菌,肺炎链球菌,霍乱弧菌,百日咳,破伤风（颈部和额部肌肉痉挛）,腹泻,脑膜炎、败血症,麻风病（外周神经感觉丧失、毁容）,结核病,淋病（性传播）,脑膜炎（脑和脊髓感染）,伤寒,痢疾,猩红热、风湿热、咽喉感染,脓毒，尿道感染,肺炎、脑膜炎,霍乱,寄生虫类,利什曼原虫属,盘尾丝虫,疟原虫属,血吸虫,锥虫属,吴策线虫,出现内部和外部病斑,失明,疟疾,血吸虫病（痢疾和肝损坏）,昏睡病,丝虫病（淋巴管和腺体发炎）,16,疫苗专题知识讲座,基因工程疫苗的作用,强调细胞免疫,传统疫苗强调体液免疫,直到20世纪90年代，细胞免疫的问题才受到重视。,尤其是对癌症、艾滋病这样严重的疑难杂症细胞免疫比体液免疫更重要。,1996年两位澳大利亚的科学家由于发现了细胞免疫及免疫系统在对抗病毒感染过程中的MHC抗原而分享了当年的诺贝尔生理奖和医学奖。,17,疫苗专题知识讲座,基因工程疫苗设计理念,新一代疫苗的设计思想有了很大的改变。表现在：,尽可能同时,调动细胞免疫,和,体液免疫,两个系统以获得最佳效果,删除致病基因,，,保留,致病物,引起免疫,反应能力的,片段,安全、高效,18,疫苗专题知识讲座,基因工程疫苗特点,删除了致病基因,专一性增强,免役原性较好,细胞免役和体液免役同时起作用,安全、高效,19,疫苗专题知识讲座,基因工程疫苗种类,亚基疫苗：利用病原物的某一部分制造的疫苗。,肽疫苗：利用抗原决定簇小肽作为疫苗,活体重组疫苗,细菌疫苗,恶性疟原虫疫苗,免疫避孕疫苗,抗独特型抗体疫苗,双特异性抗体,自身免疫疫苗,治疗性疫苗,乙肝治疗性疫苗,单纯疱疹病毒疫苗,麻风病治疗性疫苗,肿瘤疫苗,爱滋病疫苗等等,20,疫苗专题知识讲座,亚基疫苗的优点与不足,优点,避免了直接使用病原物而使受试者可能致病的危险,利用纯化蛋白质作为免疫源，可以避免由于外源蛋白、核酸的混杂引起的各种副作用,单独使用特异蛋白能够增强免疫效果。,不足,纯化单一蛋白质十分昂贵，,纯化蛋白质的构象可能与体内的不同，从而使抗原性发生改变,亚基疫苗不具有感染性，不能激活MHCI分子，很难激活杀伤性T细胞，免疫反应较弱,亚基,疫苗：,利用,病原,物的,某一,部分,制造,的疫,苗。,对于那些在培养基上无法培养的致病物质，,科学家可以先分离出和克隆出他们的抗原决定簇的基因，,然后在其他载体系统中表达。,人们把这种通过基因克隆获得的疫苗称为亚基疫苗。,适合于无法,培养的致病物,21,疫苗专题知识讲座,亚基疫苗例子,单纯疱疹病毒疫苗,口蹄疫病毒疫苗,22,疫苗专题知识讲座,单纯疱疹病毒疫苗,单纯疱疹病毒疫苗(HSV)：属于疱疹病毒科疱疹病毒亚科，它可以在神经节中潜伏。该病毒衣壳是类脂蛋白构成的20面体，蛋白种类至少33种，一半是糖蛋白。,HSV病毒的基因组为双链线状DNA，长度为152.5kb。,它可以引起性病、严重的眼部感染以及脑炎，还是一种致癌病毒。,不论是灭活的还是减毒的单纯疱疹病毒作为疫苗预防HSV感染，被接种者都会有患癌症的风险。,无致癌活性的亚基疫苗就是防止HSV的最佳选择。,23,疫苗专题知识讲座,制备亚基疫苗,将抗体与HSV-1或HSV-2抗原反应，能有效的治疗HSV感染的疾病。,将HVS-1的,衣壳糖蛋白D分离出来,注射,老鼠体内,产生抗体,抗HSV,抗体,将糖,蛋白,D基,因分离,改造D基因,去除C端跨膜序列区域,注射,24,疫苗专题知识讲座,疱疹病毒衣壳蛋白D定位,25,疫苗专题知识讲座,口蹄疫病毒疫苗,对于猪和牛具有很强的毒性。