麻醉学研究生毕业答辩交流.ppt

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言,手术中发生心跳骤停的概率不仅威胁着每一位接受手术治疗的患者的生命安全，其造成的脑缺血再灌注损伤也对现代临床麻醉的心肺脑复苏技术提出了课题和挑战；,近年来国内外关于脑缺血再灌注损害的研究普遍关注于各种预处理方法的脑保护作用，而本课题则主要研究甘露醇在脑缺血再灌注损伤后的干预效果；,目前，临床急救中甘露醇脱水属于心肺脑复苏的后处理措施，其给药时间问题还没有学者关注。本课题主要通过动物实验探讨甘露醇在心肺脑复苏中的最佳用药时机。,心跳骤停,后再灌注脑损,伤为临床,急救复苏,中,经常面临,的问题,如何减轻甚至逆转,脑损伤？,在临床心肺复苏中,一直列为,心肺复苏,后处理措施,早期应用甘露醇,液体梯度对抗复苏后,建立的血压梯度,甘露醇应用的最佳时机是？,材料与方法,实验动物,健康昆明小鼠,36,只，体重,355,克，雌雄随机，由山西省肿瘤研究所实验动物中心提供。,实验分组和干预,取健康小鼠,36,只随机将其分为,6,组各组,6,只分别为：,A,组：假手术组，手术但不给药,B,组：缺血再灌注损伤对照组，分离双侧颈总动脉，穿线但不结扎也不给药,C,组：再灌注即刻甘露醇干预组，恢复灌注即刻尾静脉注射甘露醇,D,组：再灌注,30min,甘露醇干预组，恢复灌注,30min,后给予甘露醇,E,组：再灌注,1h,甘露醇干预组，恢复灌注,1h,后给予甘露醇,F,组：再灌注,1.5h,甘露醇干预组，恢复灌注,1.5h,后给予甘露醇,实验路线图,模型制备,过程,麻醉,颈部正中切口,下颌下腺上翻,分离双侧颈总动脉,活结结扎动脉实现缺血,松开活结恢复灌注,模型制备成功标准,在结扎小鼠双侧颈总动脉后,以出现惊厥、呼吸深慢、心跳加快为缺血成功标准；,松开线结以血管远端充盈、变红、,观察,到搏动为恢复灌注成功标准。,观察指标和统计分析,1,小鼠的行为学改变,2,存活细胞数,3,变性细胞率,4,观察描述海马,CA1,区细胞形态学变化,实验数据以均数,标准差表示，采用单因素方差分析，组间进行多重比较，,SPSS17,统计软件分析，,P,0.05,认为有显著性差异。,研究结果,各组小鼠行为学改变,A组 小鼠自发活动，刺探，梳理毛发，翻正反射存在，无运动失调。,B组 小鼠活动减少，运动失调，翻正反射消失，疼痛反射消失，甚至昏迷。,C组 小鼠活动自如，多无运动失调，翻正反射存在，疼痛反射存在。,D、E、F组 小鼠活动减少，翻正反射和疼痛反射减弱或消失，精神困倦。,存活细胞数和变性细胞率,甘露醇即刻干预组小鼠海马,CA1,区存活细胞数明显高于缺血再灌注对照组（,P,0.05,）（,如表,1,）；变性细胞率明显低于缺血再灌注对照组（,P,0.05,）（,如表,2,），而与假手术组无显著差别（,P,0.05,），,30min,后甘露醇干预组与缺血再灌注对照组比较均无显著差别（,P,0.05,）。,组别,存活细胞数（个）,A,假手术组,23.00,0.89,*,B,缺血再灌注对照组,9.00,2.10,C,甘露醇即刻干预组,22.00,1.05,*,D,甘露醇,30min,干预组,10.83,1.60,E,甘露醇,1h,干预组,10.08,2.22,F,甘露醇,1.5h,干预组,9.08,1.99,表,1,各实验组小鼠海马,CA1,区正常细胞数的比较,组别,变性细胞率（,%）,A,假手术组,7.33,0.82,*,B,缺血再灌注对照组,30.67,1.75,C,甘露醇即刻干预组,8.17,0.41,*,D,甘露醇,30min,干预组,29.50,1.05,E,甘露醇,1h,干预组,29.83,0.75,F,甘露醇,1.5h,干预组,30.16,0.75,表,2,各实验组小鼠海马,CA1,区变性细胞率的比较,A,组 海马,CA1,区锥体细胞有层次分明的,45,层细胞结构,胞质均质红染,核大而圆，核膜完整，核仁清晰。细胞层向心侧间质呈纤维束样结构，排列整齐。,B,组 细胞层明显挤压状，仅见,3,层细胞结构，排列散乱。正常锥体细胞数明显减少，可见大量的变性坏死细胞，细胞肿胀，胞浆内有空泡形成，胞质嗜酸性增强，坏死细胞核呈梭形或三角形固缩，深染成蓝紫色。细胞间质水肿明显，呈团块状，纤维结构消失。,形态学结果,（,见图,1,）,C,组 绝大多数椎体细胞保持正常形态，,45,层细胞结构完好。纤维结构清晰可辨。细胞间质无水肿表现，比较,A,组更显稀松，呈现脱水表现。,D,、,E,、,F,组细胞层均存在受压表现，仅见,34,层细胞结构，排列散乱。虽然比较,B,组间质水肿有所改善，但纤维束样结构凌乱不清晰，并有断续现象。变性和坏死细胞数明显增多。,图,1,：各组小鼠海马,CA1,区神经细胞的形态学改变,A,组 假手术组,B,组 缺血再灌注损伤组,C,组 即刻甘露醇干预组,D,组,30,分钟甘露醇干预组,E,组,60,分钟甘露醇干预组,F,组,90,分钟甘露醇干预组,本课题,成功复制了郗东锋报告的昆明小鼠脑缺血再灌注损害实验动物模型,，该实验动物模型与其他同类研究的动物模型相比成本低廉，简单易行，成功率高，重复性好，能够获得相关研究结果，并能够进行脑缺血再灌注损伤后医学干预的评价研究。本课题实践结果与王雪红、邢春平等作者的报告一致。,讨 论,本实验,选取小鼠对缺血最敏感的海马,CA1,区为观察对象,，采用甘露醇对小鼠脑缺血再灌注后的不同时间点进行医学干预。观察结果表明：再灌注即刻甘露醇干预可使小鼠海马,CA1,区细胞形态，组织结构接近正常，无间质水肿表现，而恢复灌注,30min,1h,1.5h,后甘露醇干预的效果不明显。证实,早期给予甘露醇能够有效的逆转脑缺血再灌注损伤后细胞的变性水肿，但是再灌注,30,分钟后细胞水肿较为严重，再给予甘露醇救治基本无效,，从而为临床心肺脑复苏合理用药时间提供理论依据。,结 论,根据本课题观察结果作者认为：,1.,恢复血流灌注后血压梯度重新建立是细胞水肿形成的必备条件。再灌注,早期及时应用甘露醇,建立反相的渗透压梯度，可以,有效,防止脑缺血再灌注后细胞水肿的形成,；,2.,神经细胞水肿是脑缺血再灌注损伤的始动环节，有效防止细胞水肿的形成可以避免过氧化物、钙离子超载等不可逆细胞损害机制的发生,；,3.,本观察组发现：,再灌注,30,分钟后,给与甘露醇效果不明显,，似说明细胞水肿已经形成，多种细胞损害机制均已启动，再给予甘露醇救治,基本无效,；,有待进一步研究证实。,参考文献,1,李泽东,马静萍,.,阿司匹林预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,J.,中西医结合心脑血管病杂志，,2009,，,7,（,1,）：,56-57.,2,程谦涛,项洁,李继珍,.,辛伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血不同灌注时间窗脑损伤的保护作用及机制研究,J.,徐州医学院学报，,2005,，,25,（,6,）：,511-514.,3,阮耀,黄川锋,岳兴如,.,黄芪预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,J.,时珍国医国药，,2009,，,20,（,1,）：,103-104.,4,李茯梅,段小毛,王俊杰,.,银杏叶提取物对脑缺血再灌注大鼠线粒体,ATP,敏感性钾通道的影响,J.,中华中医药学刊，,2008,，,26,（,7,）：,1462-1463.,5,陈冀衡,王迪芬,安裕文,等异丙酚预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用,J.,中华麻醉学杂志,2001,，,21,（,6,）：,355-357.,6 Zhang CY,Shen WH,Zhang GY.Ischemia2induced release of cytochrome C from mitochondria and up-regulation of Bcl-2 expression in rat hippocampusJ .Sheng Li Xue 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