全世界每年要消耗10亿美元用于灭活疫苗。,FMDV是单链RNA病毒。,能诱导产生抗体的衣壳,蛋白1（VP1）分离出来,逆转录,合成cDNA,限制性内切酶酶解,导入,E.coli,载体,免役学方法筛选,VP1基因的表达产物,VP1产物是一种融合蛋白，全长396个氨基酸，包括MS2噬菌体的复制酶的一部分和FMDVVP1蛋白。,融合蛋白的表达是受PL启动子-cI受体系统控制。,表达的融合蛋白可以诱导产生FMDV的抗体。,26,疫苗专题知识讲座,肽疫苗,肽疫苗：利用抗原决定簇小肽作为疫苗,例子：,独特型肽疫苗：将肿瘤特异性抗原以融合蛋白或非融合蛋白的形式表达出来，然后制备成的疫苗。,热休克蛋白（HSP）-肽复合体疫苗,27,疫苗专题知识讲座,HSP-肽疫苗,HSP-肽疫苗含有多种肿瘤特异性抗原，避免了抗原的复杂分离，克服了抗原多变性而造成肿瘤疫苗应用范围小的问题；,HSP的保守性，克服由于MHC多型性而造成肿瘤疫苗无法在大量患者中通用的缺陷；,HSP-肽疫苗不需要佐剂，HSP本身能够激活较强的细胞免疫；,HSP-肽疫苗可诱发长效T细胞免疫，持续时间长，且具有记忆功能。,28,疫苗专题知识讲座,热休克蛋白,HSP是一类进化上十分保守,存在范围十分广泛的蛋白质,具有分子伴侣的作用,29,疫苗专题知识讲座,分子伴侣,概念：,一类参与蛋白质的准确折叠和组装过程的辅助蛋白，是一类进化十分保守的蛋白质家族，广泛存在于生物体内。,特点：,保守性；无专一性；广谱性。,作用：,是与新生肽或部分折叠蛋白结合，加速其折叠或组装成天然构象的进程；其方式是与没有折叠或部分折叠的蛋白质疏水表面结合，诱发正确的构象，并防止其相互聚集或错误折叠。,功能,：胁迫保护；转运蛋白；调节基因转录和,DNA,复制；组装细胞骨架。,30,疫苗专题知识讲座,动物病毒,31,疫苗专题知识讲座,肽疫苗制备,衣壳蛋白1（VP1）,C端的3个肽段,及N端的3个肽段,C1（141160）,C2（151160）,C3（200213）,N1（924）,N2（1732）,N3（2541）,分别连接转运蛋白,提高小肽的稳定性,注入豚鼠,C1（141160）肽段,在豚鼠体内产生了,足以抵御可蹄疫病毒,FMDV感染的抗体,C1（141158）,和C3（200213）,两个肽段连接成长肽,免疫豚鼠,可以不以内感载体蛋白,就能够激发豚鼠,产生高水平的抗体,不足是所需肽段的剂量是灭活的FMDV的1000倍。,解决办法：把VP1基因的C1（142160）序列与具有强免疫原性的载体蛋白乙肝核心蛋白基因连接起来，这种融合蛋白自发组装成“27nm”的颗粒，而142160肽段刚好位于颗粒外表面，这种颗粒具有极高的免疫原性。,32,疫苗专题知识讲座,肽疫苗结构,33,疫苗专题知识讲座,肽疫苗的多抗原决定簇,34,疫苗专题知识讲座,肽疫苗的不足,抗原决定簇的肽段不能太长，而且要连续,有的抗原决定簇的氨基酸可能分布在不同的区域，这样制造困难,要求肽段构像必须与完整病毒上的抗原决定簇构像一致,选择的单一抗原决定簇必须要有足够的免疫原性,35,疫苗专题知识讲座,肽疫苗的优点,具有高度特异性,价格低廉,良好的免疫原性,可能成为传统疫苗的替代品,36,疫苗专题知识讲座,活体重组疫苗,利用基因工程方法对细菌和病毒进行改造，可以是非致病性微生物，通过基因通过改造使之携带并表达某种特定病原物的抗原决定簇基因，产生免疫性，也可以是致病性微生物，通过基因工程改造方法修饰或去掉毒性基因，保持免疫原性。,37,疫苗专题知识讲座,活体疫苗的特点：,抗原决定簇的构象与致病物抗原构象相同或相似,免疫原性较好,38,疫苗专题知识讲座,活体重组疫苗的载体条件,要有稳定的减毒表型,生活史中不能与宿主染色体整合,可以表达出有免疫原性的外源序列,操作简便,接种以后不会长期保留在体内,39,疫苗专题知识讲座,活体疫苗例子,霍乱疫苗,A1肽上插入四环素抗性基因，使得A1肽失活，再制成无毒活体疫苗,霍乱致病物是肠毒素，它是1个A亚基、5个B亚基构成，,A亚基具有ADP糖基化的活性，能够激活腺苷环化酶，,具有两个功能区，A1和A2肽，,A1肽包括毒性区，由192个氨基酸构成，A2肽连接AI肽和B亚基，,B亚基与肠黏膜细胞受体结合。,40,疫苗专题知识讲座,活体疫苗制备,A1肽基因中间有550bp的片段,即183个氨基酸残基被删除了,连接酶连接到质粒上,导入含有四环素,抗性的A1失活,的霍乱菌中,同,源,重组,缺失A1片段,含四环素抗性失活A1片段,含缺失A1片段共整合细胞,活体疫苗菌株,无肠毒素,无毒性,41,疫苗专题知识讲座,缺失霍乱毒素A1肽示意图,42,疫苗专题知识讲座,牛痘病毒疫苗天花,痘苗病毒是最复杂的一类病毒，属于痘病毒科。,天花是曾经危险人类的最可怕病毒之一，现在已于1980年世界卫生组织宣布已经灭绝。,43,疫苗专题知识讲座,痘苗病毒基因组,187kb双链DNA构成，共编码200种蛋白质，链末端有发夹结构，约有10kb的倒置重复序列。,倒置重复区 独特序列区域 倒置重复区,10kb 180kb 10kb,感染人类、其他脊椎动物和无脊椎动物,感染细胞其病毒DNA在细胞质中复制，DNA聚合酶、RNA聚合酶以及mRNA的加帽以及多聚腺苷化酶由病毒自身编码,44,疫苗专题知识讲座,构建重组痘苗病毒示意图,45,疫苗专题知识讲座,痘苗病毒载体的重组过程,46,疫苗专题知识讲座,重组活体痘苗病毒的条件,外源基因不能有内含子，痘苗病毒尚无剪切功能,外源基因要在痘苗病毒的非必需基因区插入，插入后不能影响痘苗病毒的正常复制、免疫原性及其他重要基因的表达，同时插入外源基因后痘苗病毒的毒性不能提高；,外源基因两侧要有同源序列，以利于重组；,要选择合适的攻毒量及攻毒时间，以创造在细胞内进行同源重组的最适条件；,要有简便易行的方法对重组的痘苗病毒进行筛选,47,疫苗专题知识讲座,重组痘苗病毒疫苗的优点,可以在最接近于自然感染的情况下表达外源抗原；,可以在宿主体内复制，从而加大抗原的量，诱导激活更多的B细胞、T细胞；,在病毒基因组中插入一个或多个外源抗原进一步减弱它本身的致病性；,痘苗病毒基因组较大，因而插入外源基因容量大,48,疫苗专题知识讲座,重组痘苗病毒疫苗的缺点,对免疫功能不足的受体如爱滋病患者接种后，可能引起严重的病毒感染,解决方法：将人白细胞介素2的基因插入痘苗病毒载体中，白细胞介素2能够加强免疫系统T细胞的反映，从而限制病毒的扩增，减少不必要的感染,49,疫苗专题知识讲座,流感病毒疫苗,流感病毒属于正粘病毒科，它是负链RNA病毒，大小13.6kb，基因组由8个单链负链RNA组成，编码10个多肽。,流感病毒表面的,血凝集素,与细胞表面的含,N-乙酰神经氨酸酶,的粘蛋白受体结合，通过细胞胞吞作用进入细胞，进入细胞后病毒脱去外壳，暴露负链RNA，该RNA进入细胞核转录出正链RNA，以此为模板复制大量的负链RNA以及病毒蛋白质，通过出芽形成病毒颗粒。,流感病毒核糖核蛋白RNP有4种：NP、PB1、PB2、PA。NP是核衣壳的主要成分，PB1、PB2、PA与病毒转录和复制有关,50,疫苗专题知识讲座,流感病毒生活史,51,疫苗专题知识讲座,流感病毒疫苗载体的制备,去污剂裂解病毒,甘油梯度离心,氯化铯-甘油梯度离心糖衣壳蛋白RNP纯化,紫,外,线,照射RNP,破坏RNA,不影响RNP活性,外源基因替代NP基因,重组的DNA置于T7或SP6启动子,转录重组RNA,T7聚合酶催化,脱氧核糖核酸酶以除去DNA模板,15min,PBS缓冲液稀释,转染细胞,52,疫苗专题知识讲座,流感病毒疫苗载体的优越性,流感病毒了解较深入,应用基础广,灭活或减毒流感疫苗较安全,易于培养、检测、纯化,流感病毒可以诱导IgA介导的黏膜免疫（黏膜免疫在人体HIV过程中起着重要的作用，利用流感病毒载体可以获得高效的HIV疫苗）,流感病毒表面抗原极易变异，因此可重复利用这些变异株作用不同病原体的疫苗载体，有利于同时感染多种病原物的病人的治疗。,53,疫苗专题知识讲座,流感病毒疫苗载体的不足,基因组小，外源基因容量小,基因组中与复制无关的非必需区尚不清楚,54,疫苗专题知识讲座,细菌疫苗及其他,抗细菌疫苗,由于抗生素的使用，抗细菌疫苗研究进展缓慢，,抗生素的不足：,并非所有的细菌都能够使用抗生素治疗，,抗生素的滥用出现很多抗抗生素的菌株，,抗生素需要冷藏，热带地区保存比较困难。,55,疫苗专题知识讲座,抗细菌疫苗,例子：rickettsia rickettsii是一种专性生活于胞间革兰氏阴性细菌，能够引起洛基山出血热，该细菌不能培养生长，治疗很困难,科学家克隆了该菌的一种主要表面抗原的编码基因，把它表达出来作为亚基疫苗，发现接种后的小鼠能够有效抵抗该病菌的侵染。,56,疫苗专题知识讲座,其他疫苗,恶性疟原虫疫苗,免疫避孕疫苗,抗独特型抗体疫苗,双特异性抗体,自身免疫疫苗,治疗性疫苗,乙肝治疗性疫苗,单纯疱疹病毒疫苗,麻风病治疗性疫苗,肿瘤疫苗,爱滋病疫苗,57,疫苗专题知识讲座,DNA疫苗免疫,又叫基因免疫或核酸免疫。,1993年Wolff等人意外到发现将DNA直接注射入小鼠骨骼肌肉细胞后可引起特异性的免疫反应，而且这种免疫反应可以持续2个月以上。从此DNA免疫就成为全世界研究的热点。,1994在日内瓦召开专题会议将这种疫苗定义为核酸疫苗，1994-1995年，世界卫生组织和美国科学院分别开会讨论DNA免疫的应用前景，认为DNA免疫开创了疫苗学的新纪元。,58,疫苗专题知识讲座,核酸疫苗种类,DNA疫苗,RNA疫苗,59,疫苗专题知识讲座,核酸疫苗的特点与优越性,第一，能够,诱导细胞免疫和体液免疫,（B与T细胞免疫），对疑难杂症的预防和治疗有重要的意义,第二，,更安全,（1、作为亚单位疫苗。不存在减毒疫苗所潜在转阳危险，2、裸DNA是质粒来运载，不需要使用病毒运至靶细胞，避免病毒载体的危险性，以及宿主对病毒载体的免疫性，比活疫苗更安全）,第三，,工艺较蛋白质的简单，,提纯容易，适于大规模生产，成本相对较低。,第四，,稳定性较好,（比蛋白质），保存时间较长，便于运输,第五，一次注射可以获得对,多种疾病的免疫能力,（任何DNA片段都可以插入到质粒中制成疫苗，而且在同一质粒上可以同时容纳一个以上的抗原基因），所以多个病原体基因可以装载在一个质粒中，减少免疫时的多次注射的不舒适不方便,第六，,接种途径多样化,（皮下、皮内、肌注、基因枪注射、口服、喷雾等）,60,疫苗专题知识讲座,核酸疫苗的局限性,DNA疫苗可能与宿主整合，从而有可能破坏正常的细胞的功能，,目前免疫原性较低,61,疫苗专题知识讲座,常见的核酸疫苗,轮状病毒,乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒,单纯疱疹病毒,狂犬病毒,结核杆菌,疟疾等,开展了DNA疫苗的研究,62,疫苗专题知识讲座,核酸疫苗的研究状况,DNA疫苗的应用研究1993年3年开始,难治的感染性疾病,自身免疫缺陷疾病,过敏性疾病,肿瘤性疾病的预防与治疗领域,已经做了大量的动物实验,显示出广泛的,应用前景,流行性感冒病毒 乙肝病毒,人类免疫缺陷病毒 狂犬病毒,淋巴细胞性脉络丛脑炎病毒 疟原虫,支原体及肿瘤的预防与治疗研究,64,疫苗专题知识讲座,核酸疫苗例子,将流感病毒的核心蛋白抗原（NP）,基因克隆到表达载体中,直接注入,小鼠骨骼肌细胞,产生,针对,多种,亚型,的杀,伤性,T细胞,用流感病毒,去感染免疫过的小鼠，,小鼠的存活率,比对照提高了50%。,核心蛋白抗原（NP）非常保守,包膜蛋白极易变异，难于被免疫系统逐一识别,65,疫苗专题知识讲座,丙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒（HCV）的,核心抗原,DNA免疫动物，获得了针对HCV核心抗原的体液免疫及细胞免疫。,从这些例子中可以发现一些,疑难杂症,可以,DNA免疫,而,得到治疗,。,比如肝炎，是现在难于控制的疾病，如果DNA免疫方法得到进一步的完善，肝炎有望得到治疗。,66,疫苗专题知识讲座,癌症治疗的核酸疫苗,用于癌症治疗：向小鼠体内注射编码,抗体可变区的基因质粒,产生抗独特型抗体,，,抗体可变区基因疫苗,用于治疗,B淋巴瘤细胞,，,T细胞受体独特型基因疫苗,可治疗,T淋巴瘤,把编码,人癌胚抗原（CEA）的质粒,注入小鼠舌中，引起针对人CAE的,独特型,细胞免疫和体液免疫，为治疗结肠癌、乳腺癌、肺癌带来希望。,67,疫苗专题知识讲座,埃博拉病毒的DNA疫苗,1997年12月底，美国密歇根大学医学中心针对致死性埃博拉病毒的DNA疫苗动物实验获得成功,并于1998年进行了灵长目动物实验,Vical公司的研究表明，携带流感病毒基因的质粒免疫小鼠后能抵抗致死剂量病毒的攻击。,68,疫苗专题知识讲座,DNA疫苗的人体实验,人体实验有4种DNA疫苗进入临床I期实验，迄今，国外已有至少4种DNA疫苗被批准进入与期临床试验。,1996年美国FDA批准对健康志愿者进行,艾滋病DNA疫苗人体实验。,1998年MacGregor et al首次报道了DNA疫苗治疗艾滋病病毒HIV-1感染者的人体实验结果。,据最新消息，英国已经批准在今年8月开始进行一种专门针对非洲人的HIV DNA疫苗的I期临床试验（HIV A亚型，是肯尼亚和非洲其他地区最流行的HIV菌株）。,69,疫苗专题知识讲座,疟疾的DNA疫苗,1998年，美国海军宣布他们已经成功地在健康人体上检测了针对疟疾的DNA疫苗，他们认为这种疫苗最早得到广泛应用将可能在2005年。,70,疫苗专题知识讲座,DNA流感疫苗,默克公司已经建立了裸DNA流感疫苗候选物，其它的试验将很快得到针对疱疹、疟疾和HIV的DNA疫苗。,在几年内，其它疾病，如结核病、乳头状瘤、衣原体和肝炎也可能成为靶标。,目前正在进行一项患有淋巴瘤白细胞癌病人的临床试验，计划检验DNA疫苗是否不仅能阻止感染，而且也能激发已患病病人的免疫系统。,71,疫苗专题知识讲座,结核分支杆菌的DNA疫苗,由英国、巴西和瑞士等国科学家组成的研究小组进行的初步研究显示，一种选取了结核分支杆菌的基因片段DNA疫苗，可有效杀灭鼠体内的结核分支杆菌。,科学家们发现，感染了结核分支杆菌的“重病鼠”接受DNA疫苗注射后，其体内原本无效的免疫反应会大为增强，并会通过有效刺激T细胞而获得杀灭结核病菌的能力。,72,疫苗专题知识讲座,DNA疫苗,中国与德国合作开发的一种爱滋病DNA疫苗将于明年申请进入人体实验阶段。,如获批准，这将是中国的首次爱滋病疫苗人体实验。,1998年美国批准对爱滋病DNA疫苗进行人体试验,1998年报道了DNA疫苗治疗爱滋病病毒HIV-1感染的人体试验结果,英国对非洲HIVDNA疫苗的I期临床实验,1998年美国成功获得临床I期的疟疾实验,73,疫苗专题知识讲座,DNA疫苗发展前景,目前，DNA免疫接种的领域正在迅速发展，,DNA疫苗,DNA疫苗附加物，它有助于DNA进入靶细胞，或者起到佐剂的作用，刺激或诱导免疫应答。,首先获准上市的核酸疫苗，很有可能是采用菌体细胞衍生的DNA质粒。,在将来，其他类型的疫苗也可能采用RNA或用核酸分子和其他成分的复合物。,如奥地利的科学家用黄病毒家族中的RNA疫苗抵抗TBE森林脑炎病毒。小鼠实验表明该疫苗具有保护作用。,74,疫苗专题知识讲座,DNA疫苗的研发方向,进一步阐明基因疫苗作用机理的基础生物学,影响机体免疫应答效果的关键因素。,提高DNA疫苗的免疫效果是研究的主要方向，,构建真核表达载体时，选择合适的启动子；,质粒基本骨架中插入免疫刺激序列或选择具有免疫增强作用的载体；,细胞因子基因与外源基因共表达或共接种以提高外源基因编码抗原诱导的免疫反应。,质粒DNA的接种剂量、途径、程序及是否使用佐剂也可影响免疫反应效果。,75,疫苗专题知识讲座,DNA疫苗的作用,预防病毒、细菌或寄生虫，,可作为感染性疾病、肿瘤等的治疗性疫苗。,76,疫苗专题知识讲座,DNA疫苗可能的影响,DNA疫苗作为外源DNA是否可能会与宿主染色体整合？,是否会干扰宿主基因的正常功能？,是否会诱发宿主细胞恶变或自体免疫反应，例如诱生DNA抗体等，尚待澄清。,在实验动物体内观察到的对疫苗接种的免疫应答反应是否一定成为保护性免疫反应？,是否能代表该疫苗接种人体后的保护效力，还需进一步研究。,相信随着研究的深入和技术上的改进，DNA疫苗将会为人类造福。,77,疫苗专题知识讲座,特殊疫苗,艾滋病及疫苗,肿瘤疫苗,78,疫苗专题知识讲座,